不同豆制品中大豆异黄酮的种类和含量分析

摘 要：目的：建立高效液相色谱法同时测定不同豆制品中大豆苷、大豆黄苷染料木苷、染料木素、大豆素和大豆黄素6种大豆异黄酮的含量分析方法。方法：利用高效液相色谱仪，将供试品用80%甲醇溶解提取，用C18色谱柱分离，以乙腈和磷酸水溶液（pH=3）进行梯度洗脱，流速为1.0 mL/min，用紫外检测器在波长260 nm下进行检测。结果：大豆异黄酮各组分在各自范围内线性关系良好。大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素相对标准偏差为0.05%～0.23%，检出限为0.2 μg/mL。结论：该方法回收率高，灵敏度高，且操作简单，快速高效，可应用于实际样品中不同种类的大豆异黄酮的分析测定。

关键词：大豆异黄酮;高效液相色谱法;含量分析

Types and Content Analysis of Soy Isoflavones in Different Soybean Products

LIU Liting， SHI Fei， LIU Ye， CHEN Shanshan

（Shaanxi Bureau of Quality and Supervision， Xi’an 710048， China）

Abstract： Objective： To establish a high performance liquid chromatography method for the simultaneous determination of daidzin， glycitin， genistin， daidzein， daidzein， daidzein （daidzin） in different soybean products. glycitein） content analysis method of 6 kinds of soybean isoflavones. Method： Using high performance liquid chromatograph， the test sample was dissolved and extracted with 80% methanol， separated by C18 chromatographic column， and eluted with acetonitrile and phosphoric acid aqueous solution （pH=3） for gradient elution at a flow rate of 1.0 mL/min. The detector detects at a wavelength of 260 nm. Result： All components of soybean isoflavones had a good linear relationship within their respective ranges. The relative standard deviations of daidzein， daidzein， genistein， daidzein， daidzein， and genistein were 0.05%～0.23%， and the detection limit was 0.2 μg/mL. Conclusion： The method has high recovery rate， high sensitivity， simple operation， rapidity and high efficiency， and can be applied to the analysis and determination of different kinds of soybean isoflavones in actual samples.

Keywords： soy isoflavones; high performance liquid chromatography; content analysis

异黄酮是黄酮类化合物中的一种，主要存在于豆科植物中，其中大豆中的含量最高，故特别称为大豆异黄酮[1]。大豆异黄酮是强力的抗氧化物，能够降低自由基对于低密度脂蛋白的氧化，降低低密度脂蛋白—胆固醇在动脉中沉积，减少动脉硬化的风险;能有效地预防和抑制白血病、骨质疏松、结肠癌、肺癌、胃癌、乳腺癌和前列腺癌等多种疾病的发生，尤其是对乳腺癌和前列腺癌有积极的预防和治疗作用[2]。国内有关大豆异黄酮检测方法的研究已有很多，包括分光光度法[3]、液相色谱法[4]、医学免疫法和色谱-质谱联用法[5]等。由于不同豆制品的成分均较复杂，大豆异黄酮组分含量会随着实际生产环境和制作工艺发生相互转化，本研究建立了一种快速简便、灵敏度高的高效液相色谱法，用于检测不同豆制品中大豆异黄酮的含量，并比较不同豆制品中大豆异黄酮的种类。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

固体类：豆腐乳、豆瓣酱、豆腐、豆芽、豆干、豆皮、腐竹和辣条;液体类：大豆油、豆乳、豆浆、酱油;不同豆类：扁豆、黑豆、黄豆、红小豆和豇豆，所用样品均为市售常见样品。

试剂：甲醇（色谱纯）;二甲基亚砜（色谱纯）;正己烷（色谱纯）;磷酸（分析纯）;大豆苷标准品;大豆素标准品;大豆黄苷标准品;大豆黄素标准品;染料木苷标准品;染料木素标准品。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪（岛津SPD-20A）;超声波清洗仪（昆山市超声仪器KQ-500E）;离心机（湖南湘仪实验室仪器开发有限公司）;酸度计[梅特勒-托利名仪器（上海）有限公司F2系列]。

1.3 实验方法

1.3.1 样品前处理

（1）固体。精密称取固体样品2.0 g，加5 mL正己烷超声脱脂10 min，再加10 mL 80%甲醇溶液溶解至50 mL离心管，超声萃取10 min，离心机离心（8 000 r/min，3 min），取有机层用0.45 μm有机滤膜过滤，HPLC分析含量。

（2）液体。移液枪精密吸取液体样品2.0 mL于50 mL离心管中，加5 mL正己烷超声脱脂10 min，再加10 mL 80%甲醇溶液溶解至50 mL离心管，超声萃取10 min，离心机离心（8 000 r/min，3 min），取有机层用0.45 μm有机滤膜过滤，HPLC分析含量。

