高效液相色谱法测定葡萄酒中8种着色剂

摘 要：本文采用高效液相色谱法测定葡萄酒中8种着色剂。结果表明，方法的线性关系良好，检出限均为0.01 mg·L-1，定量限均为0.03 mg·L-1，平均回收率在88.5%～115.2%，相对标准偏差在2.9%～6.3%。

关键词：高效液相色谱法；葡萄酒；着色剂

Determination of 8 Colorants in Wine by High Performance Liquid Chromatography

DENG Peng， HU Yuhong， ZHAO Zhiliang

（Xinjiang Bing 24 Grape Wine Industry Co.， Ltd.， Heshuo 841200， China）

Abstract： In this paper， 8 kinds of colorants in wine were determined by high performance liquid chromatography. The results showed that the linear relationship was good. The limits of detection were 0.01 mg·L-1， the limits of quantitation were 0.03 mg·L-1， the average recoveries were 88.5%～115.2%， and the relative standard deviations were 2.9%～6.3%.

Keywords： high performance liquid chromatography; wine; colorant

葡萄酒作为一种备受喜爱的饮品，其品质和安全性受到广泛关注[1]。在葡萄酒的生产和销售过程中，可能存在违规添加着色剂的情况，这不仅违反了相关的食品安全法规，还可能对消费者的健康造成潜在威胁[2]。偶氮玉红、专利蓝、柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红和日落黄是常见的合成着色剂，由于它们具有改善色泽、增加产品吸引力的作用，个别不法生产者可能会将其非法添加到葡萄酒中。准确测定葡萄酒中这些着色剂的含量对于确保葡萄酒的质量和安全至关重要[3]。传统的分析方法在检测这些着色剂时可能存在灵敏度不足、选择性差或操作烦琐等问题[4]。高效液相色谱法凭借其高分离效率、高灵敏度以及良好的重现性等优点，已成为分析食品中着色剂的重要方法[5]。它能够有效地将葡萄酒复杂基质中的多种着色剂分离，并进行准确的定量分析[6]。本研究旨在建立一种高效、准确、灵敏的高效液相色谱法，用于同时测定葡萄酒中偶氮玉红、专利蓝、柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红和日落黄这8种着色剂的含量，期望为葡萄酒的质量监控和食品安全监管提供可靠的技术支持，以保障消费者能够饮用安全、合规的葡萄酒产品。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

葡萄酒，兰州当地市场。

偶氮玉红（纯度≥98.0%），北京坛墨质检科技有限公司；柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄、诱惑红（标准用量为1.00 mL，纯度≥98.0%），北京海岸鸿蒙标准物质技术有限责任公司；乙酸铵（分析纯），天津科密欧有限公司；甲醇（色谱纯），美国赛默飞公司。

1.2 仪器与设备

高效液相色谱仪（型号：2695），美国Waters公司；光电二极管阵列检测器（型号：2998），美国Waters公司；超纯水机，四川卓越有限公司；涡旋混合器（型号：WirbelMixer），阿斯曼尔科技有限公司；电子天平（型号：ME 204/02），梅特勒-托利多有限公司；冷冻离心机（型号：H-2050R），湖南湘仪实验室仪器有限公司；水系过滤器（型号：0.22 μm），青岛鸿谱生物有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 标准溶液配制

（1）偶氮玉红和专利蓝的标准溶液。精确称取0.1 g偶氮玉红和专利蓝的标准物质（按纯度折算为100%质量），溶解于适量水中，并定容至100.0 mL容量瓶中，得到浓度为1.00 mg·mL-1的标准溶液[7]。

（2）混合标准中间液。精确吸取1.0 mL各着色剂标准溶液（浓度为1.00 mg·mL-1）于10 mL容量瓶中，并定容至刻度线，得到浓度为100.0 mg·L-1的混合标准中间液[8]。

（3）混合标准工作液。不同浓度为后续实验提供多个标准点，便于构建标准曲线，实现定量分析[9]。精确吸取0.010、0.025、0.050、0.100、0.500、1.000 mL和2.500 mL混合标准中间液于5.0 mL容量瓶中，加水定容至刻度，得到浓度分别为0.2、0.5、1.0、2.0、10.0、20.0 mg·L-1和50.0 mg·L-1的混合标准工作液[10]。

1.3.2 样品前处理

吸取葡萄酒样品2.0 mL，加入乙酸铵缓冲溶液2.0 mL（浓度为0.025 mol·L-1，pH=9.0），涡旋混合2 min，8 000 r·min-1离心5 min，取上清液，过0.22 μm滤膜，将处理后的样品送入仪器进行测定，以获得葡萄酒中色素的定量数据[11]。

1.3.3 液相色谱条件

Zorbax SB-C18色谱柱（4.6 mm×250 mm，5 µm）；柱温：35 ℃；流动相A：0.025 mol·L-1乙酸铵溶液；流动相B：甲醇；流速：1.0 mL·min-1；梯度洗脱程序：0～10 min，88%A；10～15 min，88%→68%A；15～20 min，68%→56%A；20～25 min，56%→20%A；25～30 min，20%→88%A[12]。

1.3.4 标准曲线绘制

将不同浓度的着色剂混合标准溶液进行上机测定，以每个浓度对应的色谱峰面积为纵坐标（y），浓度为横坐标（x），绘制标准曲线[13]。以3倍信噪比为检出限，10倍信噪比为定量限[14]。

