内部质控样青瓜汁中毒死蜱、联苯菊酯含量的不确定度评定

摘 要：为提升果蔬中农药残留检验质量，本文采用气相色谱-质谱联用法测定青瓜汁中毒死蜱和联苯菊酯含量，外标法定量并评定测量不确定度。结果表明，毒死蜱含量为0.212 mg·kg-1，扩展不确定度为0.014 mg·kg-1，证书标准差为0.022 mg·kg-1，|Z|值为0.77；联苯菊酯含量为0.227 mg·kg-1，扩展不确定度为0.015 mg·kg-1，证书标准差为0.020 mg·kg-1，|Z|值为1，测试结果满意。此研究有助于监测实验室检测能力，提高检验工作质量。

关键词：气相色谱-质谱联用法；青瓜汁；毒死蜱；联苯菊酯；不确定度

Evaluation of Uncertainty of Chlorpyrifos and Bifenthrin Contents in Internal Quality Control Samples of Cucumber Juice

CHENG Mei， SUN Leilei， YANG Shengmei*， ZHU Xinyue

（Wuwei City Food Inspection Testing Center， Wuwei 733000， China）

Abstract： In order to improve the quality of pesticide residues in fruits and vegetables， the contents of chlorpyrifos and bifenthrin in cucumber juice were determined by gas chromatography-mass spectrometry， quantified by external standard method， and the uncertainty was assessed. The results showed that the content of chlorpyrifos was 0.212 mg·kg-1， the extended uncertainty was 0.014 mg·kg-1， the standard deviation of certificate was 0.022 mg·kg-1， and the value of |Z| was 0.77. The content of bifenthrin was 0.227 mg·kg-1， the extended uncertainty was 0.015 mg·kg-1， the standard deviation of the certificate was 0.020 mg·kg-1， and the value of |Z| was 1. The test results were satisfactory. This study is helpful to monitor the laboratory testing ability and improve the quality of inspection work.

Keywords： gas chromatography-mass spectrometry; cucumber juice; chlorpyrifos; bifenthrin; uncertainty

本文采用《食品安全国家标准 植物源性食品中208种农药及其代谢物残留量的测定 气相色谱-质谱联用法》（GB 23200.113—2018）[1]规定的QuEChERS前处理方法和气相色谱-质谱法（Gas Chromatography-Mass Spectrometry，GC-MS）测定内部质控样青瓜汁中的毒死蜱和联苯菊酯含量，通过对结果进行全面分析并计算不确定度，得出影响检测准确性的关键因素，为利用气相色谱-质谱联用外标法进行果蔬农残分析时不确定度评估提供参考依据[2]。

1 材料与方法

1.1 试剂、材料与仪器

乙腈、乙酸乙酯（色谱纯），美国赛默飞世尔公司；青瓜汁中毒死蜱、联苯菊酯质控样（CTI-SP-06009），空白基质质控样品（CTI-SP-06008），华测检测认证集团股份有限公司；丙酮中毒死蜱溶液标准样品、正己烷中联苯菊酯溶液标准样品，农业农村部环境保护科研监测所。

Trace 1310 GC-TSQ 8000 EvoGC-MS/MS联用仪，美国赛默飞世尔科技公司；Sio-6512全自动样品制备系统、QuEChERS前处理试剂盒，北京本立科技有限公司；N-EVAP 112氮吹仪，美国Organomation公司；JA503电子天平，上海浦春计量仪器有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 样品前处理

称取10.000 g样品于50 mL整合管中，依次加入10 mL乙腈、1颗氧化锆振子和提取剂包，旋紧上盖，经Sio-6512全自动样品制备系统处理。之后移取1 mL上清液转移至5 mL离心管，并在40 ℃的水浴条件下通过氮吹法将其浓缩至接近干燥状态。最后使用乙酸乙酯定容至1 mL，并通过0.22 μm过滤膜过滤，得到待测样品[1]。

1.2.2 标准溶液配制

采用1 mL移液器分别吸取100 μg·mL-1的两种农药标准溶液0.5 mL，用乙酸乙酯定容至100 mL容量瓶，此混合标准溶液浓度为0.5 mg·L-1。用1 mL移液器分别吸取0.1、0.2、1.0、2.0 mL和10.0 mL的混合标准溶液，用乙酸乙酯逐级稀释，用10 mL容量瓶定容配制标准工作溶液。分别取5个空白基质溶液氮气吹干，依次加入1 mL上述的标准工作溶液复溶，通过0.22 μm的有机微孔滤膜，配制成0.005、0.010、0.050、0.100 mg·L-1和0.500 mg·L-1的基质混合标准工作溶液。

1.2.3 仪器条件

GC条件：使用TG-5SILMS型石英毛细管柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；氦气为载气，恒流为1.0 mL·min-1；进样量为1.0 μL，不分流进样；进样口温度为270℃，升温程序见表1。

MS/MS条件：采用电子轰击源，其温度设定为290 ℃；离子化能量配置为70 eV；质谱传输接口的工作温度为280 ℃；使用多反应监测（Multi-Reactions Monitoring，MRM）模式进行扫描，碰撞气压强（氩气，0.5 MPa）。

