高效液相色谱法测定保健酒中淫羊藿苷的含量

作者: 谢勇 吴凌* 王天西 郑秋萍 居广琳 赵华楠

高效液相色谱法测定保健酒中淫羊藿苷的含量0

摘 要:目的:建立高效液相色谱法测定保健酒中淫羊藿苷含量的分析方法。方法:保健酒中淫羊藿苷经甲醇提取,采用XB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)分离,外标法定量。结果:淫羊藿苷在0.117~58.500 μg·mL-1质量浓度范围内呈良好的线性关系,相关系数大于0.999,方法检出限为0.1 mg·kg-1,定量限为0.3 mg·kg-1。方法的加标回收率为95.3%~100.9%,相对标准偏差<5%。结论:该方法简便、灵敏、快速,可用于保健酒中淫羊藿苷的测定。

关键词:保健酒;淫羊藿苷;高效液相色谱法

Abstract: Objective: To establish an analytical method for the determination of icariin content in health wine by high performance liquid chromatography. Method: Icariin in health wine was extracted by methanol, separated by XB-C18 column (150 mm×4.6 mm, 5 μm), and quantified by external standard method. Result: Icariin showed a good linear relationship in the mass concentration range of 0.117 μg·mL-1 to 58.500 μg·mL-1, the correlation coefficient was greater than 0.999, the detection limit of the method was 0.1 mg·kg-1, and the quantitative limit was 0.3 mg·kg-1. The recoveries of the spikes were 95.3% to 100.9%, and the relative standard deviation was less than 5%. Conclusion: This method is simple, sensitive and rapid, and can be used for the determination of icariin in health wine.

Keywords: health wine; icariin; high performance liquid chromatography

保健酒是以蒸馏酒、发酵酒或食用酒精为基础,以可用动植物为保健功效成分来源,并辅以食品添加剂为其增香、增色、增味的一种饮料酒。保健酒以滋补养生、强身健体为目的,适用于特定人群以调节机体功能,但一般无治疗作用[1-2]。目前,市面上常见的保健酒配方中常涉及淫羊藿原料,而淫羊藿的主要活性成分是淫羊藿苷。有研究表明,淫羊藿苷能提高机体免疫力,具有抗衰老、抗炎、抗肿瘤等作用[3-4]。目前,测定淫羊藿苷的方法较多,常见的有紫外分光光度法[5]、薄层扫描法[6]、高效液相色谱法[7]以及毛细管胶束电动色谱法[8]。

本文建立保健酒中淫羊藿苷的高效液相色谱法,方法简单、普及应用性强,有助于企业相关产品的研发及质量控制。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

6份保健酒:购自福建省福州市各个商场。

一级水;甲醇(色谱纯,山东禹王有限公司);乙腈(色谱纯,山东禹王有限公司);淫羊藿苷标准品(纯度99%,CAS号489-32-7)(福州博科生物技术有限公司)。

1.2 仪器与设备

2695高效液相色谱仪(配光电二极管阵列检测器),美国Waters公司;BAA224S电子天平(精确到0.1 mg),赛多利斯科学仪器有限公司;KQ-800KDE超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 标准溶液的配制

准确称取11.81 mg淫羊藿苷标准品于50 mL容量瓶中,用甲醇溶解并定容至刻度,混匀,配制成234 μg·mL-1的标准储备液。分别移取适量的标准储备液于容量瓶中,用甲醇稀释成0.117 μg·mL-1、1.120 μg·mL-1、5.850 μg·mL-1、11.700 μg·mL-1和58.500 μg·mL-1的系列标准工作溶液。

1.3.2 样品前处理

称取样品5.0 g,置于10 mL容量瓶,加入适量甲醇,超声提取10 min,用甲醇定容至10 mL,摇匀,过膜,待用。

1.3.3 仪器条件

XB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm);进样体积:10 μL;柱温:30 ℃;流速:1.0 mL·min-1;流动相:乙腈-水(体积比为30∶70);洗脱方式:等度洗脱;检测波长:268 nm。

2 结果与分析

2.1 液相色谱条件优化

2.1.1 检测波长的选择

本文利用二极管阵列检测器在200~800 nm波长范围内进行全扫描,以考察检测波长对淫羊藿苷目标物检测灵敏度的影响。由图1可以看出,淫羊藿苷的最大吸收峰在268 nm处,因此确定淫羊藿苷的检测波长为268 nm。

