植物油中苯并[α]芘能力验证样品的制备与评价

摘 要：通过制备植物油中苯并[α]芘能力验证样品，并对其均匀性和稳定性进行评价，为实验室制作盲样和组织能力验证提供技术指导。以食用植物油为原料，制备2组不同浓度的苯并[α]芘能力验证样品，每组随机抽取10份样品按照GB 5009.27—2016方法测定样品中苯并[α]芘含量；将考核样品放置在常温环境条件下储存3个月，采用上述方法测定储存前后样品中苯并[α]芘含量，以评价样品的均匀性和稳定性。测定结果表明，样品的均匀性合格，样品在3个月内稳定性良好，可用于不同实验室检测植物油中苯并[α]芘能力验证。

关键词：苯并[α]芘；均匀性；稳定性；能力验证

Preparation and Evaluation of Proficiency Testing Sample of Benzo[α]pyrene in Plant Oil

CHENG Xiaoqing， PAN Tao， HUANG Zhan， XIE Kun*

（Sichuan Light Industry Research and Design Institute Co.， Ltd.， Chengdu 610084， China）

Abstract： The proficiency testing samples of benzo[α]pyrene in plant oils were prepared and evaluated for homogeneity and stability to provide technical guidance for laboratories to make blind samples and organize proficiency testing. Using edible plant oil as raw material， 2 groups of benzo[α]pyrene proficiency testing samples with different concentrations were prepared， and 10 randomly selected samples from each group were used to determine the benzo[α]pyrene content in the samples in accordance with the method of GB 5009.27—2016; the assessment samples were placed in ambient ambient conditions and stored for 3 months， and the samples before and after the storage were determined by the above method， to evaluate the homogeneity and stability of the samples. The results showed that the homogeneity of the sample was qualified and the stability of the sample was good within 3 months， which can be used for the proficiency testing of benzo[α]pyrene in plant oils in different laboratories.

Keywords： benzo[α]pyrene; uniformity; stability; proficiency testing

苯并[α]芘是一种常见的高活性间接致癌物，循环使用温度较高的植物油或者采用高温烹炸食物等都可能产生苯并[α]芘，对人体健康有很大威胁。《食品安全国家标准 食品中污染物限量》（GB 2762—2022）规定采用GB 5009.27—2016对食品中苯并[α]芘的含量进行测定，食用油脂及其制品中苯并[α]芘的最大限量为10 μg·kg-1[1]。

通过开展植物油中苯并[α]芘测定能力验证，对实验室检测食品中苯并[α]芘含量的技术能力进行评估，可帮助实验室了解实验室检测人员的技术能力和实验室管理水平，发现日常检测中可能存在的问题，提高检测工作质量。而能力验证样品的均匀性和稳定性是准确评价检测机构的技术水平的物质基础[2]，也是检测机构评价和挑选能力验证项目的重要依据[3]。因此，组织能力验证的关键是能力验证样品的制备和对所制备的能力验证样品的均匀性和稳定性的验证[4]。

目前较少见到关于苯并[α]芘能力验证样品制备的相关资料。本文通过制备植物油中苯并[α]芘能力验证样品，并对样品的均匀性和稳定性进行测试，为食品检测实验室制备苯并[α]芘质控样和组织开展能力验证提供技术支撑。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

市购食用植物油，规格5 kg/桶。

甲苯（C7H8）、乙腈（CH3CN）、正己烷（C6H14）、二氯甲烷（CH2Cl2），均为色谱纯，赛孚瑞化工邯郸有限公司；苯并[α]芘标准品（C20H12，CAS号50-32-8），含量99.80%，标准物质证书号71100，北京坛墨质检科技有限公司；苯并[α]芘检测专用小柱（分子印迹柱），深圳逗点生物科技有限公司。

1.2 仪器与设备

LC-20A高效液相色谱仪，日本岛津；BSA223S、BT125D电子天平（感量分别为0.01 mg和1 mg），赛多利斯；LC-SPE-24+固相萃取仪，上海力辰邦西仪器科技有限公司；N1-50氮吹浓缩仪，上海屹尧仪器科技发展有限公司。

1.3 样品制备

（1）浓度选择。从检测技术和考核关键点角度考虑，本次实验计划制备2组不同浓度的样品，低浓度组样品的浓度设计为检测方法GB 5009.27—2016[5]的3倍定量限左右，高浓度组样品参考GB 2762—2022[1]中油脂及其制品的限量值要求，浓度设计在10 μg·kg-1左右。

（2）制备方法。将食用植物油分装为2桶，每桶为2 L，分别加入1 mg·mL-1的苯并[α]芘标准溶液直至样品分别达到设计浓度，手动振荡3次，每次10 min，然后放置于室温条件下磁力搅拌。48 h后采用棕色玻璃样品瓶进行定量分装（每瓶约25 g），在分装的过程中一直保持搅拌。为保证样品的均匀性，每个浓度水平样品均由能力验证工作小组成员在实验室（环境控制：温度20～25 ℃、相对湿度≤60%RH）进行制备和定量分装，放入玻璃样品瓶中密封，制备成能力验证样品。分装后的样品，粘贴唯一性编号，并做好记录。样品编号为“23-QXXX”“23-GXXX”，字母“Q”“G”不用于区分两组样品，每个样品标识的“XXX”为3个随机数字，每个样品的标识均具有唯一性。样品组别仅可通过样品分配表判断，实验室无法从样品编号获得样品组别信息。

