腹泻病例致泻性大肠埃希氏菌感染状况及耐药性分析

摘 要：目的：分析2019—2021年延庆区腹泻病例致泻性大肠埃希氏菌感染状况和耐药性。方法：现收集2019年1月—2021年12月延庆区医院内收治的腹泻患者肛拭子标本和粪便标本，进行荧光定量PCR检测，鉴定标本中致泻性大肠埃希氏菌的分型，对致泻性大肠埃希氏菌的耐药性进行分析。结果：2019—2021年共计1 112例样本，肠集聚性黏附性大肠埃希菌（Enteroaggregative Escherichia coli，EAEC）检出率为5.57%，肠道致病性大肠埃希菌（Enteropathogenic Escherichia coli，EPEC）检出率为1.80%、产肠毒素性大肠埃希菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）检出率为1.35%，肠道侵袭性大肠埃希菌（Enteroinvasive Escherichia coli，EIEC）检出率为0.27%，未检测出肠出血性大肠埃希菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）；2019年6月检出率最高，2020年7月、8月检出率最高，2021年7月检出率最高；2019年36株致泻性大肠埃希氏菌（Diarrheagenic Escherichia coli，DEC）对磺胺异噁唑耐药率（91.7%）最高，2020年32株DEC对磺胺异噁唑的耐药率（100.0%）最高，2021年32株DEC对萘啶酸的耐药率（75.0%）最高。结论：2019—2021年延庆区腹泻病例致泻性大肠埃希氏菌感染状况基本稳定，且其耐药性方面获得了较好的控制，临床效果比较明显。

关键词：腹泻病例；致泻性大肠埃希氏菌；耐药性

Analysis of Diarrheal Cases Caused by Diarrheagenic Escherichia coli Infection and Drug Resistance

LI Jingjing， CUI Yujuan， ZHANG Ying

（Beijing Yanqing District Center for Disease Control and Prevention， Beijing 102100， China）

Abstract： Objective： To analyze the infection status and drug resistance of diarrhea causing Escherichia coli in Yanqing district from 2019 to 2021. Method： Anal swab specimens and fecal specimens of diarrhea patients admitted to Yanqing district hospital from January 2019 to December 2021 were collected for fluorescence quantitative PCR detection to identify the types of diarrhea causing Escherichia coli in the specimens and analyze the drug resistance of diarrhea causing Escherichia coli. Results： A total of 1 112 samples were collected from 2019 to 2021. The detection rate of enteroaggregative Escherichia coli （EAEC） was 5.57%， the detection rate of enteropathogenic Escherichia coli （EPEC） was 1.80%， the detection rate of enterotoxic Escherichia coli （ETEC） was 1.35%， and the detection rate of enteroinvasive Escherichia coli （EIEC） was 0.27%， and no enterohemorrhagic Escherichia coli （EHEC） was detected. The detection rate was the highest in June 2019， July and August 2020， and July 2021. In 2019， 36 strains of diarrheagenic Escherichia coli （DEC） had the highest resistance rate to sulfamethoxazole （91.7%）， in 2020， 32 strains of DEC had the highest resistance rate to sulfamethoxazole （100.0%）， and in 2021， 32 strains of Dec had the highest resistance rate to nalidixic acid （75.0%）. Conclusion： The status of diarrhea causing Escherichia coli infection in diarrhea cases in Yanqing district from 2019 to 2021 is basically stable， and its drug resistance has been well controlled， and the clinical effect is relatively obvious.

Keywords： diarrhea cases; diarrheagenic Escherichia coli; drug resistance

致泻性大肠埃希氏菌（Diarrheagenic Escherichia coli，DEC）是引起人体以腹泻症状为主的全球性疾病的常见病原菌，在我国引起感染性腹泻的发病率居所有传染病之首[1]。致泻性大肠埃希氏菌分为产肠毒素性大肠埃希菌（Enterotoxigenic Escherichia coli，ETEC）、肠道侵袭性大肠埃希菌（Enteroinvasive Escherichia coli，EIEC）、肠道致病性大肠埃希菌（Enteropathogenic Escherichia coli，EPEC）、肠集聚性黏附性大肠埃希菌（Enteroaggregative Escherichia coli，EAEC）以及肠出血性大肠埃希菌（Enterohemorrhagic Escherichia coli，EHEC）。由于DEC在腹泻患者中检出率较高，且在相关的研究中指出[2]，受临床用药的影响，DEC出现了一定的耐药性，对腹泻病例的治疗效果造成了影响。为此，笔者针对2019—2021年延庆区腹泻病例致泻性大肠埃希氏菌感染状况、耐药性进行研究，为延庆区腹泻治疗提供可参考资料。

1 资料与方法

1.1 样本采集

现收集2019年1月—2021年12月期间延庆区医院内收治的腹泻患者作为本次研究对象，共计纳入745例，所有患者均出现腹泻症状，即粪便性状异常，具体包括水样便、稀便、米干便、血便和黏液便，每天排便次数在3次以上。对所有患者的社会信息学、人口学、临床症状等流行学因素进行统计，共计采集肛拭子标本以及粪便标本1 112份。

