几种药食两用类物质对酒精性胃黏膜损伤的保护及其抑制幽门螺旋杆菌作用

摘要：通过体外抑制幽门螺旋杆菌和抗炎试验，考察了猴头菌、茯苓、甘草、黄芪、葛根、蒲公英、陈皮几种药食两用类物质的提取物对幽门螺旋杆菌的抑制作用以及缓解炎症的效果，结果表明：黄芪提取物、甘草提取物具有良好的体外抑制幽门螺旋杆菌的作用；葛根提取物、甘草提取物具有较好的缓解炎症的效果。通过构建人胃黏膜上皮细胞GES-1损伤模型，明确了猴头菌和茯苓的提取物对酒精损伤的人胃黏膜上皮细胞GES-1增殖具有促进作用。根据试验结果，筛选出猴头菌、茯苓、黄芪和甘草4种药食两用物质的提取物，将其按照一定比例混合，制成3种组方，考察其对大鼠急性酒精性胃黏膜损伤的保护作用，结果表明：3种组方对胃黏膜损伤均具有一定的保护作用，组方2（猴头菌43.0%、茯苓35.5%、黄芪15.9%、甘草5.6%）在0.375 g/kg时对大鼠急性酒精性胃黏膜损伤具有更好的保护作用。

关键词：药食两用；胃黏膜损伤；幽门螺旋杆菌；抑菌；抗炎

中图分类号R285文献标识码A

文章编号0517-6611（2023）06-0157-06

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.06.038

Protective Effects of Several Dualpurpose Substances on Alcoholic Gastric Mucosal Injury and Inhibition of Helicobacter pylori

WANG Yuyang1，2，YANG Yan1，WU Di1 et al

（1.Key Laboratory of Edible Fungi Resources and Utilization （South）/Ministry of Agriculture，National Engineering Research Center of Edible Fungi/Institute of Edible Fungi，Shanghai Academy of Agricultural Sciences，Shanghai    201403;2.College of Food Sciences & Technology，Shanghai Ocean University，Shanghai  201306）

AbstractIn vitro inhibition of Helicobacter pylori and antiinflammatory experiments were conducted to investigate the inhibitory effects and relief of Hericium erinaceus，Wolfiporia cocos，Glycyrrhiza uralensic，Astragalus membrahaceus，Pueraria lobata，Taraxacum mongolicum，tangerine peel and other medicinal and edible substances on Helicobacter pylori.The results show that Astragalus membranceus extract and Glycyrrhiza uralensic extract had a good effect of inhibiting Helicobacter pylori in vitro;Pueraria lobata extract and Glycyrhiza uralensis extract have a good effect of relieving inflammation.By constructing a GES1 injury model of human gastric mucosal epithelial cells，it is clear that the extracts of Hericium erinaceus and wolfiporia cocos can promote the proliferation of human gastric mucosal epithelial cells GES1 damaged by ethanol.According to the experimental results，four medicinal and edible extracts of Hericium erinaceus，Wolfiporia cocos，Astragalus membranaceus and Glycyrrhiza uralensic were screened out，and they were mixed according to a certain ratio to make 3 kinds of prescriptions to investigate their effects on the acute alcoholic gastric mucosa of rats.Tthe results show that the three prescriptions have a certain protective effect on gastric mucosal injury，and the prescription 2 （Hericium erinaceus 3.0%，Wolfiporia cocos 35.5%，Astragalus membranaceus 15.9%，Glycyrrhiza uralensic 5.6%） is 0.375 g/kg It has a better protective effect on acute alcoholic gastric mucosal injury in rats.

Key wordsMedicine and food;Gastric mucosal injury;Helicobacter pylori;Antibacterial;Antiinflammatory

近年来，随着人们生活节奏的加快，过度饮酒、刺激性食物等外源性损伤因素引起的胃损伤逐渐增多，特别是饮酒引起的急性胃黏膜损伤病变临床日益常见［1］。人们饮酒后，高浓度酒精在胃内滞留，侵蚀胃黏膜组织，使胃黏膜屏障受损，直接引起胃黏膜急性炎症，黏膜出现充血、水肿、出血、糜烂及溃疡形成等症状［2］。随着饮酒人数的增加，酒精性胃黏膜损伤相关疾病的发病率呈逐年上升趋势［3］。幽门螺旋杆菌（Helicobacter pylori） 是一种革兰氏阴性微需氧杆菌，也是胃黏膜损伤、慢性胃炎和胃十二指肠溃疡发生的主要因素之一［4］。现有临床治疗胃黏膜损伤的药物还存在一些弊端，如副作用大、易复发和需长期使用等［5］。因此，从营养预防的角度出发，寻找安全、有效、能保护胃黏膜免受损伤的有效产品，具有重要的实际应用价值。

