真姬菇次生代谢产物化学成分研究

摘要 ［目的］研究真姬菇次生代谢产物的化学成分。［方法］真姬菇通过大米培养发酵、乙酸乙酯提取后，获得提取物。提取物经硅胶柱、Sephadex LH-20凝胶柱、RP-C18反相硅胶柱等分离纯化，根据波谱数据与文献对比解析化合物结构。［结果］从真姬菇大米发酵的乙酸乙酯提取物中分离得到了14个化合物，分别鉴定为羟基大黄素（1）、1，8-二羟基蒽醌（2）、大黄素（3）、大黄素甲醚（4）、1-羟基-2-甲基蒽醌（5）、2，4-二羟基苯甲酸甲酯（6）、4-羟基苯甲酸甲酯（7）、（2ALPHA）-A′-新伽马蜡烷-2，22-二醇（8）、β-谷甾醇（9）、豆甾醇（10）、麦角甾-4，6，8（14），22-四烯-3-酮（11）、麦角甾-7，22-二烯-3-酮（12）、硬脂酸（13）、油酸（14）。［结论］化合物1～14均为首次从玉蕈属真菌次生代谢产物中分离得到。

关键词 真姬菇；次生代谢产物；化学成分

中图分类号 R 284.1  文献标识码 A  文章编号 0517-6611（2023）03-0180-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2023.03.041

Study on the Chemical Constituents of the Secondary Metabolites from Hypsizygus marmoreus

XIAO Mi1， LUO Rong1， XUE Hong-kun2 et al

（1. Union Jiangbei Hospital， Huazhong University of Science and Technology/Medicament Department，  Wuhan Caidian People’s Hospital， Wuhan，Hubei 430065; 2. Key Laboratory of Particle & Radiation Imaging， Ministry of Education， Department of Engineering Physics， Tsinghua University， Beijing 100084）

Abstract ［Objective］ To study the chemical constituents of the secondary metabolites from Hypsizygus marmoreus. ［Method］The fermented rice substrate of Hypsizygus marmoreus was extracted by using ethyl acetate， then separated and purified through silica gel， Sephadex LH-20 column and RP-C18 column. Compared with the reports， the structures of isolated compounds were identified according to spectral data. ［Result］Totals of 14 compounds were isolated from the ethyl acetate extraction of Hypsizygus marmoreus， which were identified as citreorosein （1）， 1，8-Dihydroxyanthraquinone （2）， emodin （3）， physcion （4）， 1-Hydroxy-2-methylanthraquinone （5）， methyl 2，4-dihydroxybenzoate （6）， 4-Hydroxybenzoic acid methyl ester （7）， 2-hydroxydiplopterol （8）， β-Sitosterol （9）， stigmasterol （10）， （22E）-ergosta-4，6，8（14），22-tetraen-3-one （11）， ergosta-7，22-dien-3-one （12）， stearic acid （13）， oleic acid （14）. ［Conclusion］Compounds 1-14 are isolated from the genus Hypsizygus for the first time.

Key words Hypsizygus marmoreus;Secondary metabolites;Chemical constituents

基金项目 武汉市卫生计生委科研计划项目（WZ21Q15）。

作者简介 肖咪（1990—），女，湖北鄂州人，主管药师，硕士，从事中药化学研究。通信作者，助理研究员，博士，从事天然药物化学研究。

收稿日期 2022-07-12

药食两用真菌含有丰富的氨基酸、维生素、蛋白质等成分，享有“维生素A宝库”“菜中之王”“素食之冠”等美誉，营养与经济价值显著［1-2］。作为宝贵的中药资源，药食两用真菌多具有滋补功效，如云芝、茯苓、冬虫夏草、猴头菌等［3-5］。药食两用真菌是天然药物的重要来源之一，从中开发了截短侧耳素、茯苓多糖、安卓奎诺尔等相关的医药产品，用于抗菌、抗肿瘤、增强机体免疫等［6-8］。

真姬菇［Hypsizygus marmoreus（Peck）H.E.Bigelow］属于离褶伞科玉蕈属真菌，又名斑玉蕈、蟹味菇等，作为营养又低脂的美食，有“香在松口蘑，味在玉蕈”之称［9-10］。真姬菇具有良好的抗氧化、抗肿瘤、调节免疫的作用，但对其次生代谢产物的研究较少［11-12］。前期研究发现，真姬菇乙酸乙酯部位提取物表现出良好的抗氧活性，IC50为144.3 μg/mL，并分离鉴定了10个苯甲醛类衍生物［1］。为进一步挖掘真姬菇代谢产物的多样性，以真姬菇发酵产物的乙酸乙酯提取物为对象，对真姬菇次生代谢产物开展化学成分研究。

1 材料与方法

1.1 试验材料

Bruker Avance Ⅲ 400M核磁共振波谱仪（德国布鲁克公司，400 MHz）；Agilent LC-Q-TOF-MS 6520液质联用仪（美国安捷伦科技有限公司）；SHP-500型智能生化培养箱（江苏盛蓝仪器制造有限公司）；马铃薯葡萄糖琼脂培养基、LB液体培养基、氘代氯仿、氘代二甲基亚砜（上海希格玛高技术有限公司）；柱层析硅胶、薄层硅胶、GF254薄层硅胶板（青岛邦凯高新技术材料有限公司）；RP-C18反相硅胶、Sephadex LH-20（德国Merck KGaA）；石油醚、二氯甲烷、乙酸乙酯、甲醇，均为分析纯，北京市通广精细化工公司；蒸馏水实验室自制。

