盐补骨脂饮片外表性状与内在质量相关性分析

摘要［目的］考察盐补骨脂饮片外观性状与内在成分含量之间的相关性，并筛选出对其质量具有重要影响性的内外指标。［方法］测定16批样品的千粒重、长度、宽度、厚度及粉末色度值（L*、a*、b*、E*），采用HPLC测定5种香豆素类、5种黄酮类及1种酚类的含量，并进行主成分分析（PCA）、正交偏最小二乘判别分析（OPLS-DA）和相关性分析（CA）。［结果］ PCA表明新补骨脂异黄酮、补骨脂二氢黄酮甲醚、补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂定、异补骨脂素、补骨脂素是影响内在成分综合排名（ICCS）的重要指标。OPLS-DA标记了6个重要指标，分别为千粒重、E*、补骨脂酚、L*、b*、ICCS。CA表明外观性状与内在成分含量存在差异，其中L*、b*、E*均与补骨脂苷、异补骨脂苷呈极显著正相关（P＜0.01），与补骨脂乙素呈显著正相关（P＜0.05），与补骨脂宁呈极显著负相关（P＜0.01）。a*与补骨脂苷呈极显著正相关（P＜0.01），与异补骨脂苷、补骨脂甲素、补骨脂乙素呈显著正相关（P＜0.05），与补骨脂宁呈显著负相关（P＜0.05）。［结论］综合3种分析方法得到盐补骨脂饮片外观性状特征以粉末色度值（L*、a*、b*、E*）为主要指标，内在成分以补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂甲素、补骨脂乙素、补骨脂宁、补骨脂酚为主要指标。

关键词盐补骨脂饮片；外观性状特征；内在成分含量；主成分分析；正交偏最小二乘判别分析；相关性分析

中图分类号R283文献标识码A

文章编号0517-6611（2023）08-0194-05

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.08.045开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Correlation Analysis between External Appearance and Internal Quality of Salt-processed Psoralea corylifolia

XIAO Wei-xiang1，SUN Yi-chun2，LIU Ya-qin1 et al（1.College of Pharmacy， Guizhou University of Traditinal Chinese Medicine，Guiyang， Guizhou 550025;2. Sinopharm Tongjitang （Guizhou） Pharmaceutical Co.， Ltd.，Guiyang， Guizhou 550025）

Abstract［Objective］ To investigate the correlation between the quantification of appearance characteristics and the content of internal components in salt-processed Psoralea corylifolia， and to screen out the internal and external indicators that had important impact on their quality.［Method］ The 1 000 grain weight， length， width， thickness and powder chroma （L*， a*， b*， E*） of 16 batches of samples were determined，the contents of 5 coumarins， 5 flavonoids and 1 phenol compound were determined by HPLC， and principal component analysis （PCA）， orthogonal partial least squares discriminant analysis （OPLS-DA） and correlation analysis （CA） were performed.［Result］PCA showed that neobavaisoflavone， bavachinin， psoralenoside， isopsoralenoside， psoralidin， isopsoralen and psoralen were important indicators affecting the comprehensive ranking of internal components （ICCS）. OPLS-DA marked six important indicators， which were the 1000 grain weight， the E*， bakuchiol， L*， b* and ICCS. CA showed that there were differences between the quantification of appearance traits and the content of internal components， among which the L* value， b* value and E* value were highly significantly positively correlated with psoralenoside and isopsoralenoside （P<0.01）， significantly positively correlated with isobavachalcone（P<0.05）， and highly significantly negatively correlated with psoralidin （P<0.01）. The value of a* was highly significantly positively correlated with psoralenoside （P<0.01）， significantly positively correlated with isopsoralenoside， coryfolin and isobavachalcone （P<0.05）， and significantly negatively correlated with psoralidin （P<0.05）. ［Conclusion］ By synthesizing the three analytical methods， the main indicators of the appearance characteristics of salt-processed Psoralea corylifolia are the chromaticity values （L^*， a^*， b^*， E^*）， and the main indicators of the internal components are psoralenoside， isopsoralenoside，coryfolin， isobavachalcone， psoralidin and bakuchiol.

Key wordsSalt-processed Psoralea corylifolia；Appearance characteristics；Internal components content；Principal component analysis （PCA）;Orthogonal partial least squares discriminant analysis （OPLS-DA）;Correlation analysis （CA）

补骨脂为豆科植物补骨脂（Psoralea corylifolia L.）的干燥成熟果实。盐补骨脂是通过净补骨脂盐炒所得［1］。补骨脂含有香豆素类、黄酮类、单萜酚类等化学成分，具有调节雌激素水平、抗肿瘤、神经保护及对心血管系统等方面有多重活性［2］。近年来，中药的外观性状与内在成分含量的相关性研究较多［3-6］，逐渐成为中药研究的热点，为其质量评价提供了新的方法。目前，主要从补骨脂药材指纹图谱和内在成分含量一测多评法的建立［7-9］和盐补骨脂饮片一测多评法的建立及其炮制工艺优选等方面［10-11］对补骨脂的质量进行评价，鲜有研究其外表性状与内在质量的相关性。该研究收集了16批盐补骨脂饮片，测定其外观性状特征值和内在成分含量，应用多元统计学方法进行分析，挖掘具有标志性的指标，为制定其质量评价体系提供依据。

