超高效液相色谱-质谱联用法测定猪肉中4种喹诺酮类药物残留

摘 要：建立超高效液相色谱-质谱联用法测定猪肉中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星4种喹诺酮类药物残留的分析方法。试样经EDTA-Mcllvaine缓冲溶液提取，用HLB固相萃取柱净化，氮吹浓缩后用1 mL甲酸水溶液（0.1%）复溶，上机测定。结果表明，4种喹诺酮类药物残留组分在2.5～100.0 μg·L-1线性关系良好，方法检出限为1.0～2.5 μg·kg-1，定量限为3.0～8.0 μg·kg-1，加标回收率在90.0%～109.2%，相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）为1.01%～5.74%，适用于猪肉中4种喹诺酮类药物残留的检测。

关键词：超高效液相色谱-质谱联用法；猪肉；喹诺酮

Determination of Four Quinolone Residues in Pork by Ultra-High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry

CHEN Meina

（Shenzhen Academy of Metrology & Quality Inspection， Shenzhen 518000， China）

Abstract： Establish an analytical method for the determination of residues of four quinolone drugs， including enrofloxacin， ciprofloxacin， ofloxacin， and sarafloxacin， in pork using ultra-high performance liquid chromatography-mass spectrometry. The sample was extracted with EDTA Mcllvaine buffer solution， purified with HLB solid-phase extraction column， concentrated with nitrogen blowing， and then dissolved in 1 mL formic acid aqueous solution （0.1%） for measurement on the machine. The results showed that there was a good linear relationship between the residual components of the four quinolone drugs in the range of 2.5～100.0 μg·L-1. The detection limit of the method was 1.0～2.5 μg·kg-1， and the quantification limit was 3.0～8.0 μg·kg-1. The recovery rate was in the range of 90.0%～109.2%， and the relative standard deviation （RSD） was 1.01%～5.74%. It is suitable for the detection of four quinolone drug residues in pork.

Keywords： ultra high performance liquid chromatography-mass spectrometry; pork; quinolone

喹诺酮类药物是由人工合成的一类人畜通用的抗菌药物，其凭借高效低毒、抗菌谱广、无交叉耐药性等优点而广泛用于动物疾病治疗[1-2]。然而，动物、水产养殖过程中过量或超范围使用该类药物，通过食物链进入人体后容易产生耐药菌株，且有潜在的致癌和遗传毒性[3-4]。猪肉是公众最常食用的肉类之一，加强猪肉中的兽药残留监管对公众的身体健康非常重要。本研究参照《动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》（GB/T 21312—2007）[5]，建立了超高效液相色谱-质谱联用法（Ultra High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry，UPLC-MS）测定猪肉中4种喹诺酮类药物残留的方法。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

猪肉，来源于深圳市辖区内抽检样品。

恩诺沙星标准溶液（CDAA-S-550003-AD-1 mL）、环丙沙星标准溶液（CDAA-S-550001-AD-1.2 mL）、氧氟沙星标准溶液（CDAA-S-550006-AD-1.2 mL）、沙拉沙星标准溶液（CDAA-S-530219-AD-1.2 mL），浓度均为1 000 μg·mL-1，由上海安谱璀世标准技术服务有限公司提供；甲醇，德国默克公司提供；甲酸（99%），山东旭晨化工科技有限公司。

Mcllvaine缓冲溶液：将1 000 mL柠檬酸（0.1 mol·L-1）与625 mL磷酸氢二钠（0.2 mol·L-1）混合，调节缓冲溶液pH值为4.0±0.05。

EDTA-Mcllvaine缓冲溶液：称取60.5 g乙二胺四乙酸二钠，加入1 625 mL Mcllvaine缓冲溶液，振荡摇匀。

1.2 仪器与耗材

TSQ Quantis高效液相色谱-质谱联用仪，美国赛默飞公司；GL2202-1SCN分析天平（精度0.01 g），德国赛多利斯公司；HT190R高速台式冷冻离心机，湖南湘仪实验室仪器开发有限公司；PHS-3E pH计，上海仪电科学仪器股份有限公司；ASE-12固相萃取装置，天津奥特赛恩斯仪器有限公司；SelectCore HLB固相萃取柱，纳谱分析技术（苏州）有限公司。

1.3 试验方法

1.3.1 样品前处理

准确称取5.00 g（精确至0.01 g）均质过的猪肉试样于50 mL螺口离心管中，加入20 mL EDTA-Mcllvaine缓冲溶液（0.1 mol·L-1），用涡旋混合仪涡旋混合1 min，置于超声波清洗器中超声10 min，再于4 ℃、10 000 r·min-1的离心机中离心5 min，反复提取3次，合并上清液于试管中。

将HLB固相萃取柱置于固相萃取装置上，先用6 mL甲醇冲洗，再用6 mL超纯水活化，然后将提取得到的上清液倒入固相萃取小柱，控制以3 mL·min-1的速度过柱，弃去过滤液，再用2 mL甲醇水溶液（5%）淋洗，弃去淋洗液，抽干萃取小柱，用6 mL甲醇洗脱，收集洗脱液于试管中，置于氮吹仪中通入氮气直至吹干，加入1 mL甲酸水溶液（0.1%）溶解，涡旋混合，转移入进样小瓶中上机测定。

