杞苓氨基酸口服液中枸杞子薄层鉴别方法学研究

摘 要：目的：利用薄层色谱（Thin-Layer Chromatography，TLC）鉴别方法确定杞苓氨基酸口服液的特征成分，制订产品控制指标。方法：采用《中华人民共和国药典》（2020版）薄层色谱法（通则0502）对主要成分枸杞子进行定性鉴别。结果：枸杞子的薄层色谱斑点清晰可见，在与对照药材相应的位置上，显示相同颜色的荧光斑点，阴性样品无干扰影响。结论：枸杞子鉴别方法操作简便、重复性好、专属性强，检测结果稳定可靠，可作为杞苓氨基酸口服液的质量控制方法之一。

关键词：口服液；薄层鉴别；枸杞子；方法学

Study on Thin-Layer Identification Method of Wolfberry in Qiling Amino Acid Oral Liquid

LIU Dewen1， CHEN Tianye1， ZHOU Yanru2，3， LIU Lianyu1， ZOU Song1， SHENG Wensheng1，2*

（1.Jiangxi Deshang Pharmaceutical Research Institute Co.， Ltd.， Zhangshu 331200， China;

2.Jiangxi Deshang Pharmaceutical Co.， Ltd.， Zhangshu 331200， China;

3.Jiangxi Guanglai Health Industry Co.， Ltd.， Zhangshu 331200， China）

Abstract： Objective： Identifying the characteristic components of Qiling amino acid oral liquid use thin-layer chromatography （TLC） method and establish product control indicators. Method： The thin-layer chromatography method （General Method No. 0502 in Pharmacopoeia of China， 2020 edition） was used to qualitatively identify the main components of wolfberry. Result： The thin-layer chromatography spots of wolfberry were clearly visible， and the same colored fluorescent spots appeared at the corresponding position with the control herbal materials. No interference was observed in the negative sample. Conclusion： The identification method for wolfberries is easy to operate， good repeatability， strong specificity， and stable and reliable detection results. It can be used as one of the quality control methods for Qiling amino acid oral liquid.

Keywords： oral liquid; thin-layer chromatography; Chinese wolfberry; methodology

枸杞子为茄科枸杞（Lycium barbarum L.）的干燥成熟果实，味甘，性平，入肝肾两经，滋阴而不致阴衰，兴阳常使阳举，更止消渴，尤补劳伤[1-2]。枸杞子富含多种活性成分，包括枸杞多糖、枸杞总黄酮、甜菜碱、类胡萝卜素、多种维生素和氨基酸、微量元素（K、Na、Ca、Mg和Cu）等[3]，具有抗氧化、抗肿瘤、抗辐射、调节免疫和减轻炎性反应等作用[4]。枸杞子主要分布在华北、西北地区，其中宁夏枸杞作为久负盛名的传统道地药材，在宁夏已有千余年的栽培历史，深受消费者青睐，被誉称为“红宝”，是珍贵的中药材和高级滋补品[5]，现代医药多用于增强免疫功能、改善视网膜病变、温肾助阳、延缓衰老等[6]。

杞苓氨基酸口服液参考《本草纲目》中经典方（七宝美髯丸）[7]配伍，以复合氨基酸粉（来源蚕蛹）、枸杞子、茯苓为主要原料，以白砂糖、山梨酸、纯化水为辅料，运用现代工艺精制而成。为更好控制产品原料采购、生产工艺和成品质量，本文拟建立该产品中枸杞子的薄层色谱（Thin-Layer Chromatography，TLC）鉴别方法，为杞苓氨基酸口服液质量检验提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 材料、试剂与仪器

