LC-MS/MS法快速分析保健食品中非法添加的11种降压类化学成分

摘 要：目的：建立液相色谱串联质谱（Liquid Chromatograph Tandem Mass Spectrometer，LC-MS/MS）法快速分析保健食品中非法添加的11种降压类化学成分的方法。方法：采用Kinetex 2.6 µm Phenyi-Hexyi 100 Å（100 mm×2.1 mm，5.0 µm）色谱柱进行分离，以0.01%甲酸水-乙腈为流动相梯度洗脱，流速为0.4 mL·min-1，离子源为ESI，正负离子检测模式，对降压类保健食品中非法添加的11种化学成分进行定性定量检测。结果：11种化学成分在1.0～250.0 ng·mL-1线性关系良好，相关系数（r）均大于0.997，检出限在0.004 2～0.170 0 ng·g-1，定量限在0.013～0.520 ng·g-1，在0.20 μg·g-1、1.25 μg·g-1和10.00 μg·g-1 3个加标水平下的回收率分别为74.9%～118.8%、82.1%～116.0%、93.5%～106.3%，连续6针精密度为1.3%～9.9%，日内精密度为1.9%～14.5%。结论：该方法操作容易，结果准确，适用于降压类保健食品中非法添加硝苯地平等11种化学成分的定性定量分析。

关键词：保健食品；降压类化学成分；高效液相色谱-质谱联用法

Rapid Analysis of 11 Antihypertensive Chemical Components Illegally Added in Health Food by LC-MS/MS Method

XU Fan， WU Leilei， CHU Tingting， SHI Xiaoyu

（Shiyan Institute of Food and Drug Inspection， Shiyan 442000， China）

Abstract： Objective： To establish a rapid method for the analysis of 11 antihypertensive chemical components illegally added in health food by liquid chromatograph tandem mass spectrometer （LC-MS/MS）. Method： The separation was performed on Kinetex 2.6 µm Phenyi-Hexyi 100 Å （100 mm×2.1 mm， 5.0 µm） column， and gradient elution was performed on 0.01% formic acid-acetonitrile as mobile phase at the flow rate of 0.4 mL·min-1. The ion source was ESI and the positive and negative ion detection mode was adopted. Qualitative and quantitative detection of 11 chemical components illegally added in antihypertensive health food was carried out. Result： The linear relationship between the 11 chemical components was good in the range of 1.0 ng·mL-1 to 250.0 ng·mL-1， the correlation coefficient （r） was greater than 0.997， the detection limit was 0.004 2～0.170 0 ng·g-1， and the quantitation limit was 0.013～0.520 ng·g-1. At 0.20 μg·g-1， 1.25 μg·g-1 and 10.00 μg·g-1， the recoveries were 74.9%～118.8%， 82.1%～116.0% and 93.5%～106.3%， respectively. The precision of 6 consecutive needles was 1.3%～9.9%. The intraday precision is 1.9%～14.5%. Conclusion： The method is easy to operate， accurate and suitable for qualitative and quantitative analysis of 11 chemical components such as nifedipine illegally added in antihypertensive health food.

Keywords： health foods; antihypertensive chemical compositions; liquid chromatograph tandem mass spectrometer

高血压是一种严重危害人类健康的慢性病之一，如不及时干预可引起全身大部分器官器质性改变[1]，严重时可致人死亡。虽然降压类化学成分起效迅速，疗效确切，市场应用广泛，但长期应用会不同程度地损害肝、肾等器官[2]。目前，在各类保健食品中添加化学成分的现象逐渐受到社会的关注[3]。在利益的驱使下，部分不良商家会在保健食品中大量非法添加降压类化学成分，导致消费者超量服用降压类药物，给身体带来不可预计的伤害[4]。液相色谱串联质谱（Liquid Chromatograph Tandem Mass Spectrometer，LC-MS/MS）法灵敏度高，分析时间短、范围广，分离能力强，自动化程度高，在检验检测行业应用广泛。本文建立LC-MS/MS法快速分析保健食品中非法添加的11种降压类化学成分的方法，为市场监管提供可靠的技术支持[4-5]。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器设备

降压类保健茶，市场购买。

11种降压化学成分标准物质为阿替洛尔、盐酸可乐定、盐酸哌唑嗪、硝苯地平、利血平、尼群地平、尼索地平、非洛地平、尼莫地平、氢氯噻嗪和卡托普利，纯度均大于99%，中国食药检院；甲醇、乙腈（质谱级），美国默克公司；甲酸、甲酸铵（质谱级），上海安谱实验科技有限公司；实验用水均为购置的娃哈哈纯净水。