1.2 研究方法

1.2.1 制备细菌模板

将采集好的肛拭子标本以及粪便标本悬液接种在5 mL的大肠埃希氏菌（Escherichia coli，EC）肉汤（青海博生物）中，在37 ℃的环境下培养，培养时间为18 h。培养结束后取适量菌液在10 000 r·min-1条件下离心

5 min，去除上清液，沉淀使用灭菌超纯水悬浮，使细菌浓度达到3×109 CFU·mL-1，在100 ℃的水温下持续煮沸10 min，然后放入冰浴中冷却。冷却后在

10 000 r·min-1、4 ℃条件下离心10 min，最后取1 μL上清液作为PCR模板。

1.2.2 大肠埃希氏菌多重PCR分型

本次研究采用荧光定量PCR法对大肠埃希氏菌进行分型检测，即EPEC、ETEC、EIEC、EHEC和EAEC共5种分型。具体检测步骤按照ABT 5种DEC多重PCR检测试剂盒（青海博生物）中的相关说明进行操作。

1.2.3 细菌的分离和鉴定

将经多重PCR检测结果为阳性的肉汤培养液接种于大肠显色平板（青海博生物）上，培养形式为单菌落分离培养。从显色板上选取蓝绿色菌落，每个平板上可选取5～7个菌落，对其进行单个毒力基因确认实验，应用全自动微生物生化鉴定系统和革兰氏阴性细菌鉴定卡对上述菌株进行生化鉴定，结合生化鉴定结果和毒力基因结果共同判定DEC菌株。

1.2.4 药敏试验最低抑菌浓度测定

将经上述环节确定为DEC的32株菌株进行药敏试验。药敏试验方法为肉汤稀释法，试验操作过程以及试验结果判定参考上海星佰肠道细菌A3和A4药敏板说明书进行操作和判定。依据CLSI M100-S28中相关指标判定敏感、中介和耐药。抗菌药物包括氨苄西林、氨苄西林-舒巴坦、四环素、氯霉素、复方新诺明、头孢唑林、头孢噻肟、头孢他啶、头孢西丁、庆大霉素、亚胺培南、萘啶酸、阿奇霉素、磺胺异噁唑、环丙沙星、阿莫西林-克拉维酸、头孢噻肟-克拉维酸、头孢他啶-克拉维酸、多粘菌素E、多粘菌素B、米诺环素、阿米卡星和氨曲南共计23种抗菌药物。耐药菌株为R、中介菌株为I、敏感菌株为S，质控对照标准为大肠埃希氏菌国际标准株ATCC 25922。

2 结果与分析

2.1 5种致泻性大肠埃希氏菌检出率

2019—2021年共计1 112例样本，其中EAEC检出率为5.57%，EPEC检出率为1.80%、ETEC检出率为1.35%，EIEC检出率为0.27%，未检测出EHEC，具体见表1。

2.2 2019—2021年5种致泻性大肠埃希氏菌检出月份分布情况

2019年共检测样本367份，5种致泻性大肠埃希氏菌以6月的检出率最高，其次为7月和8月，再次为2月、4月、5月，在1月、10月、11月和12月期间均未检出。2020年共检测样本370份，

5种致泻性大肠埃希氏菌以7月和8月的检出率最高，其次为6月，再次为4月和5月，在1月、2月、

3月、11月和12月期间均未检出。2021年共检测样本375份，5种致泻性大肠埃希氏菌以7月检出率最高，其次为6月和5月，再次为4月、8月和10月，最后为9月，其中在1月、2月、3月、11月和12月

期间均未检出，见表2。

2.3 2019—2021年药敏试验结果

2019年，36株DEC对磺胺异噁唑耐药率（91.7%）最高，其次为四环素（69.4%），再次为氨苄西林（63.9%）和萘啶酸（55.6%）。DEC对多粘菌素B的敏感性（88.9%）最高，其次为头孢他啶，为83.3%，再次为头孢他啶-克拉维酸和多粘菌素E，均为（80.6%）。2020年，32株DEC对磺胺异噁唑的耐药率（100.0%）最高，其次为氨苄西林（75.0%），再次为四环素（71.9%）和萘啶酸（62.5%），剩余药物的耐药率均在60%以下。DEC对亚胺培南的敏感性（100.0%）最高，其次为头孢噻肟-克拉维酸、头孢他啶-克拉维酸、多粘菌素E、多粘菌素B和阿米卡星，均为90.6%，再次为头孢西丁（84.4%）。2021年，32株DEC对萘啶酸的耐药率（75.0%）最高，其次为氨苄西林（62.5%），再次为四环素（59.4%）和磺胺异噁唑（56.3%），剩余药物的耐药率均在50%以下。DEC对头孢他啶、头孢西丁、亚胺培南、头孢噻肟-克拉维酸以及头孢他啶-克拉维酸的敏感率均为100.0%，其次为多粘菌素E、多粘菌素B、阿米卡星敏感率均为96.9%，环丙沙星为93.8%，阿奇霉素90.6%。见表3。