超高效液相色谱-二极管阵列法测定水产品中环丙氨嗪残留量的研究

Research on the Determination of Cymazine Residues in Aquatic Products by Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Diametric Array Method

YAN Yanyang， ZHENG Cheng， CAI Jiaqi， XU Binhui， NI Weijun （Wenzhou Quality and Technology Testing Research Institution，Wenzhou 325oo0， China

Abstract： Using ultra-high performance liquid chromatography-diode array method to detect residual levels of cyclopropazine in aquatic products. The extraction was carried out with a solution of trichloroacetic acidacetonitrile，followed by purification on an MCX solid-phase extraction column and quantitative analysis with an ultra-high performance liquid chromatograph.The results showed that cyromazine had a good linear relationship R⩾0.999 ）in the concentration range of 0.05μg⋅mL^-1 to 2.00μg⋅mL^-1 . At three spiked levels of 10， 20μg⋅kg^-1 and 100μg⋅kg^-1. ，the average recovery rates were 86.5% to 95.9% ，and the relative standard deviationswere all less than 4% . This technique is characterized by high sensitivity，simplicity of operation，and good repeatability，making it suitable for the determination of cyromazine residues in aquatic products.

Keywords： ultra-high performance liquid chromatography-diode array detection; aquatic products; cyromazine： residues

环丙氨嗪（Cyromazine）的化学性质稳定，具有较强的亲水性，是一种含氮杂环类亲水性化合物，通过干扰昆虫的正常生理代谢，抑制昆虫的生长发育，从而达到杀灭昆虫的效果[1-2]。2002年原中国农业部将环丙氨嗪批准为三类新兽药，广泛用于控制植物叶面昆虫和动物溉舍内蝇蛆的生长发育[3]。近年来的研究发现，环丙氨嗪可能具有致癌性[4-5]。随着农业和畜禽养殖业的快速发展，菜农常在作物收获期频繁用药，以控制花期病虫害[6-9]，进而导致环丙氨嗪的使用渗入土壤并流入水环境中[10-12]；许多养殖户为了减少养殖场的蚊蝇，把环丙氨嗪长期应用于动物饲料中，导致外源性化合物通过粪便进入水环境，进而在水产品中残留，并通过食物链影响人们的身体健康[13]。目前，环丙氨嗪残留量的检测主要集中在土壤、畜牧和饲料中[14-18]，而水产品中环丙氨嗪残留量的检测相对较少。因此，开发一种准确、灵敏的检测方法以监测水产品中环丙氨嗪的残留水平显得尤为重要。本文旨在建立一种基于超高效液相色谱仪测定水产品中环丙氨嗪残留量的方法，为有效监控水产品中环丙氨嗪药物残留提供简便、有效、快速的方法，杜绝水产品中存在的潜在风险，保障食品安全。

1材料与方法

1.1材料与试剂

黑鱼，购自菜市场；环丙氨嗪标准品（ 1 000mg⋅L^-1 ），上海安谱实验科技股份有限公司；甲醇（色谱纯）、乙腈（色谱纯）、甲醇（分析纯）、盐酸（分析纯）、乙酸铵（分析纯）、乙酸（分析纯）、氨水（分析纯）和三氯乙酸（分析纯），上海安谱实验科技股份有限公司；水为符合《分析实验室用水规格和试验方法》（GB/T6682—2008）规定的一级水。

1.2仪器与设备

Agilent1290INFINITY超高效液相色谱仪、HILIC亲水反应离子交换色谱柱（ 150mm^×2.1mm 3.5μm ）、四元泵、二极管阵列检测器和色谱柱恒温装置，安捷伦科技公司；电子分析天平，赛多利斯公司；SIGAMA3K15高速离心机，德国西格玛；固相萃取装置、 0.22μm 微孔滤膜，上海安谱实验科技股份有限公司；REEKO自动氮吹仪，REEKO。

1.3标准溶液的配制

精密吸取环丙氨嗪标准品溶液（ 1 000mg⋅L^-1 ）100μL 于 10mL 容量瓶中，用甲醇（色谱纯）定容至刻度线，得到质量浓度为 10mg⋅L^-1 的标准储备液。将 10mg⋅L^-1 的环丙氨嗪标准储备液依次稀释成5个质量浓度分别为0.05、0.20、0.40、 和2.00μg⋅mL^-1 的系列标准工作溶液。

