高效液相色谱法测定市售月饼中的三种防腐剂

摘 要：以从市场购买的15种月饼样品为研究对象，采用高效液相色谱法测定月饼中3种常见防腐剂（苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸）的含量。结果表明，3种防腐剂的标准曲线方程线性相关系数均在0.99以上，说明该方法可以应用于月饼中防腐剂的检测。15种月饼样品中，有8种检出山梨酸，含量为0.016 2～

0.746 0 g·kg-1；有9种检出脱氢乙酸，含量为0.080 3～0.250 0 g·kg-1；有3种未检出防腐剂；15种月饼样品中均未检出苯甲酸。市售的15种月饼样品中3种防腐剂含量均符合最新的食品安全国家标准。

关键词：高效液相色谱法；月饼；苯甲酸；山梨酸；脱氢乙酸

Determination of Three Preservatives in Mooncakes by HPLC

ZHANG Feng

（Pingxiang Food Medicines Inspection Office， Pingxiang 337000， China）

Abstract： Using 15 mooncake samples purchased from the market as the research object， the content of three common preservatives （benzoic acid， sorbic acid， dehydroacetic acid） in mooncakes was determined by high performance liquid chromatography. The results showed that the linear correlation coefficients of the standard curve equations of the three preservatives were all above 0.99， indicating that the method could be applied to the detection of preservatives. Among the 15 kinds of moon cake samples， 8 kinds of sorbic acid were detected， and the content was 0.016 2～0.746 0 g·kg-1; 9 kinds of dehydroacetic acid were detected， and the content was 0.080 3～

0.250 0 g·kg-1; three preservatives were not detected; benzoic acid was not detected in 15 kinds of moon cake samples. The contents of three preservatives in 15 kinds of moon cake samples sold in the market all met the latest national food safety standards.

Keywords： high performance liquid chromatography; mooncake; benzoic acid; sorbic acid; dehydroacetic acid

月饼又称月团、丰收饼、团圆饼等，是中秋节不可或缺的美食[1]。近年来，随着经济的发展和人们生活水平的提高，月饼市场的发展趋势向好，出现了越来越多的创新型月饼产品，如低糖低脂月饼、冰淇淋月饼、火锅月饼以及巧克力、抹茶、榴莲等新兴口味的月饼。

不管月饼种类如何创新，月饼仍然属于高脂肪、高蛋白、高糖食品，很容易受到细菌、霉菌的污染而腐败变质[2]。过去人们为了抑制月饼中微生物的繁殖，延长保质期，往往减少月饼含水量，提高含糖量，口感比较干硬。现在人们为了延长月饼的货架期或改善月饼的风味，选择在月饼中添加防腐剂。防腐剂又被称为抗菌剂或保护剂，可直接或间接地作用于微生物的蛋白质、遗传物质、酶系统等，从而抑制微生物的生长、繁殖、代谢[3]。因此，在食品中添加适量的防腐剂可以减缓食品变质，延长食品的保质期，提高经济效益。

在月饼生产过程中，应当根据月饼的原料和成分选择合适的防腐剂种类和用量。苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸是我国常用的有机化学防腐剂，而根据《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》（GB 2760—2014）的规定，苯甲酸不能用于月饼的防腐；山梨酸属于酸性防腐剂，在碱性食品中对霉菌和酵母的抑制效果会下降，在烘焙食品中利用山梨酸与其他防腐剂复配使用的协同效应，可以提高防腐效果；脱氢乙酸可以抑制酵母菌与霉菌的生长且抑菌效果不受食品酸碱度和温度的影响，在月饼中的用量为0.03%～0.05%[4]。在部分月饼中，可能有些成分本身有一定的抗菌性，可减少防腐剂的用量。一般情况下，合理使用食品防腐剂不会对人体造成危害[5]。在保证防腐效果的前提下，应尽量减少防腐剂的使用量，但是一些商家为了追求利益最大化，使用国家标准禁用的防腐剂，或超量使用食品添加剂，因此，需对月饼中常见的防腐剂进行检测。随着食品防腐剂种类的增多，食品安全检测的要求不断提高，检测任务越来越艰巨，传统检测方法如薄层色谱法、分光光度法、毛细管电泳法等面临着诸多挑战，而利用高效液相色谱法检测食品中的化学成分，具有检测速度快、灵敏度高等优点[6]。本研究采用高效液相色谱法分别对市售15种月饼样品中苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸的含量进行检测，为消费者购买安全、健康、营养的月饼提供参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

1.1.1 仪器

Waters2695高效液相色谱仪；sartorius十万分之一电子天平；METTLER TOLEDO万分之一电子天平；TDZ5-WS离心机；KQ-500DB数控超声波清洗仪。

1.1.2 试剂

苯甲酸标准品（批号：AO200517-03，有效期至2024-06-16），纯度≥99.0%；山梨酸标准品（批号：AL200620-17，有效期至2025-06-19），纯度≥99.0%；脱氢乙酸标准品（批号：7700800，有效期至2025-06-30），纯度≥98%；正己烷；亚铁氰化钾（92 g·L-1）；乙酸锌（183 g·L-1）；氢氧化钠溶液（20 g·L-1）；硫酸锌（120 g·L-1）；乙酸铵

