液相色谱-三重四极杆串联质谱法检测速冻调理肉制品中12种着色剂

摘 要：基于监管需求，借助于固相萃取技术，建立一种速冻调理肉制品中12种着色剂的液相色谱-三重四极杆质谱联用检测方法。在试样中加入乙醇-乙腈-氨水混合溶液进行提取，经SPE萃取柱进行净化，采取ChromCore C18色谱柱进行分离，外标法定量。结果显示，酸性橙Ⅱ的定量限为0.002 5 mg·kg-1，其他11种着色剂的定量限均为0.25 mg·kg-1；12种着色剂保留时间重复性良好，相对标准偏差在0.21%～1.05%，且回收率在85.66%～104.86%，精密度在1.36%～5.74%。该方法操作简便，分析时间较短，为监检工作提供了技术支撑。

关键词：固相萃取柱；调理肉制品；着色剂

Determination of 12 colorants in Quick Frozen Prepared Meat Products by Liquid Chromatography Triple Quadrupole Tandem Mass Spectrometry

JIANG Wei， GAO Jinfang， GENG Miaomiao， SUN Wei， ZHANG Fengxia， LIU Xiangyu

（Weifang Product Quality Inspection Research Institute， Weifang 261031， China）

Abstract： To meet regulatory demands and utilizing SPE technology， a liquid chromatography-triple quadrupole mass spectrometry method was developed for the simultaneous detection of 12 colorants in frozen prepared meat products. Ethanol-acetonitrile-ammonia water mixture extraction solution was added to the sample， which was then purified using a solid-phase extraction column and separated on a ChromCore C18 chromatographic column. Quantification was achieved using the external standard method. The results indicated that the quantification limit for Acid Orange II was 0.002 5 mg·kg-1， while for the other 11 colorants， it was 0.25 mg·kg-1. The retention times for the 12 colorants exhibited good reproducibility，  the relative standard deviation was 0.21% to 1.05%. The recovery rates ranged from 85.66% to 104.86%， with a precision range of 1.36% to 5.74%. This method is straightforward to operate and boasts a brief analysis time， thereby offering technical support for regulatory inspections.

Keywords： solid-phase extraction column; processed meat products; colorants

着色剂，别名食品色素，其主要作用是为食品进行着色，改善色泽，在食品加工中被普遍使用[1-2]。按照《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014） 的要求，速冻调理肉制品中不得使用着色剂。然而，目前食品安全国家标准中并没有同时检测速冻调理肉制品中多种着色剂的液质分析方法[3-4]。因此，急需建立同时检测胭脂红、诱惑红、日落黄、酸性橙Ⅱ等12种着色剂的方法[5]，以提高检测能力，推动经济、社会发展。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

样品：台香鸡排（速冻生制品）和台式烤肠（原味，速冻生制品），均为调理肉制品中较为常见样品。水中10种混合着色剂标准溶液，其中包括柠檬黄、新红、苋菜红、胭脂红、日落黄、亮蓝、酸性红、喹啉黄、赤藓红和诱惑红（1 000 μg·mL-1），购自阿尔塔有限公司；靛蓝（100 μg·mL-1），购自阿尔塔有限公司；酸性橙Ⅱ（1 000 μg·mL-1），购自阿尔塔有限公司无水乙醇（Anhydrous Ethanol，AE），分析纯；氨水（分析纯），天津市科密欧化学试剂有限公司。乙腈（Acetonitrile，ACN），色谱纯；甲醇（Methanol，MEOH），色谱纯，Thermo Fisher有限公司等。

1.2 仪器与设备

三重四极杆液质联用仪（Thermo TSQ Quantis，配备ESI和APCI源），Thermo Fisher有限公司；天平（万分之一），Mettler toleod仪器有限公司；Milli-Q超纯水机，默克；固相萃取柱（ProElut PWA-2），Dikma有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 溶液配制

试剂1（AE-ACN-氨水混合提取液）：分别取1 867 mL AE和933 mL ACN，混匀，加入1 200 mL超纯水和40 mL氨水，混匀，超声。

试剂2（着色剂复溶液）：称取0.038 5 g乙酸铵置于100 mL容量瓶中，加入超纯水溶解，加入适量氨水将pH值调至9，并定容至刻度。

1.3.2 样品前处理

准确称取2.0 g试样，将其置于50 mL离心管中，加入20 mL试剂1，将试样涡旋1 min，超声5 min，置于离心机中，8 000 r·min-1离心5 min，吸取上清液并将其置于50 mL离心管中，准确吸取4 mL上清液置于氮吹仪（50 ℃）中，待吹至1 mL时，再加入3 mL 10%甲酸水溶液，准备净化。

