检测实验室参加畜禽产品中兽药残留能力验证质量控制探索

摘 要：2020—2021年，实验室参加农业农村部农产品质量安全监管司组织的畜禽产品中兽药残留检测能力验证考核，提高了实验室对畜禽产品中兽药残留的检测水平，实验室检测能力得到了有效验证。在能力验证过程中，实验室在试验准备、实施试验、结果报送环节中，从人员、仪器、材料、方法和环境等5方面着手，进行检测质量控制。实验室在考核鸡肉中氟喹诺酮类兽药残留和猪肉中磺胺类兽药残留的项目中，均获得满意结果。实验室参加农业农村部农产品质量安全监管司组织的畜禽产品中兽药残留检测能力验证考核，检测结果合格，表明实验室在能力验证试验过程中，其质量控制方法有效、检测能力较好。

关键词：畜禽产品;兽药残留;能力验证;质量控制

Research on the Quality Control of Participating Proficiency Testing of Veterinary Drug Residues in Livestock and Poultry Products by Testing Laboratory

TENG Shuang， LV Qingqin， BAO Yuehong， QIAN Hang， WANG Wei*

（College of Food Science and Technology/Supervision， Inspection and Testing Center for Quality of Meat-products （Nanjing） Ministry of Agriculture and Rural Affairs， Nanjing Agricultural University， Nanjing 210095， China）

Abstract： In order to improve the detection ability of veterinary drug residues in livestock and poultry products， and verify laboratory testing capability， the laboratory participated in the proficiency testing of veterinary drug residues in livestock and poultry products organized by the department of quality and safety supervision of agricultural products Ministry of Agriculture and rural Affairs from 2020 to 2021. During the proficiency testing， control method is carried out in the preparation， implementation process and results report from five aspects： personnel， instrument， material， method and environment. Satisfactory results were obtained for fluoroquinolones in chicken and sulfonamides in pork. The laboratory has passed the proficiency testing organized by the department of quality and safety supervision of agricultural products Ministry of Agriculture and rural Affairs， which proves that the quality control method is effective and the testing capability of the laboratory is good.

Keywords： livestock and poultry products; veterinary drug residue; proficiency testing; quality control

能力验证（Proficiency Testing，PT）是利用实验室间比对，按照预先制定的准则评价参加者的能力[1-4]。对于食品检验机构来说，能力验证是重要的外部质量评价活动和实验室质量监控的重要手段，是实验室认可机构和实验室用户评定食品检测实验室检测能力的主要依据之一，也是食品检测实验室进行自我评定的重要尺度[5-8]。食品检验机构通过参加能力验证，可以全面检验实验室的各方面工作，提升检验人员的检测能力和质量体系的管理水平，为实验室提供评价其出具数据可靠性和有效性的客观证据[9-14]。检测实验室每年制定质量控制计划，定期参加能力验证，是保证检测能力水平的重要手段，也是资质认定和机构考核的必须要求。

随着国民经济水平的提高，人们对畜禽产品的需求日益增多，在促进我国畜禽养殖业发展的同时，因用药不当等因素，兽药残留严重危害我国畜禽产品的质量安全，并对消费者的身体健康和生命安全造成了严重的危害[15-17]。兽药主要包括抗生素类、驱肠虫药类、生长促进剂类、抗原虫药类、灭锥虫药类、镇静剂类和β-肾上腺素能受体阻断剂等七大类[18]。磺胺类（Sulfonamides，SAs）和氟喹诺酮类（Fluoroquinolones，FQs）药物，作为广谱抗菌药，因其具有抗菌谱广、抗菌能力强、价格低廉等优点，已被广泛应用于兽医临床和畜牧养殖业中[19-22]。饲养过程中滥用抗菌药物，会在动物体内造成药物残留，经食物链进入人体后，对人的身体健康造成严重危害，并导致许多细菌产生耐药性[23-27]。我国2019年发布的《食品安全国家标准 食品中兽药最大残留限量》（GB 31650—2019）中明确规定在动物性食品中的磺胺类、氟喹诺酮类兽药最大残留限量（Maximum Residue Limits，MRLs）[28]。目前检测动物源性食品中的氟喹诺酮和磺胺的标准方法主要为液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）和液相色谱-串联质谱法（High Performance Liquid Chromatography-Mass Spectrometry，HPLC-MS/MS），而HPLC法是目前常用的比较经济实用的检测手段，既可满足动物性食品中兽药残留的准确定性、定量检测，也由于价格因素配置普遍，更适用于各类基层检验检测实验室[29-36]。

为提升和强化检测实验室对畜禽产品中的兽药残留检测能力，本实验室连续多年参加农业农村部农产品质量安全监管司组织的畜禽产品中的兽药残留能力验证。考核项目包括鸡肉中的恩诺沙星（Enrofloxacin，ENR）、环丙沙星（Ciprofloxacin，CIP）、沙拉沙星（Sarafloxacin，SAR）和达氟沙星（Danofloxacin，DAN），猪肉中的磺胺二甲基嘧啶（Sulfamethazine，SM2）、磺胺间甲氧嘧啶（Sulfamonomethoxine，SMM）、磺胺甲噁唑（Sulfamethoxazole，SMZ）、磺胺二甲氧嘧啶（Sulfadimethoxine，SDM）和磺胺喹噁啉（Sulfamethoxazole，SQ）。本文就2020—2021年参加畜禽产品中的兽药残留能力验证过程、结果进行分析，讨论检测过程中质量控制的关键点，总结能力验证过程中把握关键点获得满意结果的经验，以期为各级各类农产品检验检测实验室通过能力验证和提升检测质量提供一定的路径与参考。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

