多蒸多制工艺过程中酒黄精多糖的单糖组成变化研究

摘 要：采用HPLC-ESLC法测定多批不同蒸制工艺制得的酒黄精多糖的单糖组成变化规律，为酒黄精炮制工艺标准化评价提供依据。结果表明，生黄精（黄精饮片）、酒黄精（一蒸一制）、酒黄精（二蒸二制）、酒黄精（四蒸四制）、酒黄精（六蒸六制）、酒黄精（九蒸九制）多糖中单糖组成均检测到岩藻糖、果糖，9种饮片黄精多糖中岩藻糖含量为7.62～3.28 mg·g^-1，果糖含量为5.36～0.78 mg·g^-1；岩藻糖与果糖含量比值为1.42～4.18。酒黄精蒸制次数不同，饮片中黄精多糖单糖组分岩藻糖、果糖含量及岩藻糖与果糖含量比值变化具有一定的规律性。上述结果可为酒黄精炮制工艺标准化及酒黄精质量评价提供参考依据。

关键词：酒黄精；多糖；单糖组分；九蒸九制

Study on the Changes of Polysaccharide Monosaccharide Composition from Polygonatum sibiricum in the Process of Multi-Steam-Multi-Bask

TU Shifeng MIN Jiang HUANG Jiajia

（1.Nanchang Inspection and Testing Center， Nanchang 330000， China;

2.Puning Hospital of Traditional Chinese Medicine， Puning 515300， China）

Abstract： HPLC-ESLC method was used to determine the changes of polysaccharide monosaccharide composition from Polygonatum sibiricum by different batch of different steaming processes， which provided the basis for standardization evaluation of distillate extract processing technology. The results showed that fucose and fructose were detected in the polysaccharides of Polygonatum sibiricum （Polygonatum decoction pieces）， processed Polygonatum sibiricum （one-steam-one-bask）， processed Polygonatum sibiricum （two-steam-two-bask）， processed Polygonatum sibiricum （four-steam-four-bask）， processed Polygonatum sibiricum （six-steam-six-bask）， and processed Polygonatum sibiricum （nine-steam-nine-bask） polysaccharides. The content of fucose in polysaccharide of nine kinds of decoction pieces was from 7.62 mg·g^-1 to 3.28 mg·g^-1， the content of fructose in polysaccharideand was from 5.36 mg·g^-1 to 0.78 mg·g^-1， the ratio of fucose to fructose of polysaccharide was from 1.42 to 4.18. The contents of fucose and fructose， as well as the ratio of fucose and fructose of polysaccharide monosaccharide in processed Polygonatum sibiricum were changed regularly with different steaming times. The above results can provide reference for the standardization of processing technology and quality evaluation of wine yellow essence.

Keywords： processed Polygonatum sibiricum; polysaccharides; monosaccharide components; nine-steam-nine-bask

黄精始载于《名医目录》，味甘、性平，归脾、肺、肾经，具有补气养阴、健脾、润肺及益肾等功效[1]。生黄精具麻味，刺激咽喉，蒸后补脾、润肺、益肾功能增强，并可除去麻味，以免刺激咽喉，临床使用前需要经过炮制以降低其刺激性、增强其功效[2]。蒸法是黄精炮制方法之一，历代文献中均有记载[3]。《中华人民共和国药典》（2020年版）规定酒黄精炮制方法之一为酒蒸（一蒸一晒）[1]。我国古法炮制推崇九蒸九制[4]，借助蒸制过程使之滋而不腻，更好地发挥补益作用。诸多研究结果显示，黄精多糖是黄精化学组成的一个重要部分，是黄精主要生物学活性成分之一，发挥补益作用[5]。黄精蒸制次数不同可导致黄精多糖的单糖组分发生变化[6]。分析黄精多糖单糖组成，即是解析黄精多糖结构[7]。本研究使用三氟乙酸将提取出来的酒黄精多糖水解为单糖，通过蒸发光散射技术[8]，分析一蒸一晒、二蒸二晒……九蒸九晒等多种蒸制方法对炮制品黄精多糖分子结构变化的影响规律，即黄精多糖的单糖组分变化规律，为酒黄精炮制工艺标准化及炮制品质量控制指标制定提供依据。

1 材料与方法

1.1 实验样品

样品1～10工艺号原药材产于湖南省，基源为多花黄精（Polygonatum cyrtonema Hua），均由江西中医药大学的中药鉴定教研室进行植物基源鉴定。样品信息具体见表1。

1.2 仪器、试剂

日立Primaide（企业级）高效液相色谱仪、通微UMIEX 7700蒸发光检测器以及XS105DU电子天平、ME204E电子天平（梅特勒-托利多公司）。

乙腈（色谱纯），三氟乙酸、正丁醇、氯仿、无水乙醇（分析纯）。

实验用水为娃哈哈纯净水，绍兴黄酒购于绍兴女儿红酿酒有限公司。对照品有岩藻糖（nkl-00538230316，含量98%，成都钠钶锂生物科技有限公司）、果糖（100231-202008，中国药品生物制品检定所）。

