液相色谱—原子荧光光谱联用法测定水产品中的甲基汞

摘 要：为改进检测水产品中甲基汞的方法，用盐酸溶液（5 mol/L）室温下超声水浴样品，离心后用氢氧化钠溶液（6 mol/L）中和，再用L-半胱氨酸溶液定容，经有机膜过滤，用C18色谱柱分离并检测。结果表明：甲基汞在0～50 μg/L的浓度范围内，色谱峰面积和浓度呈良好的线性关系（相关系数为0.999 5），添加3个不同浓度的甲基汞标准液，样品的加标回收率为77.2%～102.4%，相对标准偏差为5.4%～12.3%。该方法检测步骤简便、效率高、回收率也符合要求，可用于水产品中甲基汞的分析。

关键词：原子荧光；液相色谱；甲基汞

中图分类号：TS254.7 文献标志码：B 文章编号：1674-7909（2024）7-154-4

DOI：10.19345/j.cnki.1674-7909.2024.07.035

0 引言

水产品蛋白质丰富、脂肪含量低，同时还富含维生素、无机盐等人体必需营养物质，具有独特的营养价值。尽管水产品可以满足人们的营养物质需求，但其如果含有重金属，则会对人类健康造成一定的威胁。汞就是一种被重点管控的重金属。甲基汞含有剧毒［1］，能够对人体的神经系统造成严重伤害，甚至会诱发癌症［2-4］。金枪鱼作为食物链顶端的捕食者，会通过捕食其他海洋生物而摄入甲基汞。这些被捕食的海洋生物如果体内含有较高的甲基汞，那么金枪鱼体内的甲基汞含量也会相应增加。

目前，对水产品中甲基汞的检测主要采用联用技术，如液相色谱—电感耦合等离子体质谱联用法［5］、气相色谱—原子荧光联用法［6］、气相色谱—质谱联用法［7］、液相色谱—原子荧光联用法［8］等。液相色谱—电感耦合等离子体质谱联用法［5］的优点是灵敏度高、检出限低，但是仪器成本过高。气相色谱—质谱联用法［7］灵敏度高，但需要四乙基硼化钠（NaBEt4）等试剂进行衍生，操作复杂，且NaBEt4 室温下遇到含有机物的蒸汽易发生燃烧或爆炸，危险性高。采用液相色谱—原子荧光光谱联用法检测，线性方程稳定、检出限低、稳定性高。此试验通过对试样提取的处理方法进行研究，建立适合的样品提取优化条件，改进提出适用于测定水产品中甲基汞的液相色谱—原子荧光光谱联用法，为今后水产品中甲基汞检测提供方法依据。

1 试验部分

1.1 仪器与试剂

1.1.1 仪器设备

BSA-100液相色谱—原子荧光光谱联用仪，北京宝德仪器有限公司；PX223ZH/E千分之一电子天平，奥豪斯仪器（常州）有限公司；TGL16M冷冻离心机，湖南凯达科学仪器有限公司；SK3300H超声波清洗器，上海科导超声仪器有限公司；MS3basic漩涡混合器，IKA。

1.1.2 材料与试剂

盐酸为优级纯，L-半胱氨酸、乙酸铵、硼氢化钠、氢氧化钠为分析纯，甲醇为色谱纯，氯化甲基汞标准储备溶液［1 000 mg/L，上海安普璀世标准技术服务有限公司，冷冻（-20±5）℃，置于阴凉处贮存］。

1.2 仪器条件

1.2.1 原子荧光检测条件

载流为浓度10%的盐酸溶液，还原剂为2 g/L的硼氢化钠溶液，负高压为280 V，屏蔽气的流量为900 mL/min，载气的流量为400 mL/min，主阴极电流为30 mA，辅阴极电流为0 mA，蠕动泵速为35 r/min。

1.2.2 液相色谱检测条件

C18分析柱（4.6 mm×150 mm，5 μm），流动相为（3%甲醇+0.04 mol/L乙酸铵+1 g/L L-半胱氨酸），进样体积为100 μL，流速为1.0 mL/min。

1.2.3 甲基汞标准溶液的曲线配制绘制

准确吸取氯化甲基汞标准储备液1.0 mL，用流动相定容至1 000 mL，得到1.0 mg/L甲基汞标准使用液。分别准确吸取不同体积的甲基汞标准使用液，用流动相定容至10 mL的容量瓶中，以甲基汞的峰面积为纵坐标，甲基汞的浓度为横坐标，绘制标准曲线。

1.3 样品前处理

称取样品1.0 g（精确到0.001 g），放置于50 mL塑料离心管中，加入10 mL的5 mol/L盐酸溶液，于旋涡混合器中混合，水浴超声60 min，中途摇匀4次。超声结束后，放置于冷冻离心机，8 000 r/min离心15 min。离心结束后准确吸取上清液2.0 mL放置于15 mL塑料离心管中，用6 mol/L的氢氧化钠溶液进行逐滴加入，测得pH值为3～7时，加入L-半胱氨酸溶液0.1 mL，用水定容至5 mL，待用。