猪肉（含磺胺类药物）能力验证样品、鸡肉（含氟喹诺酮类药物）能力验证样品由中国兽医药品监察所提供;磺胺类药物阴性生鲜猪肉和氟喹诺酮类药物阴性生鲜鸡肉均由农业农村部肉及肉制品质量监督检验测试中心（南京）提供。

标准物质：恩诺沙星、环丙沙星、盐酸沙拉沙星、甲磺酸达氟沙星、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、磺胺甲恶唑、磺胺二甲氧嘧啶和磺胺喹噁啉（德国Dr. Ehrenstofer公司）。

乙腈、甲醇、正己烷（色谱纯，美国Fisher公司）;磷酸（H3PO4）、氢氧化钠（NaOH）、三乙胺（C6H15N）、磷酸二氢钾（KH2PO4）、冰乙酸（CH3COOH）、正丙醇（C3H7OH）和无水硫酸钠（Na2SO4）（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）;实验用水均为一级水。

1.2 仪器与设备

2695高效液相色谱仪（配2489紫外检测器、2475荧光检测器）、碱性氧化铝固相萃取柱（2 g/6 mL，美国Waters公司）;XS105电子天平（感量0.01 mg，瑞士Mettler-Toledo公司）;PRACTUM612-1CN电子天平（感量0.01 g）、advance EDI& pro VF纯水仪、D-16C台式冷冻离心机（德国Sartorious公司）;VORTEX GENIUS3涡旋混匀器、HS 501数显型混匀器（德国IKA公司）;STAR A221 pH测定仪、Syncronis C18色谱柱（250 mm×4.6 mm， 5 μm）（美国Thermo公司）;Bond Elut C18固相萃取柱（200 mg/3 mL，美国Agilent公司）。

1.3 实验方法

根据能力验证文件规定，各单位可自行选择现行有效，且有检测限和（或）定量限以及回收率规定的方法。因此，本实验室分别采用农业部1025号公告-14-2008《动物性食品中氟喹诺酮类药物残留检测 高效液相色谱法》和农质发〔2014〕5号文附件8《磺胺类药物在动物可食性组织中残留的高效液相色谱检测方法》，进行鸡肉中氟喹诺酮类兽药残留和猪肉中磺胺类兽药残留考核。

1.3.1 氟喹诺酮类药物残留检测前处理

称取2.00 g样品（精确到0.01 g）于50 mL离心管中（能力验证样品使用领样的离心管，无需转移，以免损失和污染），加10.0 mL 0.1 mol/L磷酸盐缓冲溶液（pH=7），涡旋振荡1 min，使肉样完全分散，超声萃取5 min后，280 r/min中速振荡20 min，4 ℃下10 000 r/min离心5 min，取上清液于另一新的50 mL离心管中。残渣中加入10.0 mL 0.1 mol/L的磷酸盐缓冲溶液（pH=7），涡旋1 min，280 r/min中速振荡10 min，4 ℃下10 000 r/min离心5 min，合并2次上清液，混匀，备用。

取5.00 mL上清液，经过依次用2 mL甲醇、2 mL磷酸盐缓冲溶液预洗的Bond Elut C18固相萃取柱;用1 mL一级水淋洗，挤干;再用2.00 mL 0.05 mol/L磷酸溶液∶三乙胺-乙腈（82∶18，v∶v）洗脱，挤干，收集洗脱液;经0.45 μm滤膜过滤后作为试样溶液。

1.3.2 磺胺类药物残留检测前处理

称取5.00 g样品（精确到0.01 g）于50 mL离心管中（能力验证样品使用领样的离心管，无需转移，以免损失和污染），加入4 g无水硫酸钠，15 mL乙腈，涡旋1 min，使肉样完全分散，混匀器上280 r/min振荡20 min，4 ℃下8 000 r/min速度离心5 min，将上层溶液转移至另一离心管中，下层残渣加15 mL乙腈，涡旋混匀1 min，4 ℃下8 000 r/min速度离心5 min，合并2次上清液于同一离心管中，加入10 mL正己烷，280 r/min振荡5 min，4 ℃下8 000 r/min速度离心5 min，取下层液体，加入5 mL正丙醇，50 ℃旋转蒸发至近干，加3 mL 95%乙腈溶液，涡旋混合1 min，超声2 min，作为备用液。

将上述备用液全部经过3 mL 95%乙腈溶液活化的碱性氧化铝小柱，用5 mL 95%乙腈溶液洗涤鸡心瓶后过柱，挤干;用10 mL 70%乙腈溶液洗脱，收集洗脱液;加入5 mL正丙醇，50 ℃旋转蒸发至干，加入2.00 mL乙腈∶甲醇∶水∶冰醋酸（2.0∶2.0∶9.0∶0.2，v∶v∶v∶v）溶解，涡旋混合1 min，过0.45 μm滤膜后，采用高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，HPLC）测定。