无花果中黄酮类化学成分及抗氧化活性研究

摘 要：采用多种色谱分离技术从无花果中分离得到4个黄酮类化合物，经波谱分析，分别鉴定为槲皮素、山奈酚、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷。抗氧化活性测试表明，山奈酚、山奈酚-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷显示出比维生素C更强的ABTS自由基清除活性；槲皮素、山奈酚、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖基-7-O-α-L-鼠李糖苷显示出比维生素C更好的DPPH自由基清除活性。

关键词：无花果；黄酮；化学成分；抗氧化活性

Study on Chemical Constituents and Antioxidant Activities of Flavonoids in Fig

DONG Limei， KONG Lingxi， CHEN Daixin， LAN Leqi， WU Ziyi， ZHAO Tong*

（Guangdong Eco-Engineering Polytechnic， Guangzhou 510520， China）

Abstract： Four flavonoids were isolated from figs by various chromatographic separation techniques. On the basis of spectral data， they were identified as quercetin， kaempferol， kaempferol-3-O-β-D-glucoside， quercetin-3-O-β-D-glucosyl-7-O-α-L-rhamnoside. Antioxidant activity test demonstrated that kaempferol， kaempferol-3-O-β-D-glucoside and quercetin-3-O-β-D-glucosyl-7-O-α-L-rhamnoside showed stronger ABTS free radical scavenging activity than vitamin C. Quercetin， kaempferol and quercetin-3-O-β-D-glucosyl-7-O-α-L-rhamnoside showed better DPPH free radical scavenging activity than vitamin C.

Keywords： fig; flavonoid; chemical constituents; antioxidant activity

无花果又称奶浆果、文仙果，为桑科榕属植物无花果（Ficus carica Linn.）的聚花果，富含膳食纤维、维生素和矿物质[1-2]，有润肺止咳、健脾开胃、润肠通便等功效[1，3]。此外，无花果还具有抗氧化、调节免疫、抗肿瘤、保肝、降血脂等作用[4-6]，是一种营养丰富的优稀水果，越来越受到消费者的喜爱。

本文以无花果为研究对象，对无花果中的黄酮类化学成分进行提取和分离，通过质谱、核磁共振氢谱和碳谱等波谱学分析鉴定它们的化学结构，并测试其抗氧化活性，为无花果的综合利用和功能性产品的开发提供参考依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

无花果采自广东生态工程职业学院后山休闲农业创意园，波姬红品种。

1.2 主要仪器与试剂

乙酸乙酯、氯仿、甲醇等分析纯化学试剂，天津富宇精细化工有限公司；乙腈，天津康科德公司；DPPH[1，1-diphenyl-2-picrylhydrazyl radical 2，2-diphenyl-1-（2，4，6-trinitrophenyl） hydrazyl]、过硫酸钾、维生素C、ABTS[2，2’-Azinobis-（3-ethylbenzthiazoline-6-sulphonate）]，Sigma公司。

DRX-500核磁共振波谱仪，德国Bruker；LC-20AT高效液相色谱仪，日本Shimadzu；N1000旋转蒸发仪，日本EYELA；APCI 2000电喷雾电离质谱仪，美国Applied Biosystems。

1.3 实验方法

1.3.1 提取与分离

无花果鲜果切片（25.26 kg）用95%的乙醇浸泡提取3次，每次48 h，提取液合并后减压浓缩得糖浆状浸膏，浸膏用少量水溶解成混悬液，然后用石油醚和乙酸乙酯等溶剂分别萃取3次。乙酸乙酯萃取液合并后减压浓缩至干（89.15 g），利用正相硅胶柱层析，用氯仿-甲醇（85∶15→80∶20→75∶25→70∶30→60∶40→50∶50→0∶100）进行梯度洗脱，用薄层色谱检测，合并主点相同的流分，得到E1～E6共6个组分。选择目标主点明确的流分E5经反相中压柱层析，以甲醇-水（20∶80→25∶75→30∶70→

40∶60→50∶50→60∶40→70∶30→100∶0）为流动相梯度洗脱，得到亚组分E5-1～E5-8。继续追踪目标主点，选择E5-4反复经葡聚糖凝胶柱色谱分离，用甲醇洗脱，分别得到化合物1（6.3 mg）和化合物2（5.6 mg）。选择目标主点明确的流分E4经反相中压柱层析，以甲醇-水（15∶85→20∶80→

25∶75→30∶70→40∶60→50∶50→60∶40→100∶0）为流动相梯度洗脱，得到亚组分E4-1～E4-7。继续追踪目标主点，选择E4-5经葡聚糖凝胶柱色谱分离，用甲醇作为流动相洗脱，得到E4-5-1～E4-5-3。E4-5-2用制备型高效液相色谱分离，乙腈-水（25∶75）作为流动相，流速为