1.4 实验方法

1.4.1 苯并[α]芘检测

样品中苯并[α]芘含量依据《食品安全国家标准食品中苯并（a）芘的测定》（GB 5009.27—2016）[5]采用高效液相色谱法测定。仪器条件：荧光检测器激发波长为384 nm，发射波长为406 nm；色谱柱为Shim-pack GIST C18（4.6 mm×250 mm，5 µm）；柱箱温度为40 ℃；柱流速为1.0 mL·min-1；流动相为乙腈+水（9+1）。

称取0.4 g（精确到0.001 g）试样，加入5 mL正己烷，涡旋混合0.5 min，待净化。采用苯并[α]芘分子印迹柱，依次用5 mL二氯甲烷及5 mL正己烷活化柱子。将待净化液转移进柱子，待液面降至柱床时，用6 mL正己烷淋洗柱子，弃去流出液。用6 mL二氯甲烷洗脱并收集净化液到试管中。将净化液在40 ℃下氮气吹干，准确吸取0.4 mL乙腈涡旋复溶0.5 min，过微孔滤膜后供液相色谱测定。分别加0.02 mL浓度为100 ng·mL-1标准使用液到2组样品中，然后按上述方法进行实验，以测定样品加标回收率。同时做空白试验。

1.4.2 样品均匀性检验

从制备好的2组不同浓度水平样品中各随机抽取10份样品用于均匀性检验，每个样品重复测定2次。在短时间内由同一测试人员使用GB 5009.27—2016的测试方法，在相同测试条件下对样品的苯并[α]芘含量进行检测。

依据《能力验证样品均匀性和稳定性评价指南》（CNAS—GL003：2018）[6]，采用单因子方差统计分析法，通过F检验对2组样品的浓度水平进行均匀性检验。若F＜自由度为（f1， f2）及给定显著性水平α（通常为0.05）的临界值，则表明样品内和样品间无显著性差异，样品是均匀的。

1.4.3 样品稳定性检验

由于苯并[α]芘为较稳定化合物，且实验期间为高温天气，因此将样品在室温条件下存放3个月后测试其含量变化来验证长期贮存条件下样品的稳定性。从两组样品中各取3瓶样品放置于室温条件下3个月后对样品进行检测，每个样品在重复性条件下检测2次，验证样品的长期储存稳定性。

检测结果采用t检验法进行统计处理。以均匀性试验所得结果为参比数据，采用t检验方法进行稳定性检验。当t值小于显著性水平α（0.05）自由度为n1+n2-2的临界值，则表明2个平均值之间无显著性差异，即制备样品稳定。

2 结果与分析

2.1 质控结果

苯并[α]芘标准色谱图见图1，2组质控样品的加标回收率分别为85%和87%。

2.2 均匀性检验

由表1和表2可知，对2组共20个样品的40个检测结果进行统计计算，样品1的F值为2.96，样品2的F值为1.13。根据自由度及给定显著性水平α（通常α=0.05），从F表查询得到临界值为3.02，2组样品的F值均＜3.02，说明2组样品的组内和组间不存在显著性差异，样品的均匀性符合能力验证的要求。

2.3 稳定性检验

如表3所示，将室温存储3个月后的2组各3个样品的检测结果与3个月前的检测结果进行比较，计算得t值分别为1.319和1.444。当显著性水平α=0.05，自由度为（n1+n2-2）时，查表得t临界值为2.063 9，2组样品的t值均＜2.063 9。稳定性测试结果表明，样品存放3个月后测得的结果与3个月前的检测结果之间不存在显著性差异，样品的稳定性符合要求。

3 结论

本研究制备了2组不同浓度的食用油苯并[α]芘能力验证样品，均匀性和稳定性检验显示，2组样品的均匀性和稳定性均满足能力验证要求，可为各个实验室制作盲样考核和能力验证样品提供数据参考。

参考文献

[1]国家卫生健康委员会，国家市场监督管理总局.食品安全国家标准 食品中污染物限量：GB 2762—2022[S].北京：中国标准出版社，2022.

[2]刘梅，尹相余.浅谈能力验证的选择及结果应用[J].中国检验检测，2021，29（2）：98-100.

[3]中国合格评定国家认可委员会.能力验证的选择核查与利用指南：CNAS—GL032：2018[EB/OL].（2020-09-08）[2024-01-08].https：//www.cnas.org.cn/rkgf/sysrk/rkzn/2018/03/889154.shtml.

[4]梁晖，何明辉.能力验证试验样品的制备[J].科技传播，2016，8（4）：121.

[5]国家卫生和计划生育委员会，国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品中苯并（a）芘的测定：

GB 5009.27—2016[S].北京：中国标准出版社，2016.

[6]中国合格评定国家认可委员会.能力验证样品均匀性和稳定性评价指南：CNAS—GL003：2018[EB/OL].（2020-09-08）[2024-01-08].https：//www.cnas.org.cn/rkgf/sysrk/rkzn/2018/03/889121.shtml.

作者简介：成晓情（1981—），女，湖北天门人，硕士，工程师。研究方向：食品质量安全及检测技术。

通信作者：谢坤（1989—），男，四川成都人，硕士，工程师。研究方向：食品质量安全及检测技术。E-mai1：xiekun@sclii.com。