12种中草药提取物对杀鲑气单胞菌的抑制效果

摘要：为观察中草药对杀鲑气单胞菌（Aeromonas salmonicida）的体外抑菌效果，采用水煎煮法提取黄柏、黄芩等12种中草药活性成分，首先采用纸片法判断中草药有无抑菌作用，然后使用试管二倍稀释法测定具有抑菌效果的2种中药的最小抑菌浓度。结果表明，黄芩和连翘抑菌效果较好，黄芩的最小抑菌浓度为10 mg/mL，连翘的最小抑菌浓度为20 mg/mL，其余10种中草药抑制杀鲑气单胞菌效果不佳。

关键词：中草药;杀鲑气单胞菌（Aeromonas salmonicida）;抑制作用

图文分类号：S942.1

虹鳟鱼细菌病主要有弧菌病、细菌性肠炎、疖疮病、柱状病以及细菌性肾病[1]。疖疮病的病原是杀鲑气单胞菌[2]，其宿主较为广泛，鲑科鱼类是疖疮病的易感鱼类[3]，感染后一周左右发病，病原经皮肤入侵，在躯干内形成小的感染病灶，肌肉组织坏死，出血、浆液渗出，患部皮肤软化，形成疖疮，也可经过鳃和口感染，进而侵入内脏，形成病灶。目前，治疗疖疮病主要以使用抗生素为主，长期使用抗生素会导致细菌耐药性、环境污染等问题，不适宜目前的绿色健康养殖的理念。中草药在水产养殖疾病预防和治疗中得到广泛应用[4]，如预防水霉病[4-6]、维氏气单胞菌[7]、链球菌[8]有较好的效果。

1材料与方法

1.1菌株及药品

杀鲑气单胞菌（Aeromonas salmonicida）分离于发病虹鳟鱼体内，黄柏、黄芩、金银花、板蓝根、苦参、大黄、鱼腥草、穿心莲、黄芪、大青叶、黄柏、连翘购自同仁堂药店。

1.2方法

称取10 g所选药物， 加入超纯水100 mL浸泡0.5 h， 煎煮0.5 h， 不时进行搅拌， 药液用纱布过滤， 滤渣再次煎煮、过滤， 合并药液后，水浴浓缩至50 mL，药液浓度即为200 mg/mL， 5 000 r/min离心，取上清，0.22 μm滤膜过滤除菌。配制好的药物分装于1.5 mL灭菌离心管中， -20 ℃保存备用。

1.3药物的初筛

采用纸片扩散法，杀鲑气单胞菌（1.0×108 CFU/mL）均匀涂布于脑心浸液培养基平板上， 将空白药敏纸片平贴于平板上（4片/平板），每个空白纸滴加5 μL药液， 28 ℃培养24 h，用精度1 mm尺子测量抑菌环的直径， 并记录结果。

1.4最小抑菌浓度测定

根据初筛结果，选取抑菌效果较好的药物进行最小抑菌浓度测定。在1.5 mL离心管进行，第1管中加入900 μL液体培养基，第2管至第12管分别加入500 μL培养基，第1管加入100 μL药液，混匀后吸出500 μL加入第2管，依次2倍稀释，直至最后1管。每个管加入10 μL菌液，28 ℃振荡培养24 h，观察有无细菌生长。另外，做1个阳性对照（加菌不加药）和1个阴性对照（不加药不加菌）。

2试验结果

2.1初筛药敏结果

用12种中草药药液对杀鲑气单胞菌进行药物敏感性测试，参照常用抗生素药物敏感性试验判断标准分析，杀鲑气单胞菌对黄芩和连翘2种药物敏感，其余药物不敏感（见表1）。

2.2最小抑菌浓度

依据2.1药敏初步筛选试验结果，按照1.4中的方法测定黄芩和连翘对杀鲑气单胞菌的最小抑菌浓度，结果显示黄芩的最小抑菌浓度为10 mg/mL，连翘的最小抑菌浓度为20 mg/mL。

3结论

本试验选取了黄柏、黄芩、金银花、板蓝根、苦参、大黄、鱼腥草、穿心莲、黄芪、大青叶、黄柏、连翘12种常见中草药对杀鲑气单胞进行了体外抑制试验，结果显示10种中草药无任何效果，黄芩和连翘抑菌效果较好，可以在试剂生产中应用，而且黄芩和连翘市场价格便宜，可操作性强，具有一定的实用价值。

参考文献：

[1] 王炳谦.中国鲑鳟鱼养殖[M].北京：中国农业出版社，2015：205-217.

[2] 贾丹，毕保良，严晖，等.云南省养殖虹鳟病原菌的分离鉴定及药物敏感性分析[J].科学养鱼，2019（12）：41-42.

[3] 韩姝伊，魏凯，陈春山，等.细鳞鲑疖疮病的病原鉴定及防治药剂筛选[J].中国兽医杂志， 2019，55（4）：113-118.

[4] 马国红，张延华，宋理平.中草药制剂在水产养殖中的应用效果[J].河北渔业，2017（12）：48-51.

[5] 蔺凌云，袁雪梅，潘晓艺，等.4种中草药提取物对水霉的体外抑菌试验[J].安徽农学通报，2015，21（2）：11-12.

[6] 刘云鹏，刘帛屿，赵阳，等.中草药治疗水霉病的配比研究[J].河北渔业，2019（3）：23-26.

[7] 张桓桥，商宝娣，张效平，等.31种中草药及其复方对维氏气单胞菌体外抑菌研究[J].淡水渔业，2022，52（3）：74-81.

[8] 姚丽，董春燕，陈江凤，等.30种中草药对鲟鱼源海豚链球菌的体外抑菌作用[J].水产科学，2020，39（1）：111-116.

Bacteriostatic effects of extracts from 12 kinds of Chinese

herbal medicines against Aeromonas salmonicida

ZHANG Zhenguo YOU Hongzheng HAO Shuang

LUO zhang QIAN Hong FENG Shouming

（1.Tianjin Animal Disease Preventive and Control Center， Tianjin，300400，China;

2.Tianjin Fishery Research Institute， Tianjin，300221， China）

Abstract：In order to observe the antibacterial effect of Chinese herbal medicine on Aeromonas salmonicida in vitro， 12 active components of Chinese herbal medicine such as Phellodendron amurense and Scutellaria baicalensis were extracted by water dec octing method.Firstly， the paper method was used to judge whether the Chinese herbal medicine had antibacterial effect， and then the test tube double dilution method was used to determine the minimum inhibitory concentration of the two Chinese herbal medicines with antibacterial effect.The results showed that Scutellaria baicalensis Georgi and Forsythia suspensa had good antibacterial effect.The minimum inhibitory concentration of Scutellaria baicalensis Georgi and Forsythia suspensa were 10 mg/mL and 20 mg/mL respectively.The other 10 Chinese herbal medicines had poor inhibitory effect on Aeromonas salmonicida.

Key words：Chinese herbal medicine;Aeromonas salmonicida;antibacterial effect