夏天无醋炙前后镇痛作用及安全性评价

摘要 [目的]通过试验考察生品及醋炙品夏天无水提取物的急性毒性以及镇痛作用。[方法]采用Bliss法计算生品、醋炙夏天无水提取物的半数致死量（LD50），连续观察14 d后进行解剖学检查，计算小鼠心、肝、脾、肺、肾脏器指数，检测血液生化指标（ALT、AST、CK、LDH、UREA、CREA）的水平，观察各脏器HE染色病理切片结果;以冰醋酸致小鼠扭体反应对夏天无及其醋炙品提取物进行镇痛评价。[结果]生品夏天无和醋炙夏天无的原生药半数致死量（LD50）分别为48、54 g/kg;急性毒性差异不明显，分别相当于人体（体质量60 kg）安全用量的240和270倍;与正常组相比，生化指标除AST有差异外（P<0.05），ALT、CK、LDH、UREA、CREA的水平差异不显著（P<0.05）;与正常组对比，醋炙夏天无组能明显减少小鼠扭体次数（P<0.05）。[结论]夏天无及其醋炙品水提取物LD50>10 g/kg原生药，属于实际无毒性，生品夏天无的毒性作用略大于醋炙品夏天无，说明醋炙夏天无具有一定的减毒作用;醋炙后镇痛作用增强，进一步阐明醋炙入肝、增强止痛这一理论。

关键词 夏天无;急性毒性;镇痛作用;生化指标;病理切片

中图分类号 R 285  文献标识码 A  文章编号 0517-6611（2022）09-0171-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.09.042

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Analgesic Effect and Safety Evaluation of the Stir-frying with Vinegar of Corydalis decumbens before and after Processing

YAN Li-ping1， XIE Zuo-hua2， SHENG Wen-sheng1 et al

（1.Jiangxi Deshang Pharmaceutical Research Institute Co.， Ltd.， Zhangshu， Jiangxi 331200;2.Jiangxi Deshang Pharmaceutical Co.， Ltd.， Zhangshu， Jiangxi 331200）

Abstract [Objective]To investigate the acute toxicity and analgesic effect of the  Corydalis decumbens anhydrous extract of raw products and vinegar products through experiments. [Method]The Bliss method was used to calculate the LD50 of raw and the stir-frying with vinegar of Corydalis decumbens extracts. After 14 days of continuous observation， anatomical examination was performed to calculate the index of heart， liver， spleen， lung， and kidney organs in mice，detect the levels of blood biochemical indexes ALT， AST， CK， LDH， UREA， and CREA，and observe the HE staining pathology of each organ.Analgesic evaluation of Corydalis decumbens and its vinegar-cured extracts by glacial acetic acid-induced writhing reaction in mice.[Result]The crude lethal doses （LD50） of the raw medicine Corydalis decumbens and its vinegar products were 48 and 54 g/kg，respectively; the acute toxicity difference was not obvious， which was equivalent to 240 and 270 of the safe dosage of human body （body weight 60 kg）， respectively.Compared with the normal group， except for AST， there were differences in biochemical indexes （P<0.05）， but the levels of ALT， CK， LDH， UREA and CREA were not significantly different （P>0.05）.Compared with the normal group，the stir-frying with vinegar of Corydalis decumbens group could significantly reduce the number of writhing in mice （P<0.05）. [Conclusion]The LD50>10 g/kg native medicine of Corydalis decumbens and the stir-frying with vinegar of Corydalis decumbens extracts is actually non-toxic. The toxic effect of raw Corydalis decumbens is slightly greater than the stir-frying with vinegar of Corydalis decumbens，indicating that the stir-frying with vinegar of Corydalis decumbens has a slight detoxification effect after sunburn.The analgesic effect is enhanced after the processing of the stir-frying with vinegar， further elucidating the theory that the processing of the stir-frying with vinegar enters the liver and enhances the analgesic effect.

Key words Corydalis decumbens;Acute toxicity;Analgesic effect;Biochemical indicators;Pathological section

夏天无为罂粟科植物伏生紫堇[Corydalis decumbens（Thunb.）Pers]的干燥块茎，始次载入2010版药典，性温，味辛、苦，具有活血通络、行气止痛的功效[1]。现代临床实践表明，夏天无对风湿性关节炎具有显著的疗效。夏天无主要含有生物碱成分，相关文献报道，比枯枯灵碱和夏天无宁碱具有一定的毒副作用，主要表现为致惊厥的反应[2]。笔者通过对夏天无及其醋炙品的急性毒性和镇痛作用的试验探究，研究夏天无及其醋炙品的镇痛效果及其毒性强弱，探究夏天无及其醋炙品的药理药效与毒性的大小，以期为临床安全用药提供可行性参考。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 药材与仪器。

夏天无药材由江西省分宜县金贝农业科技发展有限公司提供，批号为20190423，经江西中医药大学龚千锋教授鉴定为罂粟科植物伏生紫堇[Corydalis decumbens（Thunb.）Pers.]的干燥块茎;SQP型电子天平（万分之一，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司）;YB502N电子天平（百分之一，上海海康电子仪器厂）。