1.3 实验方法

1.3.1 黄精、酒黄精炮制

（1）黄精炮制工艺。取完整、无霉变的黄精生品，剔除须根、洗净、润透，切药机切厚片，晾晒干即得。

（2）酒黄精炮制工艺。取完整、无霉变的黄精药材，剔除须根、洗净、干燥，按20%比例加入黄酒，搅拌均匀闷润12 h，置木制蒸笼内蒸制8 h，放凉至酒黄精软硬合适状，切厚片，摊晾晒干，即得酒黄精（一蒸一制）饮片。取酒黄精（一蒸一制）饮片，按20%比例加入黄酒，搅拌均匀闷润12 h，置木制蒸笼内蒸制8 h，摊晾晒干即得取酒黄精（二蒸二制）饮片。按照上述方法分别制得酒黄精（三蒸三制）、酒黄精（四蒸四制）、（五蒸五制）、酒黄精（六蒸六制）、酒黄精（七蒸七制）、酒黄精（八蒸八制）、酒黄精（九蒸九制）。

1.3.2 供试品溶液

取本品粉末（过三号筛）约5.0 g，精密称定，置索氏提取器中，加80%乙醇适量，加热回流提取4 h，弃去乙醇液，药渣挥干，精密加水100 mL，密塞，称定质量，煎煮1 h，再称定质量，用水补足减少的质量，混匀、离心。之后精密量取上清液5 mL，置安瓿瓶中，加2 mol·L^-1的三氟乙酸1 mL封口、混匀，110 ℃水解1 h，水浴蒸干、放冷，残渣用水溶解，转移至5 mL量瓶中，并稀释至刻度，摇匀、滤过，取续滤液，即得供试品溶液。

1.3.3 混合对照品溶液

精密称取适量岩藻糖、果糖对照品，加水制成含6.24 mg·L^-1岩藻糖、1.98 mg·L^-1果糖的混合对照品储备溶液。

1.3.4 色谱条件

色谱柱为安捷伦ZORBAX Original 70Å Carbohydrate Analysis（4.6 mm×250 mm，5 μm），柱温为30 ℃，流动相为乙腈-水（85∶15），流速1 mL·min^-1，ELSD漂移管温度为75 ℃，气体流量为2.5 L·min^-1，增益为1。分别精密吸取对照品溶液2 μL（或5 μL）、10 μL，供试品溶液10～20 μL，注入高效液相色谱仪进行测定，以外标两点法对数方程计算。结果如图1所示，岩藻糖、果糖两种成分色谱峰分离良好，与相邻峰的分离度大于1.5，表明该分析方法专属性良好，适用于黄精、酒黄精中岩藻糖、果糖的测定。

2 结果与分析

2.1 线性关系考察

精密吸取1.3.3项下岩藻糖、果糖混合对照品储备液，按相关倍数稀释，制备0.12 mg·mL^-1、0.25 mg·mL^-1、0.62 mg·mL^-1、1.25 mg·mL^-1、2.50 mg·mL^-1和6.24 mg·mL^-1等6个浓度的岩藻糖及0.040 mg·mL^-1、0.079 mg·mL^-1、0.198 mg·mL^-1、0.396 mg·mL^-1、0.792 mg·mL^-1和1.980 mg·mL^-1等6个浓度的果糖混合对照品溶液，按1.3.4项下的色谱条件进行测定，以峰面积的常用对数为纵坐标（lgA），以相应的质量浓度的常用对数值lgC为横坐标（X），绘制标准曲线，计算线性范围、r值，结果见表2。结果显示，两种成分分别在各自浓度范围内线性关系良好，表明该方法适用于不同浓度水平的岩藻糖、果糖定量测定。

2.2 精密度实验

精密吸取1.3.2项下供试品酒黄精（一蒸一制）溶液10 μL，连续进样6次，按1.3.4项下色谱条件进行测定。岩藻糖、果糖成分峰面积常用对数值lgC的相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）分别为1.31%和1.40%，表明该方法的精密度良好。

2.3 稳定性实验

精密吸取1.3.2项下供试品酒黄精（一蒸一制）溶液10 μL，于0 h、2 h、4 h、6 h、8 h和24 h，分别进样测定，岩藻糖、果糖峰成分面积常用对数值lgC的RSD分别为0.88%和1.06%，表明24 h内样品中的岩藻糖和果糖具有良好的稳定性。

2.4 重复性实验

取酒黄精（一蒸一制）样品，按1.3.2项方法平行制备6份供试品溶液，取1.3.3项下对照品储备溶液制备含0.25 mg·mL^-1岩藻糖、0.079 mg·mL^-1果糖混合对照品溶液，按1.3.4项下色谱条件测定。测定结果为供试品中岩藻糖含量为0.62%、RSD为2.03%，果糖含量为0.20%、RSD为1.79%。这表明该实验方法重复性良好。