AB SCIEX 4500 QTRAP高效液相色谱-质谱联用仪（配有ESI源，正负离子同时扫描），美国AB SCIEX公司。

1.2 标准溶液制备

精密称取11种降压化学成分标准物质适量，加甲醇分别制成0.5 mg·mL-1的标准物质储备液。再分别吸取各标准物质储备液0.01 mL，于同一10 mL量瓶中，用甲醇定容至刻度线，得浓度为0.5 μg·mL-1的混合标准储备液。

1.3 样品制备

取供试品适量，研细，精密称取一次服用剂量，（液体样品需蒸干），置50 mL量瓶中，加甲醇适量，超声溶解，放冷，加甲醇定容，摇匀，即得。

1.4 色谱条件

色谱柱：Kinetex 2.6 µm Phenyi-Hexyi 100 Å（100 mm×2.1 mm，5.0 µm）；柱温：40 ℃；流动相A：0.01%甲酸水溶液；流动相B：甲醇；流速：0.4 mL·min-1。梯度洗脱程序：0～1.0 min，5%B；1.0～1.5 min，5%B→35%B；1.5～6.0 min，35%B→95%B；6.0～8.0 min，95%B；8.0～8.1 min，95%B→5%B；8.1～11.0 min，5%B；进样量：2 µL。

1.5 质谱条件

离子源：ESI源；监测模式：正、负离子多离子反应监测模式；监测离子对及相关电压参数设定见表1；气帘气压力：35 psi；喷撞气压力：9 psi；离子化电压：正离子模式扫描电压5 500 V、负离子模式扫描电压-4 500 V；离子源温度：550 ℃；喷雾气压力：55 psi；辅助加热气压力：55 psi。

1.6 测定方法

分别取供试品溶液和标准物质溶液2 µL，注入液质联用仪，按标准曲线法计算11种降压化学成分含量。

2 结果与分析

2.1 质谱条件的优化

查阅化合物的分子式，在正、负离子扫描模式下，先手动进样浓度为100 ng·mL-1的混合标准物质溶液，查找11种化学成分的母离子及相应的2～3个子离子，再分别优化各成分的去簇电压和碰撞能，优化结果见表1。

2.2 方法学验证

2.2.1 线性范围、检出限和定量限

在空白基质中加入适量混合标准溶液，按照1.3样品制备方法，制备浓度为1.0 ng·mL-1、2.5 ng·mL-1、12.5 ng·mL-1、50.0 ng·mL-1、100.0 ng·mL-1、200.0 ng·mL-1和250.0 ng·mL-1的混合标准系列溶液，按照色谱和质谱条件进行实验。以浓度为横坐标，定量离子峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。由表2可知，11种降压类成分在1.0～250.0 ng·mL-1线性关系良好，相关系数（r）均大于0.997。表明该方法具有较高的灵敏度，能满足日常所需的检验要求。

2.2.2 回收率和精密度

在空白基质中分别添加0.20 μg·g-1、1.25 μg·g-1和10.00 μg·g-1 3个浓度水平的11种降压化学成分的混合标准溶液，进行回收实验，结果见表3。每个加标水平连续进样6次，计算峰面积相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD），得到连续6针的精密度，另每隔2～3 h进样一次，共进样6次，分别计算峰面积相对标准偏差，得到其日内精密度。11种降压类成分在低、中、高3种浓度下的回收率分别为74.9%～118.8%，82.1%～116.0%，93.5%～106.3%；连续6针精密度均小于10%，日内精密度均小于15%，表明该方法的重复性和准确性良好。

3 结论

本实验建立了LC-MS/MS法快速分析保健食品中非法添加的11种降压类化学成分的检测方法。该方法使用液质常用的温和流动相，运行时间为11 min，快速简便。该方法的重现性好，灵敏度以及回收率高，具有较高的可靠性和适用性。

参考文献

[1]黄雪芳.高血压病症中医辨证施治探讨[J].中国医药指南，2012，10（8）：569-570.

[2]魏志雄，刘丹丹.LC-MS/MS法检测降压类中成药及保健食品中非法添加的7种化学药[J].亚太传统医药，2014，10（11）：12-14.

[3]靳青果.两种方法检测降糖类和减肥类保健品中的化学降糖药物效果分析[J].北方药学，2015，12（9）：156-157.

[4]项昭保，伍晓玲，汪程远，等.色谱及其联用技术在保健食品非法添加药物检测中的应用研究进展[J].食品工业科技，2019，40（19）：338-344.

[5]杜秋瑶，张云峰，王继芬，等.超高效液相色谱-三重四极杆复合线性离子阱质谱法同时测定指印中36种降压药[J].色谱，2022，40（2）：182-189.

作者简介：徐凡（1988—），女，湖北十堰人，硕士，工程师。研究方向：食品药品化妆品检验检测以及食品药品化妆品标准研发。