（0.02 mol·L-1）。除另有声明外，所用试剂均为分析纯，实验用水为超纯水。

1.2 色谱条件

1.2.1 苯甲酸、山梨酸的色谱条件

色谱柱C18柱（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流动

相：甲醇+乙酸铵溶液=5+95；流速：1 mL·min-1；检测波长：230 nm；进样量：10 μL。

1.2.2 脱氢乙酸的色谱条件

色谱柱C18柱（250 mm×4.6 mm，5 µm）；流动相：甲醇+0.02 mol·L-1乙酸铵=10+90；流速：

1.0 mL·min-1；柱温：30 ℃；进样量：10 μL；检测波长：293 nm。

1.3 标准溶液的配制

1.3.1 苯甲酸、山梨酸标准溶液的配制

分别称取0.115 40 g苯甲酸、0.104 30 g山梨酸标准品用甲醇溶解定容到100 mL容量瓶中，制成浓度约为1 000 mg·L-1的苯甲酸、山梨酸标准储备液。准确吸取苯甲酸、山梨酸标准储备溶液各10.0 mL于50 mL容量瓶中，用水定容，制成浓度约为200 mg·L-1的苯甲酸、山梨酸混合标准中间液。分别准确吸取苯甲酸、山梨酸混合标准中间溶液0 mL、0.05 mL、

0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.50 mL、5.00 mL和10.00 mL，用水定容至10 mL，配制成质量浓度分别约为0 mg·L-1、1.000 mg·L-1、5.000 mg·L-1、

10.000 mg·L-1、20.000 mg·L-1、50.000 mg·L-1、100.000 mg·L-1和200.000 mg·L-1的混合标准系列工作溶液。

1.3.2 脱氢乙酸标准溶液的配制

准确称取0.130 50 g脱氢乙酸标准品用10 mL

20 g·L-1的氢氧化钠溶液溶解，用水定容到100 mL的容量瓶中，制成浓度约为1 000 mg·L-1的标准储备液，分别吸取脱氢乙酸储备液0.1 mL、0.5 mL、1.0 mL、2.0 mL、5.0 mL、10.0 mL和20.0 mL于100 mL容量瓶中，用水定容。配制成浓度约为

1.000 μg·mL-1、5.000 μg·mL-1、10.000 μg·mL-1、20.000 μg·mL-1、50.000 μg·mL-1、100.000 μg·mL-1和200.000 μg·mL-1标准工作液。

1.4 样品的预处理

1.4.1 测定苯甲酸、山梨酸的样品预处理方法

准确称取经过粉碎、挤压搅拌均匀后的月饼样品约2 g（精确到0.001 g）试样于50 mL具塞离心管中，加水约25 mL，涡旋混匀，于50 ℃水浴超声20 min，冷却至室温后加2 mL的亚铁氰化钾（92 g·L-1）溶液和2 mL的乙酸锌（183 g·L-1）溶液，混匀，于8 000 r·min-1离心5 min，将水相转移至50 mL容量瓶中，于残渣中加水20 mL，涡旋混匀后超声5 min，于8 000 r·min-1离心5 min，将水相转移到同一50 mL容量瓶中，并用水定容至刻度线，混匀。取适量上清液过0.22 µm滤膜，待液相色谱测定。

1.4.2 测定脱氢乙酸的月饼样品预处理方法

准确称取用粉碎机粉碎或不锈钢高速均质器均质的月饼样品约2 g（精确至0.001 g），置于25 mL离心管中，加入约10 mL水、5 mL硫酸锌（120 g·L-1）溶液，用氢氧化钠（20 g·L-1）溶液调节pH值至7.5，转移至25 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，摇匀。置于离心管中，超声提取10 min，转移到分液漏斗中，加入

10 mL正己烷，振摇1 min，静置分层，弃去正己烷层，加入10 mL正己烷重复进行一次，取下层水相置于离心管中，4 000 r·min-1离心10 min。取上清液过0.45 μm有机滤膜，供高效液相色谱测定。

1.5 回收率与精密度实验

本实验采用不含苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸的月饼样品进行加标回收率和精密度实验，称取空白月饼样品约2 g，分别添加质量浓度为10.0 mg·L-1、20.0 mg·L-1、50.0 mg·L-1的苯甲酸、山梨酸标准溶液，添加质量浓度为10.0 μg·mL-1、20.0 μg·mL-1、

50.0 μg·mL-1的脱氢乙酸标准溶液，按照1.4的方法预处理样品，进行加标回收率实验，每个加标水平进行6次平行测定，计算平均加标回收率和相对偏差。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸分别在设定的高效液相色谱特定条件下测定，以峰面积为纵坐标，标准溶液质量浓度为横坐标，以色谱峰的保留时间定性，峰面积定量，线性拟合得到苯甲酸、山梨酸、脱氢乙酸3种防腐剂的线性回归方程如表1所示。