1材料与方法

1.1试验材料日本岛津高效液相色谱仪（LC-16，苏州岛津）；色差仪（NR-200型，Nscing Es/苏测）；补骨脂素对照品（批号66-97-7）、异补骨脂素对照品（批号523-50-2），购于贵州迪大生物科技有限责任公司；补骨脂苷对照品（批号905954-17-8）、异补骨脂苷对照品（批号90594-18-9）、新补骨脂异黄酮对照品（批号41060-15-5）、补骨脂甲素对照品（批号19879-32-4）、补骨脂宁对照品（批号53947-92-5）、补骨脂定对照品（批号18642-24-4）、补骨脂乙素对照品（批号20784-50-3）、补骨脂二氢黄酮甲醚对照品（批号19879-30-2）、补骨脂酚对照品（批号10309-37-2），均购于成都埃法生物科技有限责任公司；甲醇（色谱纯，天津科密欧）；乙腈（进口色谱纯，美国天地）；娃哈哈纯净水（贵阳娃哈哈昌盛饮料）；其余试剂均为分析纯。

该研究收购了16批盐补骨脂饮片，经贵州中医药大学魏升华教授鉴定为豆科植物补骨脂（Psoralea corylifolia L.）的干燥成熟果实，样品信息见表1。

1.2试验方法

1.2.1外观性状特征测定。采用四分法筛选出一部分样品，随机选取1 000粒称重，即得千粒重；用游标卡尺测量样品长度、宽度和厚度。

1.2.2粉末颜色特征测定。取适量样品粉末（过3号筛），使用色度仪连续测量3次，查看并记录色度值。L^*值代表明亮度，0 ～ 100表示从黑色至白色；a^*代表红（+）绿（-）方向；b^*值代表黄（+）蓝（-）方向。根据公式总色度值E*=（L^*2＋a^*2＋b^*2）^1/2，计算样品的总色度值E^*［12］。

1.2.3内在成分含量测定。

1.2.3.1色谱条件。pntulips^®BP-C₈ Plus色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 μm）；流动相为0.3% 冰乙酸溶液（A）-乙腈（B），梯度洗脱（0～5 min，15%B；5～35 min，15%～18%B；35～60 min，38% ～ 60%B；60～70 min，60%～95%B，70～75 min，95%～100%B），检测波长246 nm，温度20 ℃，进样量20 μL，流速1.2 mL/min。

1.2.3.2对照品溶液制备。分别精密称取补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂宁、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂二氢黄酮甲醚和补骨脂酚对照品适量，加甲醇溶解，制成质量浓度分别为3.29、1.79、2.34、1.68、1.76、1.80、0.59、1.16、0.46、1.54、19.50 mg/mL的对照品储备液。

1.2.3.3供试品溶液制备。取样品粉末（过3号筛）0.25 g，置具塞锥形瓶中，加25 mL 70%乙醇溶液，称重，超声提取60 min，放冷，补足减失重量。滤过，备用。

1.2.3.4方法学考察。依据2020年版《中国药典》（四部）［13］分析方法验证指导原则进行方法学考察。以各待测成分峰面积的对数值（y）作为纵坐标、进样量的对数值（x）作为横坐标进行方程拟合，得到补骨脂苷、异补骨脂苷、补骨脂素、异补骨脂素、新补骨脂异黄酮、补骨脂甲素、补骨脂宁、补骨脂定、补骨脂乙素、补骨脂二氢黄酮甲醚和补骨脂酚的回归方程分别为y=2 674 060.62x-75 484.94（R²=0.999 9）、y=3 173 628.77x-88 047.57（R²=0.999 8）、y=7 366 040.95x+24 824.89（R²=0.999 8）、y=7 326 364.86x-263 288.29（R²=0.999 6）、y=4 299 851.84x+396 143.67（R²=0.999 4）、y=2 214 904.83x+21 277.98（R²=0.999 3）、y=7 626 885.09x-42 052.84（R²=0.999 4）、y=2 421 031.89x+22 913.90（R²=0.999 9）、y=1 511 043.71x+90 247.76（R²=0.999 9）、y=1 779 439.25x+246 732.17（R²=0.999 8）、y=1 165 021.42x+2 174 397.86（R²=0.999 9），分别在0.20～6.38、0.14～3.51、0.33～2.39、0.37～2.79、0.39～2.82、0.18～1.44、0.12～0.34、0.37～1.73、0.26～1.95、0.71～2.16、5.01～24.01 μg进样量范围内与其峰面积的线性关系良好；精密度试验中，峰面积RSD均小于3%（n=6）；重复性试验中，各成分含量的RSD均小于3%（n=6）；稳定性试验分别于0、2、4、8、12、24 h进行测定，峰面积的RSD均小于3%；平均加样回收率分别为100.11%、100.10%、100.08%、99.93%、100.16%、99.97%、100.24%、99.99%、99.98%、100.32%、100.06%（n=6）。结果表明，该方法的精密度、重复性、准确性良好［14］。