紫外可见分光光度法测定肉苁蓉配方茶中总黄酮、总多酚、总多糖及总皂苷的含量

摘 要：目的：对肉苁蓉配方茶中总黄酮、总多酚、总多糖、总皂苷含量进行检测，为配方茶的质量控制及抗疲劳物质的基础研究提供实验依据。方法：用紫外可见分光光度法测定肉苁蓉配方茶中总黄酮、总多酚、总多糖、总皂苷的含量。结果：肉苁蓉配方茶中总黄酮、总多酚、总多糖及总皂苷的含量分别为8.23%～8.75%、9.30%～9.67%、1.20%～1.58%、1.87%～2.86%。结论：肉苁蓉配方茶中主要成分为黄酮类及多酚类，皂苷及多糖含量较少。

关键词：肉苁蓉配方茶；总黄酮；总多酚；总多糖；总皂苷；紫外分光光度法

Determination of Total Flavonoids， Total Polyphenols， Total Polysaccharides and Total Saponins in Cistanche deserticola Formula Tea by Ultraviolet-Visible Spectrophotometry

YAN Luomei1，2， Zakiyagul Gujahmat2， HAO Juan2， HU Shixian2， LIU Xuanlin3， Mourboul Ablise1*

（1.College of Pharmacy， Xinjiang Medical University， Urumqi 830000， China;

2.Xinjiang Huachun Biological Pharmaceutical Co.， Ltd.， Urumqi 830000， China;

3.Xinjiang Uygur Autonomous Region Pharmaceutical Research Institute， Urumqi 830000， China）

Abstract： Objective： To detect the contents of total flavonoids， total polyphenols， total polysaccharides and total saponins in Cistanche deserticola formula tea， so as to provide experimental basis for the quality control of tea and the basic research of anti-fatigue substances. Method： The contents of total flavonoids， total polyphenols， total polysaccharides and total saponins in Cistanche deserticola formula tea were determined by ultraviolet-visible spectrophotometry （UV-Vis）. Result： The contents of total flavonoids， total polyphenols， total polysaccharides and total saponins in Cistanche deserticola formula tea were 8.23%～8.75%， 9.30%～9.67%， 1.20%～1.58% and 1.87%～2.86%， respectively. Conclusion： The main components of Cistanche deserticola formula tea are flavonoids and polyphenols， and the contents of saponins and polysaccharides are relatively low.

Keywords： Cistanche deserticola formula tea; total flavonoids; total polyphenols; total polysaccharides; total saponins; ultraviolet-visible spectrophotometry

肉苁蓉配方茶是以肉苁蓉、淫羊藿、刺五加、红枣和正山小种为原料制成的具有抗疲劳效果的保健食品。研究表明，肉苁蓉配方茶原料中含有较多潜在的抗疲劳成分，如肉苁蓉、淫羊藿、红茶中的多糖类、皂苷类、多酚类和黄酮类物质，可通过调节代谢、抗氧化作用、神经保护等方式延缓外周及中枢疲劳、减少自由基过度积累而起到抗疲劳作

用[1-4]。因此，明确肉苁蓉配方茶中黄酮类、皂苷类、多糖类和多酚类的含量，对于确定发挥抗疲劳作用的主成分，进而对产品进行精准质量控制，以及进一步研究可能的抗疲劳机制具有十分重要的意义。本研究采用紫外分光光度法对肉苁蓉配方茶中总黄酮、总多酚、总多糖和总皂苷的含量进行测定与分析，为产品质量控制提供实验依据，也为配方茶的相关研究提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

肉苁蓉配方茶（批号：20220321、20220322、20220323），新疆华春生物药业股份有限公司产品。

芦丁标准品（批号：100080-202012）、没食子酸标准品（批号：110831-201906）、D-无水葡萄糖（批号：110833-202109）、紫丁香苷（批号：111574-202106），均购于中国食品药品检定研究院；浓硫酸（分析纯），购于四川西陇科学有限公司；高氯酸（分析纯），购于上海桃浦化工厂；甲醇、乙醇、乙醚、冰乙酸和苯酚（分析纯），均购于天津市致远化学试剂有限公司；福林酚（生物技术级），购于上海麦克林生化有限公司；亚硝酸钠、香草醛、氢氧化钠和碳酸钠，均购于天津北联精细化工有限公司；硝酸铝，购于天津市致远化学试剂有限公司。

1.2 仪器与设备

UV-2700型紫外可见分光光度计（岛津）、JB5374-91分析天平（梅特勒-托利多仪器有限公司）、HH-S4型电热恒温水浴锅（上海齐欣科学仪器有限公司）、KQ-500DE型数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）、Neofuge 15R低温高速离心机（上海利康仪器有限公司）和SB-100型旋蒸蒸发仪（上海爱朗仪器有限公司）。

1.3 对照品溶液的制备

1.3.1 芦丁溶液制备

精密称取芦丁对照品0.100 0 g，置于100 mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，超声溶解，得1 mg·mL-1的芦丁贮备液。精密移取1 mg·mL-1的芦丁标准品溶液10 mL置于50 mL容量瓶中，用70%乙醇定容至刻度，得200 μg·mL-1的芦丁标准品溶液（总黄酮对照品溶液），以备显色。