1.1.1 材料与试剂

宁夏枸杞子（江西康宝堂中药饮片有限公司，批号：20231201）；枸杞子对照药材（中国食品药品检定研究院，批号：121072-202112）；乙酸乙酯（佛山西陇化工有限公司，批号：221126-1，分析纯）；三氯甲烷（佛山西陇化工有限公司，批号：220301-1，分析纯）；甲苯（佛山西陇化工有限公司，批号：240117-2，分析纯）；甲酸（佛山西陇化工有限公司，批号：230911-1，分析纯）；硅胶G板（青岛海洋化工有限公司、德国默克、烟台江友硅胶开发有限公司，规格：100 mm×100 mm）；杞苓氨基酸口服液（江西德致生物科技有限公司，批号：20240602、20240603、20240604和20240605），这4批次样品下文依次用A、B、C和D代替；缺枸杞的杞苓氨基酸口服液（江西德致生物科技有限公司，批号：20240606），下文用E代替。

1.1.2 仪器

WFH-203B暗箱式紫外分析仪，杭州齐威仪器有限公司；BSA124S电子天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；SHZ-B水浴振荡器，上海博讯医疗生物仪器股份有限公司；UPT-II-10T超纯水机，武汉优普仪器设备有限公司；HH-4恒温水浴锅，上海江星仪器有限公司；P-1型玻璃展开缸（100 mm×100 mm），河南沃林仪器设备有限公司。

1.2 实验方法

1.2.1 杞苓氨基酸口服液和阴性对照样品的制备

①杞苓氨基酸口服液的制备。以复合氨基酸粉（来源蚕蛹）、枸杞子、茯苓、白砂糖、山梨酸和纯化水为原辅料，经提取（加8倍量水煎煮2次，每次2 h）、过滤、浓缩、混合、配制、湿热灭菌（105 ℃，30 min）和包装等主要工艺加工制成。②缺枸杞的杞苓氨基酸口服液的制备。按照杞苓氨基酸口服液的制备工艺步骤，制备时不添加枸杞子原料，对应最终样品中不足的量用纯化水补足，作为枸杞子鉴别阴性对照样品。

1.2.2 枸杞子薄层鉴别供试品溶液制备

①参照《中华人民共和国药典》（2020版）[8]一部中枸杞子鉴别方法，取杞苓氨基酸口服液A 10 mL，加入纯化水25 mL，混合均匀，再加入乙酸乙酯15 mL，振摇提取，分取乙酸乙酯液，浓缩至1 mL，作为供试品溶液。②取枸杞子对照药材0.5 g，加水35 mL，加热煮沸15 min，放凉，过滤，滤液用乙酸乙酯15 mL振摇提取，分取乙酸乙酯液，浓缩至1 mL，作为对照药材溶液。③另取缺枸杞的杞苓氨基酸口服液E 10 mL，后续处理按供试品溶液制备方法制备，作阴性对照品溶液。

1.2.3 方法学考察

（1）不同展开剂比例比较。按拟订鉴别方法，选用杞苓氨基酸口服液A、枸杞子对照药材溶液，考察3种展开剂体系的分离效果和方法适用性，展开剂1为乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1），展开剂2为甲苯-乙酸乙酯-甲酸（3∶7∶1）[9]，展开剂3为三氯甲烷-乙酸乙酯-甲酸（6∶3∶1）[10]，展开后显色观察。

（2）不同薄层硅胶板的比较。按拟订鉴别方法，选A、B、C这3批杞苓氨基酸口服液和枸杞子对照药材溶液，考察不同生产厂家来源[11]的G薄层硅胶板（青岛海洋板、德国默克板、烟台板），验证方法耐用性。

（3）不同批次产品比较。按拟订鉴别方法对B、C、D这3批次杞苓氨基酸口服液和枸杞子对照药材溶液用青岛海洋G薄层硅胶板进行枸杞子薄层鉴别方法验证。

（4）不同实验人员比较。按拟订鉴别方法，安排两名实验员L、W，同一环境下选择A、B、C这3批杞苓氨基酸口服液和枸杞子对照药材溶液进行实验，考察方法耐用性。

（5）不同实验室间比较。将A、B、C这3批次杞苓氨基酸口服液送检至具备CMA认定资质的第三方检验机构，开展实验室间对比，按照拟订方法开展验证。

1.2.4 枸杞子的薄层鉴别鉴别方法确定

按照《中华人民共和国药典》（2020版）四部通则0502中薄层色谱法进行试验，吸取上述3种溶液各5 μL，分别点于同一硅胶G薄层板上，以乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，置紫外光灯（365 nm）下检视。