2.1.2 色谱柱的选择

分别取1.3.1项制备的标准溶液和1.3.2项制备的样品溶液,控制其他检测条件不变(1.3.3项),考察不同型号色谱柱对待测物分离情况的影响。结果表明,采用RD-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)时,淫羊藿苷的保留时间为10.0 min,峰形对称,无分叉、拖尾现象,但峰宽较大,且在实际样品检测中有杂质干扰,分离度较差,会影响淫羊藿苷的准确度定量。采用XB-C18色谱柱(150 mm×4.6 mm,5 μm)时,淫羊藿苷的保留时间为5.8 min,峰形尖锐对称,峰宽较窄,且在实际样品检测中不存在杂质干扰。综上,选择XB-C18色谱柱作为分析柱。

2.1.3 流动相的选择

本文比较了等度洗脱条件下,乙腈-水体系(30∶70,体积比)和甲醇-水体系(45∶55,体积比)下淫羊藿苷的洗脱效果。结果表明,流动相为甲醇-水体系时,淫羊藿苷的出峰时间较晚,且色谱峰有拖尾现象;流动相为乙腈-水体系时,淫羊藿苷的出峰时间较早,色谱峰不存在峰拖尾现象。因此本文选择乙腈-水作为流动相。图2为淫羊藿苷标准品色谱图。

2.2 线性方程、线性关系、检出限和定量限

按1.3.1项方法配制淫羊藿苷标准系列溶液,以淫羊藿苷质量浓度为横坐标(X),以其相对应的峰面积为纵坐标(Y),制作标准曲线。结果表明,淫羊藿苷质量浓度在0.117~58.500 μg·mL-1时具有良好的线性关系(r=0.999 9),线性拟合方程为Y=1.79×105X-4.11×102。

以3倍信噪比(S/N=3)和10倍信噪比(S/N=10)分别计算出淫羊藿苷的检测限为0.1 mg·kg-1,定量限为0.3 mg·kg-1。

2.3 回收率和精密度

取空白样品基质,分别添加2倍、4倍、20倍检测限浓度水平(0.234 mg·kg-1、0.468 mg·kg-1、2.340 mg·kg-1)的标准物质,每个水平重复6次,计算加标回收率和相对标准偏差,结果见表1。淫羊藿苷的加标回收率在95.3%~100.9%,相对标准偏差在1.2%~1.6%,表明该分析方法具有良好的准确度和精密度,适用于保健酒中淫羊藿苷的检测。

2.4 稳定性考察

分别将淫羊藿苷样品溶液在室温条件下放置0 h、8 h、16 h、24 h、36 h和48 h,考察其稳定性。结果表明,淫羊藿苷含量的相对标准偏差在2.3%~3.2%,说明该样品溶液在48 h内具有良好的稳定性。

2.5 实际样品的测定

采用本方法对市售的6种品牌保健酒进行检测,发现其中一种品牌保健酒中检出淫羊藿苷(9.8 mg·kg-1),其余5种品牌的保健酒均未检出淫羊藿苷。

3 结论

本文建立了高效液相色谱法快速测定保健酒中淫羊藿苷的含量,并对色谱条件进行优化。实验结果表明,本方法操作简便、分析速度快、灵敏度高、定量准确可靠,适用于保健酒中淫羊藿苷的测定。

参考文献

[1]郑佳,郭建军,罗惠波,等.保健酒发展及现状的思考[J].四川食品与发酵,2006,42(3):26-31.

[2]李雅新,梁慧珍,张文生,等.保健酒制作工艺的研究进展[J].中国酿造,2022,41(5):23-27.

[3]曹静,杨舒琪,曾文彬,等.高效液相色谱法测定菟丝育长合剂中淫羊藿苷的含量[J].临床与病理杂志,2020,40(7):1676-1680.

[4]李聪聪,赵鹏,秦燕勤,等.淫羊藿苷的药理活性研究进展[J].中医学报,2020,35(4):781-786.

[5]代龙,何慧,朱武成.薄层-紫外分光光度法测定降压颗粒中淫羊藿甙的含量[J].中药新药与临床药理,1997(1):42-43.

[6]王梅,宋红湘,边爱萍.助孕胶囊中淫羊藿甙的含量测定[J].中成药,2001(3):22-24.

[7]罗曼,陈万里.HPLC法测定复方杜仲口服液中淫羊藿苷的含量[J].中国药品标准,2004,5(3):42-44.

[8]梁统,周尧元,凌光鑫.毛细管胶束电动色谱法测定淫羊藿及其中药制剂中淫羊藿苷的含量[J].广东药学院学报,2000,16(2):97-99.

作者简介:谢勇(1976—),男,江西高安人,本科,高级工程师。研究方向:食品添加剂的液相色谱分析。

通信作者:吴凌(1979—),男,福建福州人,本科,高级工程师。研究方向:食品营养成分的气相色谱分析。E-mail: supermanok971@163.com。

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