在胃黏膜保护方面，已有研究表明，猴头菌、茯苓、黄芪和陈皮等药食两用类物质对胃黏膜损伤具有一定的保护作用［6-11］。杨行堂等［12-14］研究发现，甘草、葛根和蒲公英具有预防幽门螺旋杆菌感染及降低胃癌发病危险性的作用。Raish等［15］研究发现，苦瓜多糖可以通过抗炎作用机制对胃黏膜损伤起保护作用，这一机制与炎性细胞因子介导的抗氧化能力有关。关于利用猴头菌和茯苓、黄芪、甘草等组方进行胃黏膜损伤方面的研究鲜见报道，因此，笔者通过体外抗炎，抗幽门螺旋杆菌和酒精损伤的人胃黏膜上皮细胞GES-1增殖模型，探讨猴头菌等几种药食两用类物质潜在的胃黏膜损伤修复活性，筛选出几种药食两用类物质制成组方，建立无水乙醇诱导的大鼠胃黏膜损伤模型，探讨组方对大鼠胃黏膜损伤的保护作用，为胃黏膜损伤类疾病的防治提供理论和试验依据，也为猴头菌、茯苓等药食两用类物质应用于胃黏膜保护类功能食品的开发利用提供科学依据。

1材料与方法

1.1试剂与仪器

细菌脂多糖（Lipopolysaccharides，LPS）、Alamar Blue  美国Sigma公司；DMEM 培养基、RPMI1640培养基、胎牛血清，美国Gibco公司；青霉素、链霉素，美国Amersco公司；葡萄糖、氯化钠、磷酸等，国药集团药业股份有限公司； 脑心浸液粉、哥伦比亚琼脂，上海信裕生物科技有限公司；脱纤维羊血，上海源叶生物科技有限公司。AL104 电子天平，梅特勒-托利多仪器（上海）有限公司；水套式三气培养箱，美国Thermo Fisher Scientific 公司；JJ-CJ-2FD 金净洁净操作台，吴江市净化设备总厂；Synergy HT96 孔板酶标仪，美国Bio-Tek公司。

1.2供试细胞与菌株

RAW264.7细胞株（小鼠巨噬细胞株）购自中国科学院上海生命科学研究院细胞资源中心。用含体积分数10%胎牛血清、100 U/mL青霉素及100 U/mL链霉素的DMEM培养基，在37 ℃ 5% CO2条件下培养，取对数生长期细胞，用无色RPMI1640培养基将细胞稀释到5×105个/mL。

幽门螺旋杆菌标准菌株Helicobacter pylori。ATCC43504和临床标准菌株Helicobacter pylori SS1 购自广东省微生物菌种保藏中心。幽门螺旋杆菌培养基：脑心浸液粉9.6 g、哥伦比亚琼脂23.4 g、蒸馏水780 mL，121 ℃高压灭菌20 min后降至46 ℃后加入33～40 mL去纤维羊血。脑心浸液肉汤：蛋白胨10.0 g、脑心浸液粉17.5 g、氯化钠5.0 g、葡萄糖2.0 g、磷酸氢二钠2.5 g、蒸馏水1 000 mL，121 ℃高压灭菌20 min，备用。

1.3样品制备

称取猴头菌、茯苓、黄芪、蒲公英、陈皮、甘草、葛根，分别按照重量比加10倍的蒸馏水浸泡0.5 h后，用文火煎煮1.0 h，倒出药液，药渣再加等量蒸馏水煎煮1.0 h，2次药液合并，8 000 r/min离心15 min，倒出上清液，蒸发浓缩后冻干。将冻干后的各类药液破碎成粉即为提取物。

精确称取猴头菌、茯苓、黄芪、蒲公英、陈皮、甘草、葛根提取物各50 mg溶于5 mL蒸馏水中，沸水浴30 min，冷却至室温，13 000 r/min离心15 min，过0.22 μm滤膜备用。

1.4不同提取物抑制幽门螺旋杆菌的活性试验

1.4.1幽门螺旋杆菌菌悬液制备。

将保存的菌株活化后转接到培养基上，37  ℃、10% CO2，5% O2孵育72 h。用脑心浸液肉汤洗下菌落，收集菌液。以脑心浸液肉汤校正菌悬液浓度，测量抑菌圈所用菌悬液浓度约2×108 CFU/mL，测定最小抑制浓度用1×108 CFU/mL菌悬液。

1.4.2抑菌圈的测定。

采用牛津杯法对抑菌圈进行测定。取直径9 cm，培养基厚度约4 mm的羊血培养基的平板，每块平板加入约100  μL 幽门螺旋杆菌ATCC43504/SS1的菌悬液，立即用涂布棒涂布均匀。然后，每个培养皿放置4个牛津杯，呈均匀分布。往每个杯中加入100 μL不同的样品溶液。37  ℃，10% CO2，5% O2培养5  d，观察抑菌圈，测量其直径，每个样品重复3次。

1.4.3最小抑菌浓度的测定方法。

采用96孔板法测定最小抑菌浓度。配置样品浓度梯度为10.000 000、5.000 000、2.500 000、1.250 000、0.625 000、0.312 500、0.156 250和0.078 125 mg/mL。依次加入96孔板中，每个样品3组平行。趁热加入羊血培养基，混合均匀。待培养基凝固后，每个孔中加入10  μL ATCC43504或者SS1的菌悬液。37 ℃，10% CO2，5% O2培养5 d。观察细菌状态，确定最小抑菌浓度［16］。