10 mL·min-1，在保留时间为78 min时得到化合物

3（5.3 mg）。E4-5-3经制备型高效液相色谱分离，甲醇-水（18∶82）作为流动相，流速为8 mL·min-1，

在保留时间为96 min时得到化合物4（4.6 mg）。

1.3.2 抗氧化活性测试

（1）ABTS自由基清除率测试。参考DONG等[7]的方法，将等体积的7 mmol·L-1的ABTS溶液与

2.45 mmol·L-1的K2S2O8溶液混合均匀，避光放置

12 h后，用PBS溶液稀释，制备ABTS自由基工作液。用甲醇将待测化合物进行梯度稀释，使样品在反应液中的最终浓度分别为100.000 µmol·L-1、

50.000 µmol·L-1、25.000 µmol·L-1、12.500 µmol·L-1、

6.250 µmol·L-1和3.125 µmol·L-1，测试化合物1～4清除ABTS自由基的能力。取10 µL不同浓度的待测样品溶液与190 µL ABTS自由基工作液混合均匀，反应6 min后，在734 nm波长下用酶标仪测量反应液的吸光度。以维生素C作阳性对照，每个样品平行测定3次。使用SPSS软件计算化合物对ABTS自由基清除率达到50%时的质量浓度，即IC50值。

（2）DPPH自由基清除率测试。参考DONG等[7]的方法，现配制0.1 mmol·L-1的DPPH工作液，用甲醇将待测化合物进行梯度稀释，使样品在反应液中的最终浓度分别为100.000 µmol·L-1、50.000 µmol·L-1、25.000 µmol·L-1、12.500 µmol·L-1、6.250 µmol·L-1和

3.125 µmol·L-1，测试化合物1～4清除DPPH自由基的能力。取50 µL不同浓度的待测样品溶液与

150 µL DPPH工作液混合均匀，避光反应30 min，在517 nm波长下用酶标仪测量反应液的吸光度。以维生素C作阳性对照，每个样品平行测定3次。使用SPSS软件计算化合物对DPPH自由基清除率达到50%时的质量浓度，即IC50值。

2 结果与分析

2.1 化合物结构鉴定

化合物1为黄色粉末，ESI-MS（m/z） 303[M+H]+、301[M-H]–，分子式为C15H10O7。（1）1H-NMR

（500 MHz，CD3OD）。δ：6.18（d，J=2.0 Hz，1H，H-6），6.39（d，J=2.0 Hz，1H，H-8），7.73（d，J=2.1 Hz，1H，H-2’），6.88（d，J=8.5 Hz，1H，H-5’），7.63（dd，J=8.5、

2.1 Hz，1H，H-6’）。（2）13C-NMR（125 MHz，CD3OD）。δ：148.0（C-2），137.2（C-3），177.3（C-4），158.2（C-5），99.2（C-6），165.6（C-7），94.4（C-8），162.5（C-9），104.5（C-10），124.2（C-1’），116.0（C-2’），146.2（C-3’），148.8（C-4’），116.2（C-5’），121.7（C-6’）。以上数据与陶靓等[8]报道的波谱数据一致，因此鉴定化合物1为槲皮素。

化合物2为黄色粉末，ESI-MS（m/z） 309[M+Na]+、285[M-H]–，分子式为C15H10O6。（1）1H-NMR

（500 MHz，CD3OD）。δ：6.16（d，J=2.1 Hz，1H，H-6），6.37（d，J=2.1 Hz，1H，H-8），8.06（d，J=8.9 Hz，1H，H-2’，6’），6.89（d，J=9.0 Hz，1H，H-3’，5’）。（2）13C-NMR

（125 MHz，CD3OD）。δ：148.0（C-2），137.1（C-3），177.3（C-4），158.2（C-5），99.3（C-6），165.5（C-7），94.5（C-8），162.5（C-9），104.5（C-10），123.7（C-1’），130.6（C-2’），116.3（C-3’），160.5（C-4’），116.3（C-5’），130.6（C-6’）。以上数据与李胜华等[9]报道的波谱数据是一致的，因此鉴定化合物2为山柰酚。

化合物3为黄色粉末，ESI-MS（m/z） 471[M+Na]+、447[M-H]–，分子式为C21H20O11。（1）1H-NMR

（500 MHz，CD3OD）。δ：8.05（2H，d，J=8.9 Hz，H-2’，6’），6.89（2H，d，J=8.9 Hz，H-3’，5’），6.39（1H，d，J=2.1 Hz，H-8），6.20（1H，d，J=2.1 Hz，H-6），5.25（1H，d，J=7.5 Hz，H-1’’），3.70（1H，dd，J=11.9、2.3 Hz，H-6’’a），3.54（1H，dd，J=11.9、5.5 Hz，H-6’’b）。（2）13C-NMR（125 MHz，CD3OD）。δ：159.1（C-2），135.5（C-3），179.5（C-4），163.0（C-5），99.9（C-6），165.9（C-7），94.8（C-8），158.5（C-9），105.7（C-10），122.8（C-1’），132.3（C-2’，C-6’），116.1（C-3’，C-5’），161.5（C-4’），104.2（C-1’’），75.7（C-2’’），78.4（C-3’’），71.4（C-4’’），78.0（C-5’’），62.6（C-6’’）。上述数据与张静等[10]报道的波谱数据基本一致，因此鉴定化合物3是山柰酚-3-O-β-D-葡萄糖苷。