富硒葛根粉中葛根素含量的测定方法

作者: 龙泽霞 杨芳

富硒葛根粉中葛根素含量的测定方法0

摘 要:目的:采用HPLC和LC-MS相结合的方法,建立了富硒葛根粉中葛根素含量的测定方法。方法:样品经70%乙醇提取,利用岛津Inertsil ODS-SP C18柱(250 mm×4.6 mm,5 µm)分离,以甲醇-0.3%磷酸(20∶80)为流动相,测定富硒葛根粉中葛根素含量。结果:在0.1~1.3 µg·mL-1,葛根素的线性关系良好,平均加标回收率为97.39%,RSD为1.08%。结论:HPLC法简便、快速,重复性好,可作为富硒葛根粉中葛根素含量的测定方法。

关键词:富硒葛根粉;葛根素;含量测定

Method for Determination of Puerarin Content in Selenium-Enriched Pueraria Powder

LONG Zexia, YANG Fang*

(Changde City Food Inspection Institute, Changde 415000, China)

Abstract: Objective: To establish a method for the determination of puerarin in selenium-enriched pueraria powder by HPLC and LC-MS. Method: The samples were extracted by 70% ethanol and the content of puerarin in selene-enriched pueraria powder was determined by using Shimadzu Inertsil ODS-SPC18 column (250 mm×4.6 mm, 5 µm) with methanol-0.3% phosphoric acid (20∶80) as mobile phase. Result: In the range of 0.1~1.3 µg·mL-1, the linear relationship of puerarin was good, the average recovery rate was 97.39%, RSD was 1.08%. Conclusion: HPLC is a simple, rapid and reproducible method for the determination of puerarin in selenium-enriched pueraria powder.

Keywords: selenium-enriched pueraria powder; puerarin; content determination

富硒葛根粉是由富硒葛根加工而成的一种预包装食品。葛根为豆科植物野葛的根。葛根具有较高的淀粉含量,富含黄酮、葛根素、三萜等多种活性成分。研究发现,富硒葛根粉中葛根素、异黄酮、皂苷等成分丰富。目前,国内外尚无统一的检测富硒葛根粉中葛根素的国家标准及地方标准。为了更好地控制葛根素的质量,保证产品的品质,本文参照相关文献[1-5],通过HPLC法测定葛根素的含量,并用LC-MS对葛根素的结构进行初步鉴定,为进一步完善葛根素的质量标准奠定基础[6-12]。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 样品

富硒葛根粉(批号:210902;批号:210519;批号:210615;批号:210703;批号:210709;批号:210810),湖南福千府生物科技有限公司。

1.1.2 试剂

葛根素标准品(批号:110715-202016,含量为94.0%),中国食品药品检定研究所;甲醇(色谱纯);乙醇(分析纯);磷酸(分析纯);纯化水。

1.2 仪器与设备

Waters e2695 HPLC;ABQTRAP 4500超高效液相色谱-三重四极杆质谱仪;MS105天平;JP008超声仪;涡旋振荡器;氮吹仪。

1.3 实验方法

1.3.1 葛根素标准溶液的配制

精密称取10 mg葛根素标准品于25 mL容量瓶内,加入70%乙醇使其溶解,定容至刻度,摇动均匀,取1 mL到100 mL容量瓶中,加入70%乙醇使其定容至刻度,摇动均匀,制得0.004 mg·mL-1的葛根素标准溶液。

1.3.2 样品前处理

将样品研磨成粉末并称取5 g(精确至0.000 1 g),放入具塞锥形瓶中,精密加入50 mL 70%乙醇,密塞,称定重量,超声波30 min,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过。精密吸取续滤液1 mL,置于100 mL容量瓶内,用70%的乙醇将其溶解,稀释到刻度,摇匀,用0.45 µm微孔滤膜过滤,上机测定。

1.3.3 色谱条件

色谱柱:岛津Inertsil ODS-SP C18柱(4.6 mm×250 mm,5 μm);流动相:甲醇-0.3%磷酸(20∶80);柱温:30 ℃;检测器:2489紫外检测器;检测波长:250 nm;流速:1.0 mL·min-1;进样量:10 μL。

