鱼腥草多糖的理化性质及抗氧化活性研究

摘要  ［目的］研究鱼腥草多糖的理化性质和抗氧化活性。［方法］采用水提醇沉法提取鱼腥草多糖，对其进行多糖含量测定，并对鱼腥草多糖的理化性质及其抗氧化活性进行研究。［结果］鱼腥草多糖含量为62.33%。紫外光谱和红外光谱分析表明，鱼腥草多糖不含蛋白质和核酸，具有多糖的特征性基团，是含有α-或β-构型的吡喃中性多糖。鱼腥草多糖具有较好的羟基自由基清除效应和一定的亚铁离子螯合能力，且均呈现明显的量效关系。［结论］该研究可为鱼腥草多糖的结构信息和生物活性研究奠定基础。

关键词  鱼腥草；多糖；理化性质；抗氧化活性

中图分类号  O 629.12文献标识码  A

文章编号  0517-6611（2022）22-0164-03

doi： 10.3969/j.issn.0517-6611.2022.22.040

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Study on Physic-chemical Properties and Antioxidant Activity of Polysaccharide from Houttuynia cordata

LUO Qiu-lian

（School of Chemistry and Chemical Engineering，Guangxi University，Nanning，Guangxi 530004）

Abstract  ［Objective］ To study the physic-chemical properties and antioxidation activity of polysaccharide from Houttuynia cordata.［Method］ Houttuynia cordata polysaccharide was extracted by water extraction and alcohol precipitation，the polysaccharide content was determined，and its physic-chemical properties and antioxidation activity was studied.［Result］ The polysaccharide content was 62.33%.UV and IR spectra showed that it contained no protein or nucleic acid and had characteristic groups of polysaccharides，which was neutral pyran polysaccharide with α-or β-configuration.Houttuynia cordata polysaccharide had good scavenging effect of hydroxyl free radicals and certain ferrous ion chelating activities，and both showed an obvious dose-effect relationship.［Conclusion］ This study can lay a foundation for the structural information and biological activity of Houttuynia cordata polysaccharides.

Key words  Houttuynia cordata;Polysaccharide;Physic-chemical properties;Antioxidant activity

鱼腥草（Houttuynia cordata） 又名折耳根、蕺菜、紫蕺等， 为三白草科蕺菜属多年生草本植物，是我国传统的药食两用的食材之一，因其特殊的腥味而得名。鱼腥草具有利尿通淋、清热解毒、消肿排脓等功效，用于治疗肺痈吐脓、痰热喘咳、热痢、热淋、痛疮肿毒等症，其主要成分为挥发油、多糖类、黄酮类、生物碱、维生素等［1-2］。研究表明，鱼腥草多糖具有抗病毒作用；鱼腥草水提物对血热病毒（EHFV）有一定抑制作用；鱼腥草是很好的免疫调节剂，它能增强白细胞的吞噬功能［3-4］。目前国内外对鱼腥草的研究主要集中在挥发油成分上，而对鱼腥草多糖的结构和生物活性研究还鲜有报道。该试验以热水浸提取得的鱼腥草多糖为研究对象，通过测定鱼腥草多糖对羟基自由基、DPPH自由基的清除和亚铁离子的螯合能力，评价鱼腥草多糖的抗氧化活性，运用紫外光谱仪和傅里叶红外光谱仪对其基本理化性质进行分析，以期为鱼腥草多糖的结构信息和生物活性研究奠定基础，有利于鱼腥草资源的开发应用。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 研究对象。新鲜鱼腥草，洗净晾干，粉碎后备用。

1.1.2 主要试剂。 1-二苯基-2-三硝基苯肼（DPPH），Sigma-Aldrich公司；抗坏血酸（V C）、浓硫酸、三氯乙酸、乙二胺四乙酸（EDTA）、菲诺嗪、四水合氯化亚铁、铁氰化钾、七水合三氯化铁、邻二氮菲、无水乙醇、硫酸亚铁、30%双氧水，均为国产分析纯；试验用水为超纯水。

1.1.3 主要仪器与设备。LYNX6000高速离心机，Thermo Scientific公司；AE-200电子天平，瑞士Mettler Toledo公司；UV-1800 紫外光谱仪，日本岛津公司；Mili-Q Advantage A10超纯水系统，美国Millipore公司；Nicolet iS50 FT-IR红外光谱仪，美国Thermo Scientific公司。

1.2 方法

1.2.1 多糖的提取工艺流程。

鱼腥草洗净、晾干→粉碎机粉碎→95%乙醇浸泡24 h→离心、抽滤→滤渣低温烘干→90 ℃热水浸提滤渣3次（每次2 h）→离心、抽滤→合并滤液→蒸发浓缩→85%乙醇沉淀24 h→离心分离→冷冻干燥→脱蛋白→鱼腥草多糖。

1.2.2 多糖含量的测定。采用苯酚-硫酸法［5］测定多糖含量。

1.2.2.1 葡萄糖标准溶液的制备。

精确称取200 mg干燥至恒重的葡萄糖，以超纯水定容至50 mL容量瓶中，取1 mL该溶液于50 mL容量瓶中定容，得浓度为0.08 mg/mL葡萄糖标准溶液。

1.2.2.2 鱼腥草多糖溶液的制备。

精确称取鱼腥草多糖40.0 mg，定容至100 mL容量瓶中，取1 mL该溶液于10 mL容量瓶中定容，得到0.04 mg/mL鱼腥草多糖溶液。

1.2.2.3 标准曲线的绘制。

分别吸取葡萄糖标准溶液（0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6、1.8 mL）于干燥试管中，以超纯水各补至2.0 mL，再依次加入6%苯酚溶液1.0 mL和5.0 mL浓硫酸，摇匀，室温下放置20 min后于490 nm处测定其吸光度。以超纯水作为空白，以葡萄糖浓度为横坐标、吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。