1.3.2 没食子酸溶液制备

精密称取0.009 3 g没食子酸标准品置于100 mL容量瓶中，加蒸馏水定容至刻度，摇匀，即得93 μg·mL-1的没食子酸标准品溶液。精密移取5 mL没食子酸标准品溶液置于25 mL容量瓶中，蒸馏水定容至刻度，得18.6 μg·mL-1的没食子酸标准品溶液（总多酚对照品溶液），以备显色。

1.3.3 D-葡萄糖溶液制备

精密称取D-无水葡萄糖对照品0.010 25 g，加水溶解并定容至100 mL棕色容量瓶中，得102.5 μg·mL-1的D-葡萄糖标准品溶液（总多糖对照品溶液），以备显色。

1.3.4 紫丁香苷溶液制备

精密称取紫丁香苷对照品0.010 05 g，加甲醇溶解并定容至10 mL棕色容量瓶中，得1 005 μg·mL-1的紫丁香苷标准品溶液（总皂苷对照品溶液），以备显色。

1.4 供试品溶液的制备

1.4.1 总黄酮及总多酚样品溶液制备

精密称取肉苁蓉配方茶约0.25 g，每批次3份（20220321、20220322、20220323），共9份，置于50 mL容量瓶中，加入20 mL 70%乙醇超声20 min，移取上清液置于100 mL容量瓶中，重复超声5次，合并上清液冷却后，用70%乙醇定容至刻度，即得供试品溶液，以备显色。

1.4.2 总多糖样品溶液制备

精密称取肉苁蓉配方茶约1.0 g，每批次3份（20220321、20220322、20220323），共9份，分别置于100 mL圆底烧瓶中，加蒸馏水15 mL，100 ℃回流提取1 h，放至室温，用脱脂棉过滤到离心管中，并加入无水乙醇至溶液乙醇体积分数为65%，摇匀，置于4 ℃冰箱静置过夜（12 h）。第2天，对提取溶液3 000 r·min-1离心10 min，弃去上清液，加入5 mL的65%乙醇溶液洗涤沉淀，以上操作重复3次，离心后留下的沉淀物加水使其溶解并定容到100 mL容量瓶中，即得实验样品溶液，以备显色。

1.4.3 总皂苷样品溶液制备

精密称取肉苁蓉配方茶约1.0 g，每批次3份（20220321、20220322、20220323），共9份，分别置于100 mL圆底烧瓶中，加入50 mL 75%乙醇在80 ℃下回流提取2次，每次1 h。冷却后在5 000 r·min-1下离心10 min，合并提取液，将离心上清液收集后在旋转蒸发仪上浓缩至干，浓缩物加蒸馏水定容至100 mL容量瓶中。取1 mL上清液，移入装有D101大孔吸附树脂的层析柱（10 mL注射器当作层析柱，填料填到6 cm左右），用25 mL水洗柱，弃去洗脱液，用25 mL 70%乙醇洗脱，收集洗脱液转移至蒸发皿中，用60 ℃水浴蒸发至干。蒸发皿中的蒸干物，用5 mL甲醇溶解，用0.45 μm滤膜过滤即得样品液。取1 mL转移至具塞试管，在70 ℃下水浴蒸干，以备显色。

1.5 显色方法

1.5.1 总黄酮样品和芦丁对照品溶液的显色

参考刁海鹏等[5]的方法进行显色。总黄酮样品与芦丁对照品溶液中分别加入5%亚硝酸钠0.4 mL，静置5 min，加入10%硝酸铝0.4 mL，静置5 min，后加入4%氢氧化钠4 mL，加蒸馏水定容至10 mL，摇匀，静置15 min，即显色完成。

1.5.2 总多酚样品和没食子酸对照品溶液的显色

参考陈向东等[6]的方法进行显色。总多酚样品与没食子酸对照品溶液中分别加入0.5 mL福林酚溶液，加蒸馏水至6 mL，摇匀后加1.5 mL 10%碳酸钠，蒸馏水定容至10 mL。75 ℃下水浴加热10 min，避光放凉，即显色完成。

1.5.3 总多糖样品和D-葡萄糖对照品溶液的显色

参考许世浩等[7]的方法进行显色。总多糖样品与D-葡萄糖对照品溶液中分别加入5%苯酚溶液1 mL，摇匀，迅速加入浓硫酸5 mL，摇匀，置沸水浴中加热15 min，再置于冰水浴中冷却5 min，加水定容至10 mL，即显色完成。

1.5.4 总皂苷样品和紫丁香苷对照品溶液的显色

参考孙云波等[8]的方法进行显色。总皂苷样品与紫丁香苷对照品蒸干物中分别加入0.2 mL 5%香草醛-冰乙酸溶液，使残渣溶解，再加入0.8 mL高氯酸，混匀后移入试管中，盖紧盖子在60 ℃水浴加热20 min，取出，冰浴冷却5 min后，准确加入5 mL冰乙酸，摇匀，即显色完成。

1.6 方法学考察

1.6.1 标准曲线的绘制

（1）芦丁标准曲线绘制。精密移取200 μg·mL-1的芦丁对照品溶液0.5 mL、1.0 mL、1.5 mL、2.0 mL、

2.5 mL和3.0 mL置于10 mL容量瓶中，按1.5.1显色。以随行试剂作空白对照，在510 nm波长处测定吸光度，以浓度（μg·mL-1）为横坐标X，吸光度为纵坐标Y，进行线性拟合。