1.3.4 质谱条件

采用正、负离子检测模式;电喷雾离子化(ESI);多反应监测模式SCAN;碰撞能量:2.5 V;雾化气流速:3 L·min-1;干燥气流速:10 L·min-1;加热气流速:10 L·min-1;加热气温度:450 ℃;接口温度:300 ℃;去溶剂温度:250 ℃。

2 结果与分析

2.1 测定条件的优化

①试验考察不同流动相(0.1%磷酸-甲醇、0.2%磷酸-甲醇、0.3%磷酸-甲醇)对化合物分离效果的影响。结果表明,0.1%磷酸-甲醇作为流动相时,化合物的分离效果和峰形最好。②试验考察了不同色谱柱[Hypersil BDS C18(200 mm×4.6 mm,5 μm)、Agilent ZORBAX SB-C18(200 mm× 4.6 mm,5 μm)、岛津Inertsil ODS-SP C18(250 mm×4.6 mm,5 µm)]对化合物分离效果和峰形的影响[13]。结果表明,岛津Inertsil ODS-SP C18色谱柱的响应比其他色谱柱好,且分离效果最优,化合物的峰形尖锐,能够达到分离目的。葛根素标准溶液以及实际样品的高效液相色谱图见图1。

2.2 标准曲线及最低检出限

配制葛根素质量浓度为0.1~1.3 µg·mL-1的系列标准溶液,以标准溶液的峰面积为纵坐标,浓度为横坐标,建立回归方程。结果表明,葛根素标准品的回归方程为Y=276 135.6X-6 860.0,r=0.999 8。葛根素在相应的浓度范围内线性关系良好,检出限为0.01 µg·mL-1。

2.3 精密度试验

精密吸取供试品溶液10 μL,注入HPLC仪,重复进样6次,分别计算色谱图中的葛根素峰面积的RSD值,试验重复6次。结果表明,RSD值为1.22%,仪器的精密度较好。

2.4 稳定性试验

取同一样品溶液,分别按照1.3.3的色谱条件进行操作;24 h内每隔2 h测定其峰面积。结果表明,葛根素的峰面积分别为113 851、113 673、111 180、112 099、111 649和112 790,相对标准偏差为0.97%(n=6)。

2.5 重现性试验

利用1.3.3的色谱条件分别对6批富硒葛根粉进行测定,计算葛根素的含量。结果表明,方法的相对标准偏差为0.90%,说明该方法具有良好的

重现性。

2.6 加标回收率试验

精密称取已知含量的富硒葛根粉2.5 g(精确至0.000 1 g),精密加入一定量葛根素对照品溶液,放入具塞锥形瓶中,加入70%乙醇50 mL,密塞,称定重量,超声30 min,放冷,再称定重量,用70%乙醇补足减失的重量,摇匀,滤过,精密吸取续滤液1 mL,置于100 mL容量瓶内;用70%乙醇将其溶解,稀释到刻度,按照1.3.3的色谱条件,计算平均加标回收率,结果见表1。

2.7 富硒葛根粉含量测定

采用1.3.3色谱条件对6批次的富硒葛根粉含量进行测定。根据测得的峰面积和标准溶液的浓度计算葛根素的含量。结果表明,葛根素含量分别为0.46 mg·kg-1、0.48 mg·kg-1、0.45 mg·kg-1、0.42 mg·kg-1和0.41 mg·kg-1。

3 结论

本文建立了高效液相色谱法测定富硒葛根粉中葛根素的方法。该方法的线性关系和精密度良好,简便,结果准确,重现性好,适用于富硒葛根粉中葛根素的含量测定,能够满足葛根素含量测定的需要。

参考文献

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基金项目:2023年度湖南省市场监督管理局科技计划项目“葛根粉检测技术及质量评价研究”。

作者简介:龙泽霞(1985—),女,湖南常德人,本科,工程师。研究方向:食品、药品等质量检验。

通信作者:杨芳(1976—),女,湖南常德人,本科,高级工程师。研究方向:食品、药品等的质量检验。E-mail:82482947@qq.com。

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