采用ProElut PWA-2柱进行净化；分别使用5 mL MeOH和5 mL 10%甲酸水进行活化，之后将上述试液加入柱中，依次用5 mL超纯水和5 mL MeOH淋洗，抽干。用6 mL 15%氨水甲醇进行洗脱，收集洗脱液。将洗脱液置于氮吹仪（50 ℃）吹干，加入1 mL 试剂2，过着色剂专用滤膜，待测。

1.3.3 仪器条件

（1）色谱条件。色谱柱：ChromCore C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm，纳谱分析）；柱温：30 ℃；进样量：5 μL；流速：0.25 mL·min-1；流动相A：乙腈；流动相B：0.005 mol·L-1乙酸铵溶液，具体洗脱梯度条件见表1。

（2）质谱条件。采用ESI-模式进行电离，选择多反应监测模式Multiple Reaction Monitoring，（MRM）检测方式，离子源压力选择2 500 V，离子传输管温度选择300 ℃，蒸发温度选择275 ℃。12种着色剂的离子、碰撞能量等信息见表2。

2 结果与分析

2.1 条件优化

对于色谱柱的选择，常用的色谱柱种类主要有正相柱（比如C8柱、氨基柱等）和反相柱（比如C18柱等），基于国标和参考文献分析，并且目标化合物的理化性质主要为水溶性，故采用ChromCore C18（2.1 mm×100 mm，1.8 μm）色谱柱对12种着色剂进行分离。对于流动相的选择，由于着色剂在负离子模式进行扫描，比较了氨水、水和乙酸铵3种溶液，乙酸铵的灵敏度更显著，因此选择5 mmol·L-1乙酸铵，其pH值约为7.0。12种着色剂的分离谱图详见图1。

2.2 重复性

通过对100 ng·mL-112种着色剂混标重复进样6次，对其保留时间（Retention Time，RT）的偏差进行分析（表3）。结果表明，12种着色剂保留时间的重复性相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）在0.21%～1.05%，重复性良好，满足要求。

2.3 准确性和精密度

在空白基质中分别添加3个不同浓度混合标准溶液，且每个浓度有5个平行样品，按照1.3条件进行处理，得到每个化合物加标回收率和RSD值，进而确定每一个化合物的准确性和精密度。从表4中可得，12种着色剂的回收率在85.66%～104.86%，RSD在1.36%～5.74%。

3 结论

本文建立了同时检测调理肉制品中多种着色剂的技术手段，解决了调理肉制品中着色剂检测技术方法不全面的问题。将该检测技术与监督抽检相结合，可以实时监测调理肉制品中着色剂的使用情况，分析各地着色剂可能存在的风险点，有助于有针对性地解决各地各类产品风险点，为调理肉制品食品安全监管部门的决策提供参考。

参考文献

[1]张爽，刘敏芳，刘帆，等.液相色谱-离子阱-飞行时间质谱测定肉制品中8种可食用着色剂[J].农产品加工，2023（11）：50-53.

[2]祝世军，高卓瑶，蒋玲波，等.HPLC-MS/MS法测定水产品中11种水溶性合成着色剂[J].食品工业，2023，44（6）：316-321.

[3]刘瑜，房建美，吴渺渺，等.超高效液相色谱-串联四极杆-线性加速离子阱复合质谱法检测加工肉制品中6种合成着色剂[J].中国食品添加剂，2016（11）：204-207.

[4]迟秋池.多种食品基质中12种水溶性人工合成色素测定方法研究[D].上海：上海交通大学，2014.

[5]朱慧敏，蒲云月，庞榕琳.液相色谱-串联质谱法检测水果罐头中的7种合成着色剂[J].现代食品，2020（2）：205-208.

基金项目：项目来源潍坊市科技发展计划（软科学）项目“预制菜产品质量安全与检测技术支撑的研究——以速冻调理肉制品中的着色剂为例”（2023RKX008）。

作者简介：姜薇（1988—），女，山东潍坊人，硕士，工程师。研究方向：食品安全。