2 结果与分析

2.1 样品前处理条件的优化

样品前处理的目的是提取出目标化合物。此试验采用GB5009.17—2021《食品安全国家标准 食品中总汞及有机汞的测定》的第二篇第一法检测［6］；测定过程中发现，滴加0.1%的甲基橙溶液作为指示剂，溶液由红色变为橙色时，测得的pH值均超过7.0。此试验用到的色谱柱Venusi MP系列推荐的pH值范围为2.0～6.0，当样品溶液为呈碱性时，对色谱柱不利，影响使用寿命［8］。当逐一滴加6 mol/L的氢氧化钠溶液时，酸碱中和产生的热量会使甲基汞挥发，检测数值会偏低；再者样品溶液温度较高，无法第一时间测得pH值，使得试验操作烦琐耗时，降低试验效率。

因此，此试验需要在冰水浴中进行pH值调节［9］，以避免放热反应对试验数据的影响，且能提高试验效率。当用0.1%的甲基橙溶液作为指示剂，溶液由红色变为橙色时，往往pH值会超过所要求的范围，因此可以在滴定到终点时，用50 μL的移液枪缓慢贴管壁滴加6 mol/L的氢氧化钠溶液［10］，当pH值超过7.0时，也可以用微量的5 mol/L的盐酸溶液进行中和，使测得的pH值在5.0～6.5。在测定pH值时，pH计探头会残留样品溶液，需用水冲洗探头（控制在1 mL左右，以保证样品溶液的准确性）。

2.2 方法验证

用流动相将甲基汞标准使用液稀释成浓度为0.0、1.0、5.0、10.0、30.0、50.0 μg/L的标准系列溶液。甲基汞的含量与峰面积呈线性关系，以色谱峰面积为纵坐标，甲基汞浓度为横坐标，绘制曲线，计算相关系数，见表1、图1、图2。

2.3 样品测定

用该方法对不同种类、地域的水产品进行检测，包括对虾、贻贝、章鱼、青花鱼、金枪鱼、安康鱼、鲳鱼、秘鲁鱿鱼等8种水产品。样品均取可食部分，匀浆后冷冻保存备用。样品中甲基汞检出情况见表2。

2.4 加标回收率及精密度

此次试验采用金枪鱼样品进行加标试验，添加3个不同浓度的甲基汞标准液，每个浓度平行测定6次，测定加标回收率。试验结果表明，回收率的结果在77.2%～102.4%，相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）的结果在5.4%～12.3%，见表3。

3 结论

此试验采用GB 5009.17—2021《食品安全国家标准 食品中总汞及有机汞的测定》的第二篇第一法检测水产品中的甲基汞含量，并对试验条件进行优化，精密度和回收率均符合要求。此方法样品前处理过程简单，利用宝德仪器公司开发的BSA-100液相色谱—原子荧光光谱联用仪进行处理。该仪器操作简单并且运行成本低，能提供简便可靠的技术手段，可为水产品质量安全提供技术支持。

参考文献：

［1］江津津，曾庆孝，阮征，等.水产品中汞与甲基汞风险评估的研究进展［J］.食品工业科技，2007（11）：244-246.

［2］张叶，刘芳，陆荣柱.甲基汞诱导的神经毒性和凋亡［J］.国外医学（医学地理分册），2012，33（4）：280-284.

［3］曹欢，胡钰梅，潘迎捷，等.水产品中重金属异质性导致的风险［J］.生态毒理学报，2021，16（6）：161-173.

［4］宋成成.水产品中重金属污染现状及检测技术［J］.食安科普，2022（9）：40-41.

［5］陈雪昌，梅光明，张小军，等.高效液相色谱-原子荧光法测定水产品中甲基汞含量［J］.食品科学，2012，33（4）：234-237.

［6］史建波，廖春阳，王亚伟，等.气相色谱和原子荧光联用测定生物和沉积物样品中甲基汞［J］.光谱学与光谱分析，2006（2）：336-339.

［7］刘奇，柯常亮，陈洁文，等.水产品中甲基汞测定方法的优化［J］.食品工业科技，2016（3）：299-302.

［8］林凯，姜杰，黎雪慧，等.水产品中不同形态汞的高效液相色谱-原子荧光光谱分析研究［J］.中国食品卫生杂志，2014，26（1）：58-62.

［9］杨婧，胡迪，范清，等.水产品中无机汞和甲基汞的液相色谱-原子荧光联用测定法［J］.职业与健康，2022，38（12）：1634-1636，1641.

［10］吕超，刘丽萍，董慧茹，等.盐酸提取-液相色谱-原子荧光联用技术检测水产品中甲基汞等汞化合物［J］.分析试验室，2010，29（2）：64-68.

（栏目编辑：李 菡）

作者简介：厉君悄（1989—），女，本科，助理工程师，研究方向：水产品安全（通信作者）。