1.1.2 动物。

SPF级昆明种小鼠，雌雄各半，周龄4～6周，体重18～22 g，由江西中医药大学实验动物中心提供，许可证号SCXK（赣）2018-0003。饲养条件：室温为（25±2）℃，相对湿度40%～70%，分组塑料笼饲养。给予SPF大小鼠生长繁殖饲料，自由饮水和进食。饲料生产于武汉市万千佳兴生物科技有限公司，许可证号SCXK（鄂）20166-0011。

1.1.3 试剂。

ALT（丙氨酸氨基转移酶）、AST（天门冬氨酸氨基转移酶）、CK（肌酸激酶）、LDH（乳酸脱氢酶）、UREA（尿素）、CREA（肌酐）试剂盒，均购自深圳雷杜生命科技有限公司，批号分别为20191009、20190909、20190905、20191009、20190924、20191022;生理盐水（江西东亚制药有限公司）。

1.2 方法

1.2.1 醋炙夏天无的制备。

取净制夏天无生品200 g，加30%米醋浸泡1 h，再置锅中170～190 ℃炒5 min，晒干，备用。

1.2.2 水煎液的制备。

取生品夏天无/醋炙夏天无100 g，加7倍量冷水浸泡3 h，煎煮5次，每次1 h，将5次的水煎液混合并过滤，经加热浓缩成含生药浓度为2 kg/L的浓缩药液，冷藏备用。

1.2.3 夏天无及其炮制品对小鼠的急性毒性[3-9]。

1.2.3.1 预试验。

经查阅文献及资料，取昆明SPF小鼠42只，雄雌各半，按性别和体重随机分为7组，每组6只，分别配制7个不同浓度为含生药量6.0、5.0、4.0、3.0、2.0、1.0、0.5 g/mL的溶液，以灌胃容量为0.02 mL/g分别各组灌胃一次，密切观察4 h内反应，并连续观察14 d，记录小鼠死亡情况。根据观察结果推测夏天无的最大剂量（Dm）约为80 g/kg，最小剂量（Dn）约为10 g/kg。试验结束后，取心、肝、脾、肺、肾称重，计算脏器指数。同时取各组小鼠的心、肝、肾组织，经10%甲醛固定，HE染色，光镜下进行组织病理学观察。

1.2.3.2 正式试验。

取昆明SPF小鼠90只，雌雄各半，在预试验的基础上确定给药剂量范围，生药浓度分别为3.2、2.7、2.4、2.2、2.0、1.6、1.0、0.8、0.5 g/mL各组灌胃给药1次，给药体积为0.02 mL/g，连续观察14 d，记录小鼠精神状态等一般情况以及毒性反应情况。试验结束后，眼球取血，测定生化指标ALT、AST、CK、LDH、UREA、CREA水平;取心、肝、脾、肺、肾称重，计算脏器指数，同时取各组小鼠的心、肝、肾组织，经10%甲醛固定，HE染色，光镜下进行组织病理学观察。

1.2.3.3 小鼠脏器指数检测。

脱臼处死小鼠后，在无菌条件下摘取心、肝、脾、肺及肾，称重，检测并计算各组小鼠脏器指数。脏器指数=脏器重量/小鼠体重。

1.2.3.4 病理切片。

称重后，将小鼠的心、肝、脾、肺、肾、脑脏器组织置10%甲醛固定、石蜡包埋、切片、HE染色后于光镜下进行切片检查。

1.2.3.5 血清检测。

各组小鼠摘眼球取血，静置0.5 h以上，置于离心机中10 000 r/min，4 ℃离心15 min，取血清;放置-80 ℃冷冻后寄送至武汉检测中心，检测指标为ALT、AST、CK、LDH、UREA、CREA。

1.2.4 醋酸致小鼠扭体试验[10-14]。

取SPF级小鼠50只，雌雄各半，随机分为8组，分别是正常组、阿司匹林肠溶片阳性组（0.2 g/kg）、生品及醋炙品组低、中、高剂量组（0.9、1.5、1.8 g/kg），每组10只。给药组每天按20 mL/kg灌胃给药一次，模型组按等体积给予生理盐水，连续5 d，末次给药1 h后，每只小鼠按10 mL/kg体积腹腔注射1%冰醋酸溶液，观察并记录15 min内各组小鼠出现的扭体次数，计算其药物扭体反应抑制率。抑制率=（正常组平均扭体数-受药组平均扭体数）/正常组平均扭体数×100%。

1.3 统计学方法

急性毒性数据采用LD50计算软件Bliss 法处理。利用SPSS 23.0软件进行数据分析，所有数据均以±S表示，组间采用方差分析，方差性检验齐时，采用LSD法，不齐时采用Dunnett’s T3法，以P<0.05表示差异具有统计学意义。