1.3 数据处理

本文利用TraceFinderTM 3.3进行数据采集与处理，Microsoft Excel 2016进行数据统计。

1.4 数学模型建立

质控样中农药残留量的计算公式为

式中：X为质控样中农药残留量，mg·kg-1；c为基质混合标准工作溶液中待测物质的质量浓度，mg·L-1；v为质控样溶液最终定容体积，mL；f为稀释倍数；A为质控样中待测物的色谱峰面积；m为所称质控样的质量，g；As为基质混合标准工作溶液中相应物质的色谱峰面积[1]。

2 结果与分析

2.1 不确定度来源分析

根据数学模型和对实验过程的分析，采用气相色谱-质谱联用法测定青瓜汁中毒死蜱和联苯菊酯含量的不确定度来源包括标准溶液配制、标准曲线拟合、样品前处理、样品重复测定和GC-MS/MS联用仪[3-4]。

2.2 不确定度分量评定

2.2.1 标准溶液配制引入的相对标准不确定度urel（c）

（1）标准溶液质量浓度引入的相对标准不确定度urel（c1）。本研究中毒死蜱、联苯菊酯标准溶液的质量浓度均为100 μg·mL-1，从标准物质证书查得二者的相对扩展不确定度Urel（c1）为3%，包含因子k=2，由此得到标准溶液质量浓度引入的相对标准不确定度为

（2）标准溶液稀释定容引入的相对标准不确定度urel（c2）。在制备农药标准溶液的过程中，使用了1 mL移液器与100 mL A级容量瓶各1次来配制混合标准溶液。同时，利用1 mL移液器移取0.1 mL和1.0 mL溶液各3次，利用10 mL A级容量瓶4次，配制系列基质混合标准工作溶液[5]。移液器按照矩形分布（），容量瓶按三角分布（），容量允差见表2[6-7]。实验期间，实验室内的温度控制在（20±5）℃，标准溶液使用乙酸乙酯定容，乙酸乙酯的体积膨胀系数为0.001 38 ℃-1，同样按照矩形分布（）处理。基于上述条件，计算了各个分量的相对标准不确定度，详细结果见表2。

标准溶液稀释定容引入的相对标准不确定度为标准溶液配制引入的相对标准不确定度为

2.2.2 标准曲线拟合引入的相对标准不确定度urel（r）

将按照1.2.2配制的基质混合标准溶液进行仪器分析，每个浓度重复测定2次，共计测定10次（n=10），具体结果见表3。以农药标准溶液的质量浓度为横坐标，以农药定量离子峰面积为纵坐标，利用最小二乘法构建标准曲线，得到农药线性回归方程为y毒死蜱=

质控样品测量6次（p=6），通过标准曲线计算的目标分析物毒死蜱浓度分别为0.208、0.204、0.216、0.220、0.211 mg·L-1和0.214 mg·L-1，通过标准曲线计算的目标分析物联苯菊酯浓度分别为0.230、0.223、0.233、0.231、0.221 mg·L-1和0.225 mg·L-1，从而得到通过标准曲线计算的目标分析物毒死蜱和联苯菊酯的平均浓度（）分别为0.212、0.227 mg·L-1。而标准溶液平均浓度（）为0.133 mg·L-1，则由标准曲线拟合引入的相对标准不确定度分别为

2.2.3 样品前处理引入的相对标准不确定度urel（p）

（1）质控样品称量引入的相对标准不确定度urel（m）。称取10.000 g质控样品，电子天平检定证书显示≤50 g时，天平最大允许误差为0.005 g，按矩形分布（），则质控样品称量引入的相对标准不确定度为

（2）样品提取和净化引入的相对标准不确定度urel（v）。从1.2.1可知，在样品提取液和净化液的移取与定容过程中，分别使用10 mL移液器1次、1 mL移液器2次，1 mL移液器容量允差为0.001 mL，10 mL移液器容量允差为0.006 mL，移液器遵循矩形分布（）。实验室内温控条件维持在（20±5）℃，乙腈和乙酸乙酯的体积膨胀系数（β）分别为0.001 37 ℃-1和0.001 38 ℃-1，按照矩形分布考虑（）。各因素导致的相对标准不确定结果见表4。

2.2.4 样品重复测定引入的相对标准不确定度urel（X）

在重复性条件下，对内部质控样品进行前处理，采用外标法进行了6次平行测定，测定结果见表5。

2.2.5 GC-MS/MS引入的相对标准不确定度urel（e）

由校准证书可知，GC-MS/MS联用仪的相对扩展不确定度Urel（e）为0.02，包含因子k=2，则由GC-MS/MS联用仪引入的相对标准不确定度为

2.3 相对合成标准不确定度urel（w）

综合考虑以上各个相对标准不确定度分量，得出测定青瓜汁中毒死蜱含量引入的相对标准不确定度为

测定青瓜汁中联苯菊酯含量引入的相对标准不确定度为

2.4 扩展不确定度

根据《测量不确定度评定与表示》（JJF 1059.1—2012）[4]，当采用95%的置信概率且包含因子k=2时，根据表5中两种农药含量测定的平均值，则毒死蜱在质控样青瓜汁中的扩展不确定度为