1.2.2.4 多糖含量的测定。配制适当浓度的多糖样液，吸取多糖溶液1.0 mL，按 “1.2.2.3” 操作步骤进行，测定样品溶液吸光度，多糖含量按以下公式计算：

多糖含量=（ 样品糖含量 样品总质量 ×0.91）×100% （1）

式中，0.91为多糖的校正系数。

1.2.3 多糖的脱蛋白。

准确称取鱼腥草多糖4.0 g，以超纯水溶解后加入Sevage试剂（V 氯仿 ∶V 正丁醇=4 ∶1），多糖溶液和Sevage试剂按3 ∶1的体积混匀后剧烈振摇30 min。放室温下静置2 h后，以转速为8 000 r/min离心5 min，分出水层和有机层之间的沉淀。分液后，水液溶解重复以上步骤，直至沉淀完全析出。

1.2.4 紫外光谱分析。

取适量多糖样品以超纯水溶解后，于190～400 nm进行紫外光谱扫描。

1.2.5 红外光谱分析。

取多糖样品约1 mg，以KBr压片，使用Nicolet iS50 FT-IR傅里叶红外光谱仪于4 000～500 cm-1进行扫描。

1.2.6 抗氧化活性研究。

以对羟基自由基、DPPH自由基的清除和亚铁离子螯合能力为指标［5］，研究鱼腥草多糖的抗氧化活性。

1.2.6.1 羟基自由基清除能力测定。

在Chen等［6］方法的基础上作微小改动对鱼腥草多糖的羟基自由基清除能力进行测定。往6支试管中依次加入1.5 mL邻二氮菲（0.5 mmol）、2 mL磷酸盐缓冲溶液（0.2 mol/L，pH=7.4）、1 mL 硫酸亚铁溶液（0.75 mmol），混匀。往样品组中加入1 mL多糖溶液（0.25、0.50、1.00、2.00、4.00和6.00 mg/mL）、1 mL 过氧化氢（0.01%，v/v），混匀后，置37 °C下恒温反应1 h，测定536 nm处的吸光度。以抗坏血酸（V C）作为阳性对照，以超纯水作为空白，平行测定3次，取平均值。按以下公式计算鱼腥草多糖对羟基自由基的清除能力：

清除率= A s-A 1 A 0-A 1 ×100% （2）

式中，A s为样品组吸光度，A 1为对照组吸光度，A 0为空白组吸光度。

1.2.6.2 DPPH自由基清除能力测定。

在Jahanbin等［7］方法的基础上作微小改动对鱼腥草多糖的DPPH自由基清除能力进行测定。往6支试管中加入2 mL不同浓度的多糖溶液（0.05、0.10、0.20、0.40、0.60和0.80 mg/mL）和2 mL DPPH-乙醇溶液（0.1 mmol），室温下暗处避光反应30 min，测定517 nm处的吸光度。用抗坏血酸（V C）作为阳性对照，以超纯水作为空白，平行测定3次，取平均值。按以下公式计算鱼腥草多糖对DPPH自由基的清除率：

清除率=（1-A s/A 0）×100% （3）

式中，A 0为空白组吸光度，A s为样品组吸光度。

1.2.6.3 亚铁离子螯合能力。在Hu等［8］方法的基础上作微小改动对鱼腥草多糖的亚铁离子螯合能力进行测定。分别往试管中加入1 mL 不同浓度多糖溶液（ 1、2、3、4、5和6 mg/mL）、 0.2 mL菲啰嗪溶液（5 mmol）、0.1 mL 氯化亚铁溶液（2 mmol）和3.7 mL超纯水，混匀。室温下反应10 min后，测定562 nm处的吸光度，用乙二胺四乙酸（EDTA）作为阳性

对照，以超纯水作为空白，平行测定3次，取平均值。按以下公式计算鱼腥草多糖的亚铁离子螯合能力：

亚铁离子螯合能力=（1-A s/A 0）×100% （4）

式中，A 0为空白组吸光度，A s为样品组吸光度。

2 结果与分析

2.1 多糖含量测定

以葡萄糖浓度为横坐标（X）、吸光度为纵坐标（y）绘制标准曲线，得出标准曲线回归方程为y=12.994x+0.06（R2=0.996 6）。结果显示在葡萄糖浓度为0～0.08 mg/mL 线性关系良好。根据标准曲线回归方程，计算得出鱼腥草多糖含量为62.33%。

2.2 紫外光谱分析

经典的Sevage法脱蛋白效果较明显，但其不足之处在于多糖的损耗率较大，因此参考文献［5］选择脱蛋白次数为4次。如图2所示，紫外光谱图显示多糖在200 nm波长附近处有多糖较弱吸收峰，说明该物质含有多糖成分。在260和280 nm波长处无明显的吸收峰，说明多糖样品中不含蛋白质和核酸成分，或所含蛋白质和核酸的量很低，Sevage法将此类物质已基本除净。