1.3.5 回收率与精密度

称取5 g空白葡萄酒样品，向其中分别添加0.05、0.10、0.50 mg·L-1和1.00 mg·L-1的着色剂标准溶液[15]。按照1.3.2样品前处理方法进行处理，计算每个浓度水平的平均回收率及相对标准偏差。试验平行测定6次[16-17]。

2 结果与分析

2.1 标准曲线、相关系数及检出限

由表1可知，在浓度为0.2～50.0 mg·L-1，8种葡萄酒着色剂线性关系良好，相关系数（R2）均≥0.998 7，检出限为0.01 mg·L-1，定量限为

0.03 mg·L-1，能够满足分析需求。

2.2 回收率与精密度

由表2可知，8种葡萄酒着色剂在不同添加水平下的平均回收率为88.5%～115.2%，相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）为2.9%～6.3%。

3 结论

本研究建立了一种高效液相色谱法用于测定葡萄酒中的8种着色剂（偶氮玉红、柠檬黄、新红、苋菜红、靛蓝、胭脂红、日落黄和诱惑红），该方法具有准确性高、精密度好以及灵敏度能满足分析要求等优点。8种着色剂在0.2～50.0 mg·L-1线性关系良好，相关系数（R2）均≥0.998 7。在该浓度区间内，利用本实验所建立的方法，各着色剂的色谱峰面积与浓度之间呈现出高度的线性相关，为准确的定量分析奠定了坚实的基础。方法检出限为0.01 mg·L-1，定量限为0.03 mg·L-1。表明该方法能够有效地检测出葡萄酒中极低浓度的着色剂，从而可以对葡萄酒中可能存在的微量非法添加着色剂进行精确的定性和定量分析，这对于确保葡萄酒的质量和安全性具有重要意义。8种着色剂在不同添加水平下的平均回收率为88.5%～115.2%。表明该方法在实际样品分析中能够准确地测定出样品中着色剂的含量，在整个分析过程中，样品处理、仪器测定等环节对测定结果的影响较小，保证了测定结果的准确性。相对标准偏差为2.9%～6.3%，说明本方法具有良好的精密度，能够为葡萄酒中着色剂的日常检测提供可靠的技术支持。综上所述，本研究所建立的高效液相色谱法可作为一种有效的检测手段，用于葡萄酒中8种着色剂的检测，为葡萄酒的质量监控和食品安全监管提供可靠的技术保障。

参考文献

[1]李响丽，范多青，李超，等.高效液相色谱法测定烟用接装纸中水溶性着色剂[J].中国造纸，2023，42（12）：93-99.

[2]姚誉阳，徐曼，潘春燕，等.全自动固相萃取：高效液相色谱法测定现制饮料中7种合成着色剂[J].食品与机械，2024，40（3）：82-88.

[3]李丽鑫，肖智超，赵云龙，等.固相萃取-高效液相色谱法测定肉及肉制品中9种人工合成着色剂的研究[J].食品与发酵科技，2024，60（3）：112-116.

[4]王文辉.“金胺O”响应型荧光探针的制备及可视化检测方法构建[D].扬州：扬州大学，2024.

[5]李青松，张雪梅.一种用于测定食品中合成着色剂含量的液相检测方法[J].中国食品添加剂，2023，34（3）：

296-307.

[6]李广，李琪，顾敏，等.高效液相色谱法同时检测葡萄酒中11种人工合成着色剂[J].中国酿造，2024，43（7）：

246-250.

[7]曾豪威，周庆琼，黄铁城，等.固相萃取-超高效液相色谱法测定茶叶中11种合成着色剂[J/OL].分析试验室，1-12[2024-12-13].http：//kns.cnki.net/kcms/detail/11.2017.TF.2024

0518.2103.004.html.

[8]杨芮，范钦杰，卢帮贵，等.高效液相色谱法测定酱卤肉中11种磺酸基团着色剂[J].粮食与油脂，2024，37（7）：

133-137.

[9]聂磊，周耀斌.高效液相色谱-三重四极杆质谱测定指甲油中4种禁用分散型着色剂的含量[J].香料香精化妆品，2023（6）：179-183.

[10]赵星.化妆品中多种禁用着色剂的高效液相色谱测定方法研究[J].化纤与纺织技术，2024，53（3）：80-82.

[11]韦志超，于喆源，杨博，等.响应面优化QuEChERS-液相色谱串联质谱法分析茶饮料中合成着色剂[J].甘肃科技，2023，39（10）：39-45.

[12]杨志杰，王丹，王德锌，等.固相萃取-高效液相色谱法测定食品中8种合成着色剂[J].食品工业，2024，45（10）：323-328.

[13]赵昕，张静，李东辉，等.高效液相色谱法同时检测水果加工品中18种食品添加剂[J].食品安全质量检测学报，2024，15（20）：297-306.

[14]严敏，顾娟红，冯灵方，等.高效液相色谱法同时测定化妆品中7种着色剂[J].化学分析计量，2024，33（8）：

32-37.

[15]咸伟玥，刘莹，王伟艳，等.液-液分配法快速分离提取饮料中11种合成着色剂的改进研究[J].中国检验检测，2023，31（4）：36-39.

[16]曹张欢，蒋显锋，黄子静，等.四类酒中食品添加剂检测及基质效应的研究[J].中国食品，2023（16）：138-142.

[17]程畿，章双双，王恒，等.高效液相色谱法同时测定大黄鱼中5种合成着色剂[J].海峡预防医学杂志，2024，30（4）：8-11.

基金项目：河北省科学技术厅科技业务项目“葡萄酒品质提升关键技术研究与应用”。

作者简介：邓彭（1985—），男，新疆巴州人，硕士，工程师。研究方向：食品加工技术。