1.3.2 标准系列溶液配制

分别吸取1.0 mL浓度均为1 000 μg·mL-1的恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星标准溶液于100 mL容量瓶中，用甲醇稀释并定容至刻度，配制成4种喹诺酮类药物组分浓度均为10 μg·mL-1的混合标准储备液。

将混合标准储备液用甲酸水溶液（0.1%）逐渐稀释成4种喹诺酮类药物组分浓度分别为2.5 μg·L-1、5.0 μg·L-1、10.0 μg·L-1、20.0 μg·L-1、40.0 μg·L-1、80.0 μg·L-1、100.0 μg·L-1的混合标准工作系列。称取5.0 g阴性基质样品，依次加入1.0 mL混合标准工作系列溶液，按1.3中试样处理过程提取并净化。

1.3.3 仪器分析条件

（1）液相色谱条件。色谱柱：ZORBAX SB-C18（100 mm×2.1 mm，1.8 μm）；柱温：40 ℃；流速：0.3 mL·min-1；进样量：2 μL；流动相：A甲酸水溶液（0.1%）、B甲醇；梯度洗脱程序：0～0.2 min，10%B；0.2～2.5 min，10%B→50%B；2.5～3.2 min，50%B→85%B；3.2～4.5 min，85%B保持1min；4.5～5.0 min，85%B→10%B；5.0～6.0 min，10%B。

（2）扫描方式：选择反应监测（Selected Reaction Monitoring，SRM）模式；毛细管电压：3 500 V；离子源温度：300 ℃；鞘气压力：55 bar；监测离子：恩诺沙星360.3＞316.4（定量），360.3＞342.3（定性）；环丙沙星332.2＞314.3（定量），332.2＞288.3（定性）；氧氟沙星362.2＞318.3（定量），362.2＞261.2（定性）；沙拉沙星386.3＞342.3（定量），386.3＞299.3（定性）。

2 结果与分析

2.1 线性方程与相关系数

以混合标准工作系列中恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星的浓度（X）为横坐标，相对应测得的定量离子峰面积（Y）为纵坐标，由仪器工作站自动绘制标准工作曲线，计算线性回归方程与相关系数，见表1。由表1中数据可知，4种喹诺酮类药物组分在2.5～100.0 μg·L-1线性关系良好，相关系数r均大于0.99，满足相关标准对线性的要求。

2.2 方法检出限与定量限

称取5.00 g经检测不含恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星的阴性猪肉试样，添加适量4种喹诺酮类药物组分混合标准中间液进行测试，以4种喹诺酮类药物组分的定性离子的重构离子色谱峰的信噪比S/N≥3对应浓度来确定方法检出限，以定量离子的重构离子色谱峰的信噪比S/N≥10对应浓度来确定方法定量限，见表1。由表1中数据可知，4种喹诺酮类药物组分的方法检出限为1.0～2.5 μg·kg-1，方法定量限为3.0～8.0 μg·kg-1，检出限与定量限均符合方法标准《动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》（GB/T 21312—2007）中的规定。

2.3 加标回收率及精密度

称取18份经检测不含上述4种喹诺酮类药物组分的阴性猪肉试样，每6份为一组，分别添加低（2.5 μg·kg-1）、中（20.0 μg·kg-1）、高（80.0 μg·kg-1）3个浓度水平的4种喹诺酮类药物混合标准溶液，按照1.3.1样品前处理过程进行提取、净化，1.3.3仪器分析条件进行测试，计算加标回收率与精密度（以相对标准偏差表示），见表2。由表2数据可知，恩诺沙星加标回收率为99.1%～108.8%，相对标准偏差（Relative Standard Deviation， RSD）为1.01%～2.95%；环丙沙星加标回收率为90.0%～109.2%，RSD为3.07%～5.74%；氧氟沙星加标回收率为97.7%～109.1%，RSD为1.99%～2.59%；沙拉沙星加标回收率为95.6%～106.7%，RSD为1.18%～2.73%，回收率与精密度均符合《动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法》（GB/T 21312—2007）中关于回收率和RSD的要求。

3 结论

本研究参照GB/T 21312—2007，建立了UPLC-MS法测定猪肉中4种喹诺酮类药物残留的方法，恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、沙拉沙星等组分在2.5～100.0 μg·L-1线性关系良好，方法检出限为1.0～2.5 μg·kg-1，定量限为3.0～8.0 μg·kg-1，加标回收率在90.0%～109.2%，RSD为1.01%～5.74%，可用于检验检测机构对猪肉中4种喹诺酮类药物残留的抽检检测。

参考文献

[1]龙启萍，曹海兰，吕东晋，等.超高效液相色谱-质谱串联法测定牦牛肉中11种喹诺酮类药物残留[J].医学动物防制，2018，34（6）：570-573.

[2]孙晓，王涛，王永姣，等.超高效液相色谱-质谱串联法测定蜂蜜中喹诺酮类药物残留[J].食品安全质量检测学报，2019，10（17）：5604-5608.

[3]张威，胡婷婷，秦培余，等.液相色谱-质谱/质谱法测定鸡蛋粉中喹诺酮类药物残留[J].现代食品，2022，28（20）：155-158.

[4]袁荷芳，耿成钢，高蕙文，等.超高效液相色谱-串联质谱法测定水产品中16种喹诺酮类药物残留[J].中国食品，2021（19）：66-67.

[5]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.动物源性食品中14种喹诺酮药物残留检测方法 液相色谱-质谱/质谱法：GB/T 21312—2007[S].北京：中国标准出版社，2007.