免疫增强剂对鲤鱼血清中免疫酶指标的影响

摘 要：为了解一种自制的免疫增强剂对鲤（Cyprinus carpio）免疫力的影响，在鲤基础饲料中添加1%的免疫增强剂为试验组，在投喂1周、2周、3周和4周后，分别取鲤的血清，测定血清中溶菌酶（LZM）、超氧化物歧化酶（SOD）和补体C3的含量，比较免疫增强剂对鲤血清中3种酶含量的影响。结果显示：试验组鱼血清中溶菌酶、超氧化物气化酶和补体C3的值为先升高后降低，投喂2周时达到最高值，显著高于对照组（P＜0.05），表明该免疫增强剂可有效增强鲤的非特异性免疫力。

关键词：免疫增强剂；鲤（Cyprinus carpio）；溶菌酶；超氧化物歧化酶；补体C3

中图文分类号：S942.1

鲤（Cyprinus carpio）是天津市淡水养殖主要养殖品种，随着其养殖规模增加，养殖密度也不断提高，同时也带来了病害的频发。近年来天津市养殖鲤病毒病较为严重，给养殖户带来较大的经济损失。目前困扰天津市鲤养殖的主要是鲤浮肿病毒（Carp edema virus），检出率非常高，该病毒2016年在国内首次被发现，且死亡率较高［1］，还有困扰鲤养殖的锦鲤疱疹病毒（Koi herpesvirus）一直没有较好的治疗方法。 由于鱼类病毒病还没有特效药物来治疗，因此主要是靠预防为主，即降低养殖密度，调节水质，增强鱼体抵抗力等。本试验中对鲤投喂一种复合免疫增强剂，主要成分为多糖类、中草药以及维生素类，可有效提高鱼体血清中免疫酶的含量，对预防鱼类病毒病起到重要作用。

1 材料与方法

1.1 免疫增强剂饲料的制备

复合免疫增强剂为天津市动物疫病预防控制中心自制，主要成分是多糖类、中草药以及维生素类免疫增强剂。将普通饲料粉碎，添加1%的复合免疫增强剂混匀，通过小型饵料机制备出大小合适的饲料。

1.2 试验用鱼与饲养条件

试验用鲤购自天津金锁养殖专业合作社，大小为（50.6±5.3）g，养殖试验在循环水系统中进行，水温控制在（25±1）℃。每天9：00和16：00各投喂两次饲料，驯化1周摄食正常后开展试验。

1.3 试验设计

试验分两组：普通饲料组和复合免疫增强剂饲料组，每组30尾鱼，试验开始后第7天、第14天、第21天和第28天采血，每组采3尾鱼，血样静置4 ℃过夜，3 000 r/min离心后取上清，测定血清中免疫酶的含量。

1.4 免疫指标的测定

测定血清中溶菌酶（LZM）、超氧化物气化酶（SOD）和补体C3含量，试剂盒购自上海纪宁实业有限公司，采用双抗夹心法测定，450 nm波长下测定OD值，每个指标均做标准曲线。依据预试验结果，首先将血清稀释10倍，再进行测定。2 结果

2.1 对溶菌酶含量的影响

鲤血清中溶菌酶含量的标准曲线见图1，R2等于0.995，数据结果有效。

总体来看，免疫增强剂可显著提高鲤血清中LZM活性，随着时间呈现先升高后降低的趋势，1周后，免疫组与对照组LZM活性无显著性差异； 2周后，免疫组LZM活性达到（27.93±3.63）U/mL ，显著高于正常饲料组LZM活性（14.21±0.87）U/mL（P<0.05）； 3周后LZM活性下降为（21.79±3.03）U/mL，与2周时有显著性差异（P<0.05）；4周后LZM活性显著下降，与基础饲料组相当。见图2。

2.2 对超氧化物歧化酶含量的影响

鲤血清中超氧化物歧化酶含量的标准曲线见图3，R2等于0.999，数据结果有效。

总体来看，免疫增强剂可显著提高鲤血清SOD活性，随着时间呈现先升高后降低的趋势，1周后，免疫组与对照组SOD活性无显著性差异；2周后，免疫组SOD活性达到456.43±59.96 U/mL，显著高于正常饲料组SOD活性346.43±46.91 U/mL（P<0.05）；3周后SOD活性下降为416.43±45.96 U/mL，但与2周时差异不显著（P>0.05）；4周后SOD活性显著下降，与基础饲料组相当（见图4）。

2.3 对补体C3含量的影响

鲤血清中补体C3含量的标准曲线见图5，R2等于0.998，数据结果有效。

总体来看，免疫增强剂可显著提高鲤血清补体C3含量，随着时间呈现先升高后降低的趋势， 1周后，免疫组与对照组血清补体C3含量无显著性差异；2周后，免疫组血清补体C3含量达到523.57±26.10 μg/mL ，显著高于正常饲料组补体C3含量391.07±29.36 μg /mL（P<0.05）； 3周后补体C3含量下降为491.43±60.89 μg/mL，但与2周时差异不显著（P>0.05）；4周后补体C3含量显著下降，与基础饲料组相当。见图6。