1.3.2 仪器条件

色谱柱：C18 ODS-3（5 μm，4.6 mm×250 mm）;柱温：30 ℃;流动相：流动相A为乙腈，流动相B为磷酸水溶液（pH=3）;梯度洗脱，如表1所示;流速：1.0 mL/min检测波长：260 nm。

1.3.3 标准溶液配制

精密称取干燥的大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆黄素、大豆素和染料木素各4 mg，用二甲基亚砜溶液定容至10 mL为标准储备溶液，浓度均为400 mg/L。从大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆黄素、大豆素和染料木素的6种标准贮备溶液中分别吸取0.2 mL、0.4 mL、0.6 mL、0.8 mL和1.0 mL;加入等体积的水，用50%二甲基亚砜溶液定容至10 mL，得到浓度分别为8.0 mg/mL、16.0 mg/mL、24.0 mg/mL、32.0 mg/mL和40.0 mg/mL的标准系列。

2 结果与分析

2.1 标准曲线与线性范围

标准曲线与线性范围见表2，6种大豆异黄酮R2均在0.9以上，表明线性关系良好。

2.2 检出限

选取样品分别加标，进行逐级稀释，仪器检测，可检出的最小浓度为该样品的检出限，最终得到该实验可达到的检出限为0.2 μg/mL。

2.3 精密度

吸取8.0 μg/mL的大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素标准品溶液，重复进样6次，以测得的峰面积为指标，测定检测方法的精密度。测得大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素的RSD值分别为0.05%、0.07%、0.06%、0.17%、0.23%和0.05%（n=6），表明实验精密度良好。

2.4 样品检测结果

2.4.1 固体类样品中不同种类大豆异黄酮

固体类样品中不同种类大豆异黄酮如表3所示。由以上结果分析可得，不同固体样品中大豆异黄酮总含量比较为腐竹>豆干>豆皮>豆腐>豆瓣酱>豆芽>豆腐乳>辣条。由此可判断加工工序越少，对大豆异黄酮含量损失越少，且保留的种类越丰富，加工样品原料种类越单一，其含量较高。

2.4.2 液体类样品中不同种类大豆异黄酮

液体类样品中不同种类大豆异黄酮如表4所示。由以上实验结果可得，不同液体样品中大豆异黄酮含量比较为豆乳>豆浆>酱油>大豆油。其中大豆油含量较低有可能是因为油脂含量过高，未能将异黄酮全部提出，后期实验过程应针对油脂含量高的样品进行进一步优化。液体样品中异黄酮含量明显低于固体样品，且豆乳、豆浆含量相差不大。

2.4.3 不同豆类中不同种类大豆异黄酮

不同豆类中不同种类大豆异黄酮如表5所示。由以上实验结果可得多种豆类产品并不是均含有大豆异黄酮，其中黄豆含量最高，豇豆含量次之。

3 结论

大豆异黄酮作为一种天然抗氧化剂，可用于人们日常生活保健，不同种类、不同加工方式影响产品中异黄酮的种类及含量。本研究建立高效液相色谱法测定不同样品中大豆苷、大豆黄苷、染料木苷、大豆素、大豆黄素和染料木素6种大豆异黄酮。通过分析比较得出，固体类样品中的大豆异黄酮含量高于液体类样品，且加工处理方式越单一，对其含量影响越小;豆类产品中多数不含有大豆异黄酮，黄豆含量最高。该方法回收率高，灵敏度高，且操作简单，快速高效，可应用于实际样品中不同种类的大豆异黄酮的分析测定。

参考文献

[1]郅轲轲，刘子源，张润东，等.大豆异黄酮功效及提取方法的研究进展[J].化纤与纺织技术，2021，50（8）：43-44.

[2]余辉艳，池亚菲，李红睿，等.大豆卵磷脂联合大豆异黄酮改善大鼠学习记忆损伤及脑血管保护作用[J].首都医科大学学报，2021，42（6）：993-999.

[3]何恩铭，沈瑞池，王伟等.紫外分光光度法测定豆渣提取物中大豆异黄酮含量的研究[J].大豆科学，2013，32（6）：818-820.

[4]李永利，李杰，姜阳，等.UHPLC快速测定豆浆粉中大豆异黄酮[J].化学试剂，2022，44（4）：590-593.

[5]刘琴，朱媛媛，白兴梁.不同种类大豆中大豆异黄酮含量及抗氧化性比较[J].北京工商大学学报（自然科学版），2012，30（6）：45-51.