2 结果与分析

2.1 方法学考察

2.1.1 不同展开剂比例比较

由图1可知，3种不同展开剂体系展开后，薄层效果下荧光斑点清晰，分离度好[12]，方法适用性强。但展开剂3存在拖尾现象，分离效果不理想；展开剂2中使用的甲苯溶剂，气味过重，毒害性较大。故确定展开剂1，即乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1）为本方法的最适展开剂体系。

2.1.2 不同薄层硅胶板的比较

由图2可知，3种不同厂家来源的G薄层硅胶板，均能显示清晰的荧光斑点，分离程度较好，在对照品相应位置上均能找到相同颜色荧光斑点，一定程度反映了拟订方法的稳定可靠。但考虑价格和采购便捷性，优选青岛海洋G薄层硅胶板为实验用板。

2.1.3 不同批次产品比较

由图3可知，不同批次的杞苓氨基酸口服液供试品色谱中，与对照药材溶液色谱相应的位置上均显相同颜色的荧光斑点，且斑点清晰可辨。这说明方法适用性强，重复性好，易于操作。

2.1.4 不同实验人员比较

由图4可知，不同实验人员操作下得到杞苓氨基酸口服液供试品色谱中，与对照药材溶液色谱相应的位置上均能显相同颜色的荧光斑点，证明该方法稳定，重复性好。

2.1.5 不同实验室间比较

由图5可知，第三方检验机构使用3批次的杞苓氨基酸口服液和枸杞子对照药材溶液开展鉴别实验，3批次样品均能在对照药材色谱相应的位置上显相同颜色的荧光斑点，外检结果与研究结论保持一致，较好地证明了该实验设计科学合理，方法进一步得到验证。

2.2 枸杞子的鉴别方法确定

通过分析方法学考察研究结果，发现在紫外光365 nm检视下，供试品薄层色谱在对应的位置，与枸杞子对照药材显示相同的荧光斑点，且阴性对照品溶液无对应相同斑点，可作为判断依据[11]。而图6实验结果表明，主特征荧光斑点分离完好，清晰明亮，且阴性对照品无明显干扰，拟订方法科学合理，可作为产品中枸杞子的鉴别实验方法。

3 讨论

薄层色谱是中药鉴别、保健食品成方制剂质量标准的主要研究和控制手段之一[13]。该方法虽然简单快捷，但易受到样品处理、展开剂体系、薄层硅胶板厂家、实验环境和实验人员等条件的干扰影响。依据《中华人民共和国药典（2020版）一部》枸杞子药材鉴别实验方法，取样量0.5 g，而杞苓氨基酸口服液为在售成品，产品规格定为250 mL/瓶，所以对该产品的取样量，根据配方添加量进行了换算，配方每瓶投料量为12.5 g枸杞，换算成产品检测所用体积应取10 mL，同时为与药典方法保持一致，取纯化水补足至35 mL，再进行有机相萃取；杞苓氨基酸口服液产品生产制备中有煎煮、过滤工艺，故不额外进行加热煮沸处理，对照药材沿用药典方法进行处理，不作变动；选择乙酸乙酯-三氯甲烷-甲酸（3∶2∶1）为展开剂体系，发现荧光斑点分离完好、清晰，选用的青岛海洋薄层硅胶板，分离度好，斑点明亮，经济实用，结果满意。经方法学验证，薄层色谱鉴别方法的专属性、重现性、耐用性均能满足要求[14-15]。