1.4 实验方法

① 提取。称取水产品试样 5.0g （精确至±0.02g ），置于 50mL 离心管，加入提取液（三氯乙酸-乙腈溶液） 15mL ，高速均质使样品分散均匀，以5000r⋅min^-1 离心 5min ，取上清液于 100mL 玻璃管中，残渣中再次加入提取液 10mL ，重复提取1次，合并上清液，于自动氮吹仪 50^qC 水浴中氮吹至 1mL ，备用。 ② 净化。固相萃取柱依次用甲醇 3mL ，水 3mL 活化，取备用液过柱，控制流速1mL⋅min^-1 。依次用甲醇 3mL 、 0.1mol⋅L^-1 盐酸溶液3mL 、水 3mL 和甲醇 3mL 淋洗，抽干，用 5% 氨水甲醇溶液 5mL 洗脱。收集洗脱液，于 50^qC 氮吹干，用流动相 1.0mL 溶解残渣物，涡旋 30s ， 0.22μm 微孔滤膜过滤，供超高效液相色谱仪测定。

1.5 色谱条件

色谱柱：HLIC亲水反应离子交换色谱柱（ 150mm^×2.1mm ， 3.5μm ）；流动相：取 25mmol⋅L^-1 乙酸铵 40mL 用乙腈定容至 1000mL ；流速：0.3mL⋅min^-1 ；二极管阵列检测波长： 214nm ；进样 量： 20μL ；柱温： 30^c ○

2 结果与分析

2.1检测条件优化

2.1.1 净化柱的优化

MCX柱是一种混合型阳离子交换固相萃取小柱，通常用于提取和纯化各种化合物，尤其是碱性化合物，其具有高比表面积和离子交换容量，能在广泛的pH值范围内（pH值为 1～14 ）稳定工作。SCX柱主要用于酸性化合物的分离，其特殊官能团能有效吸附酸性物质。HLB柱是一种带有亲水性和疏水性基团聚合物的萃取柱，这种亲水-疏水平衡的特性使得它能很好地适应不同极性的溶质分离。经分析比较，HLB柱的回收率为 56.5% ，SCX柱的回收率为 84.7% ，MCX柱的回收率为 95.9% ，其回收率效果依次为HLB柱

2.1.2 色谱条件的优化

液相色谱系统中的流动相决定着目标分析物的分离程度。本文分别研究了 C₁₈ 柱「流动相为磷酸缓冲盐-甲醇-乙腈（ 93：5：2⋅ 或水-甲醇-乙醇胺（ 76：24：0.1） 1、氨基柱[流动相为乙腈－水溶液（ 97：3 ）］和HLIC亲水反应离子交换色谱柱（流动相为乙酸铵-乙腈溶液）作为色谱柱和流动相进行测定。结果发现，环丙氨嗪作为含氮杂环类亲水性化合物，用HILIC亲水反应离子交换色谱柱（流动相为乙酸铵-乙腈溶液）时，基线平稳，目标峰和杂质峰分离效果最好，效果最佳，如图1所示。

2.2 方法的建立

2.2.1 标准曲线的建立

以环丙氨嗪标准系列溶液的浓度 （x） 为横坐标，以对应的信号响应值 （y） 为纵坐标，建立标准曲线。线性方程为 y=665.83470x-2.38467 ， R²=0.99947 ，说明环丙氨嗪浓度在 0.05～2.00μg⋅mL^-1 时，线性关系良好。

2.2.2 加标回收率和精密度试验

在阴性空白样品中分别加入10、20、 100μg⋅kg^-1 这3个水平重复测定6次，计算回收率和相对标准偏差。由表1可知，回收率为 86.5%～ 95.9% ，相对标准偏差均小于 4% ，说明建立的方法有较好的精密度。

3结论

本方法采用三氯乙酸-乙腈溶液提取目标物，经MCX固相萃取柱去除杂质，以乙酸铵-乙腈为流动相，HLIC亲水反应离子交换柱作为色谱柱，能够使样品液相分析基线平稳，有效分离目标物和杂质峰，得到线性（ R²=0.99947 ）、精密度、回收率（ 86.5%～95.9% ）均良好的检测方法。

参考文献

[1]宁章勇.新型兽药：环丙氨嗪[J].兽药与饲料添加 剂，2001（4）：18-19.

[2]郭腾，糕宝山，王勇，等.抗蝇蛆药环丙氨嗪及其应用[J].北方牧业，2004（9）：26.

[3]唐玲丽，王辉，董元华，等.环丙氨嗪在我国5种代表性土壤中的吸附特征[J].环境科学，2009，30（10）：3072-3076.

[4]王洁鑫，王凤香，张萌，等.高效液相色谱法测定动物性食品中环丙氨嗪残留量的不确定度评定[J].实验室检测，2024，2（10）：32-36.

[5]王辉，董元华，安琼.环丙氨嗪（Cyromazine）的生物毒性与环境行为研究进展[J].农业工程学报，2008（1）：246-249.