3 讨论与结论

研究表明：投喂复合免疫制剂后德国镜鲤的白细胞吞噬率和红细胞C3b受体花环率显著高于对照组，人工感染死亡率低于对照组［2］。复合中草药制剂投喂黄颡鱼30 d后，黄颡鱼血液中白细胞的吞噬活性、血清中溶菌酶和补体活性均显著高于对照组［3］。投喂免疫增强剂后大菱鲆和血鹦鹉的溶菌酶活性、碱性磷酸酶活性和总超氧化物歧化酶活性皆显著高于对照组［4］。复方中草药制剂投喂牙鲆30 d后，血清中碱性磷酸酶（ALP）、酸性磷酸酶（ACP）、超氧化物歧化酶（SOD）以及溶菌酶（LZM）活性水平均显著高于对照组，并提高牙鲆抗迟钝爱德华氏菌感染能力［5］。复合免疫增强剂投喂金鳟14 d后，溶菌酶（LZM）和超氧化物歧化酶（SOD）的活性及补体C3的含量显著高于对照组，并提高金鳟对细菌病的抵抗力［6］。免疫增强剂不仅可以提高鱼类的非特异性免疫功能，还对对虾、蟹、鳖、刺参等水产养殖动物具有较好的疾病预防功能［7-10］。投喂鲤本复方免疫增强剂14 d后，其血清中溶菌酶、超氧化物歧化酶以及补体C3的含量显著提高，进而提高鱼体非特异性免疫力，对预防鲤疾病起到了重要的作用，但在养殖过程中需要间隔投喂。

参考文献：

[1]

徐立蒲，王静波，张文，等.鲤鱼浮肿病流行情况的初步研究[J].检验检疫学刊. 2016，26（5）：14-16.

[2] 杨凯，李娜，孙志景，等.非特异性免疫复合制剂对德国镜鲤免疫功能的影响[J].中国饲料，2011（8）：26-29.

[3] 盛竹梅，黄文，张英杰，等.一种复方中草药制剂对黄颡鱼非特异性免疫机能和抗病力的增强作用[J].华中农业大学学报，2012，31（2）：233-246.

[4] 吴会民，姜巨峰，张振国，等.一种复合免疫增强剂对大菱鲆和血鹦鹉鱼酶活性及抗病力的影响[J].江西水产科技，2014（1）：20-23.

[5] 刁菁，王友红，王淑娴，等.一种复方中草药免疫增强剂对牙鲆免疫力及抗病力的影响[J].广西科学院学报.2020，36（2）：137-144.

[6] 张振国，钱红，刘克明，等.复合免疫增强剂对金鳟非特异性免疫力的影响[J].水产学杂志， 2020（1）：8-12.

[7] 李明，董晓慧.复合中草药制剂对凡纳滨对虾生长和免疫指标的影响[J].淡水渔业，2006，38（6）：68-72.

[8] 许振国，曾健，何琳，等.植源性免疫增强剂对中华绒螯蟹免疫功能的影响[J].浙江农业科学， 2009（2）：430-433.

[9] 周冬仁，罗毅志，叶雪平，等.2种复方制剂对中华鳖非特异性免疫功能的作用效果[J].贵州农业科学，2015，43（6）：146-148.

[10] 张宇鹏，田燚，商艳鹏，等.复合免疫增强剂对刺参生长和非特异性免疫酶活性的影响[J].大连海洋大学学报，2017，32（2）：178-183.

Influence of diet with compound immunoenhancer

on immune enzyme of common carp

ZHANG Zhenguo1， LUO Zhang2， HAO Shuang2， XU Yunxia1， YOU Hongzheng2， ZHAO Liangwei1，WANG Yu1， FENG Shouming1

（1.Tianjin Animal Disease Preventive and Control Center， Tianjin，300400，China; 2.Tianjin Fishery Research Institute， Tianjin，300221， China）

Abstract：To understand the effects of a self-made compound immunoenhancer on immunity of the common carp （Cyprinus carpio），the trial group of fish were fed with basic diet adding 1% compound immunoenhancer.The value of serum lysozyme （LZM）， superoxide dismutase （SOD） and the complement of C3 of the fish were assayed after one week， two weeks， three weeks and four weeks of feeding. The results showed that LZM，SOD and C3 levels increased first and then decreased，the value of three indexes were significantly higher than those of the control group after two weeks （P<0.05）. The results indicated that the compound immunoenhancer can effectively enhance non-specific immunity of the common carp.

Key words：compound immunoenhancer;common carp（Cyprinus carpio）;lysozyme;superoxide dismutase;complement C3

（收稿日期：2022-08-23）