真姬菇菌种［Hypsizygus marmoreus（Peck）H.E.Bigelow］购自中国工业微生物菌种保藏管理中心，编号CICC50078，保藏于清华大学医学物理与工程研究所。

1.2 试验方法

马铃薯葡萄糖琼脂培养基、LB液体培养基、15瓶大米培养基（大米80 g、水120 mL）经高压灭菌后，冷却备用。将菌株接种至马铃薯葡萄糖琼脂培养基，复苏后，取部分菌种接种于LB液体培养基，振荡培养7 d（温度25 ℃，转速150 r/min），获得种子培养液。取适量种子培养液接种至大米培养基，将培养瓶置于培养架上，室温培养21 d。取乙酸乙酯对15瓶发酵物进行萃取（200 mL × 3次），合并滤液，浓缩，得乙酸乙酯粗提物14.6 g。将乙酸乙酯粗提物用甲醇溶解，加入20.0 g硅胶拌样，晾干。含有样品的硅胶粉末经RP-C18色谱柱层析，依次用0～100%甲醇梯度洗脱，收集馏分，合并浓缩，得馏分Fr.A ～ Fr.E。

Fr.D（2.8 g）经硅胶柱（200～300目）层析，依次用石油醚-乙酸乙酯（6∶1～1∶2）梯度洗脱，依据薄层硅胶板检测结果，合并流分，得到Fr.D1～D5馏分。Fr.D4馏分经硅胶柱（薄层硅胶）层析，依次用二氯甲烷-甲醇（60∶1～10∶1）梯度洗脱，依据薄层硅胶板分析结果，合并浓缩，得Fr.D41～Fr.D45馏分。Fr.D42～D44分别经Sephadex LH-20凝胶柱层析，等度洗脱，得化合物1（2.6 mg）、化合物2（5.1 mg）、化合物3（6.9 mg）、化合物4（3.8 mg）、化合物5（4.4 mg）。Fr.D3馏分经Sephadex LH-20凝胶色谱柱层析后，再经硅胶柱（薄层硅胶）层析，依次用二氯甲烷-甲醇（50∶1～10∶1）梯度洗脱，得化合物6（1.4 mg）、化合物7（1.4 mg）、化合物8（3.3 mg）。Fr.D2经硅胶柱（薄层硅胶）层析，依次用石油醚-乙酸乙酯（5∶1～2∶1）梯度洗脱，合并浓缩，得Fr.D21～Fr.D26馏分；各馏分再经RP-C18色谱柱层析，依次用50%～100%甲醇梯度洗脱，依次得化合物9（6.7 mg）、化合物14（12.1 mg）、化合物10（8.7 mg）、化合物11（2.2 mg）、化合物12（1.8 mg）、化合物13（11.5 mg）。

2 结果与分析

该研究从真姬菇大米发酵物的乙酸乙酯提取物中分离鉴定了14个化合物，其结构式如图1所示。化合物1～14均为首次从玉蕈属真菌次生代谢产物中分离得到。

化合物1：黄色粉末，HR-EI-MS谱中显示 m/z 286.243 8［M］+，分子式为C15H11O6。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.24（2H，OH-1，8），11.17（1H，s，OH-3），7.73（1H，d，J=1.6 Hz，H-2），7.29（1H，d，J=1.6 Hz，H-4），6.64（1H，d，J=2.4 Hz，H-5），7.29（1H，d，J=2.4 Hz，H-7），4.80（2H，s，CH2OH-5）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：166.5（C-1），108.3（C-2），161.9（C-3），109.2（C-4），133.3（C-4a），121.2（C-5），153.2（C-6），117.5（C-7），164.9（C-8），109.5（C-8a），189.9（C-9），114.5（C-9a），181.8（C-10），135.5（C-10a），62.4（-CH2OH-5）。化合物1鉴定为羟基大黄素［13］。

化合物2：黄色粉末，HR-EI-MS谱中显示 m/z 241.211 3［M+H］+，分子式为C14H8O4。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.01（2H，s，OH-1，8），7.39（2H，dd，J=8.2，1.5 Hz，H-2，7），7.82（2H，m，H-3，6），7.94（2H，m，H-4，5）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：162.4（C-1，8），124.7（C-2，7），137.5（C-3，6），119.4（C-4，5），133.5（C-4a，10a），115.9（C-8a，9a），193.2（C-9），181.1（C-10）。化合物2鉴定为1，8-二羟基蒽醌［14］。

化合物3：黄色粉末，HR-EI-MS谱中显示 m/z 270.240 9［M］+，分子式为C14H8O4。1H-NMR（400 MHz，DMSO-d6）δ：12.13（2H，s，OH-1，8），11.43（1H，s，OH-3），6.55（1H，d，J=2.4 Hz，H-2），7.06（1H，d，J=2.4 Hz，H-4），7.52（1H，d，J=1.5 Hz，H-5），7.10（1H，d，J=1.5 Hz，H-7），2.39（3H，s，CH3-6）；13C-NMR（100 MHz，DMSO-d6）δ：165.9（C-1），108.3（C-2），164.8（C-3），109.1（C-4），135.4（C-4a），124.5（C-5），148.6（C-6），120.8（C-7），161.8（C-8），109.3（C-8a），190.0（C-9），113.6（C-9a），181.6（C-10），133.1（C-10a），21.9（-CH3-6）。化合物3鉴定为大黄素［15］。