野生沙杵菇菌株筛选试验

摘要为了挖掘野生沙杵菇新种质，将野外采集的沙杵菇菌丝团与菌蕾采用组织分离法得到 71个菌株，利用 PDA培养基进行平板培养，观测菌丝颜色、浓密度、均匀度、菌丝长势，并对优选菌株进行了原种培养及岀菇试验。结果表明，71个野生沙杵菇菌株在PDA上均能够萌发生长，菌株SHCHG（S）02与SHCHG（L）07菌丝浓白粗壮、均匀浓密、长势强。2个野生菌株经人工栽培，可正常出菇。在熟料栽培下，菌株SHCHG（J）02与SHCHG（L）07产量高，分别达2 387和2 123 g/筐;生物学转化率分别为39.78%和35.38%，以上2个菌株可用于进一步鉴定、研究、栽培，以培育出产量高、质优的沙杵菇栽培菌种。

关键词野生沙杵菇; 菌株; 菌丝形态; 比较试验

中图分类号S646.9文献标识码A

文章编号0517-6611（2022）13-0056-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.13.016

The Wild Coprinus comatus Strain Screening Test

BAO Hong-chun JIA Bo-yuan LI Xiao-lei et al（1.Inner Mongolia Autonomous Region Horticultural Research Institute， Hohhot， Inner Mongolia  010011;2.Inner Mongolia Mogu Biotechnological Company Limited， Ordos，  Inner Mongolia  017000;3.Inner Mongolia Agricultural University，  Hohhot， Inner Mongolia  010015）

AbstractIn order to explore the new germplasm of wild C.comatus，71 strains were collected from the field by tissue isolation of C.comatus peloton and button.In addition， we conducted plate culture with PDA medium to observe the color of mycelium， density， uniformity， and color of mycelium and carried out original culture and mushroom emergence test on the selected strains.The results showed that 71 wild C.comatus strains were able to germinate and grow on PDA， and the strain SHCHG（S）02 and SHCHG（L）07 mycelium was thick， white， uniform， and dense with strong growth.In addition， 2 wild mushroom strains were artificially cultivated and could produce mushrooms typically under clinker cultivation; strains SHCHG（J）02 and SHCHG（L）07 had high yields of 2 387 and 2 123 g/basket; biological conversion efficiency was 39.78% and 35.38%， respectively.Thus， the above two strains can be used to identify further， research， and cultivate to produce high-yielding and high-quality cultivated strains of Comatus.

Key wordsWild Coprinus comatus;Strain;Mycelial morphology;Comparison experiment

沙杵菇[Coprinus comatus （JIA）]又称“沙棒槌菇”“沙锤子菇”，隶属于菌伞纲，伞菌亚目，蘑菇科，鬼伞属[1-2]。因其形似沙槌而得名，是一种珍稀的药食兼用野生真菌，广泛分布于内蒙古鄂尔多斯市准格尔旗部分地区，在雨后的沙蒿地、草沙地、杨树林及沙漠腐草滩地较为常见。近年来由于野生蘑菇含有多种氨基酸及生物活性酶类，有助消化、降血压、抗肿瘤、降血脂等功效，使其备受人们青睐[3-6]。野生沙杵菇因其绿色无污染、味道鲜美、营养丰富，深受人们喜爱，市场需求越来越大，由于利益的驱使，导致人们掠夺性采摘，使得当地珍贵野生沙杵菇资源濒临灭绝。目前关于沙杵菇人工栽培研究甚少，因此，选育质优、高产新菌种进行人工栽培，是保护野生沙杵菇资源的一项有效措施，对当地野生食用菌资源的开发利用将具有巨大意义。

野生菌株是优良菌种选育和驯化的基础材料之一[7-10]。笔者以采集到的野生沙杵菇菌丝团与菌蕾为试验材料，经组织分离得到菌株，对分离菌株进行菌丝生长情况观察评估，并对2个优选菌株进行栽培试验，以期选育出适合大面积推广的优良菌株，为最终实现沙杵菇人工规模化栽培奠定理论基础。

1材料与方法

1.1试验菌种试验所用的沙杵菇菌丝团与菌蕾，采集于内蒙古鄂尔多斯市准格尔旗布尔陶亥乡尔圪濠村附近沙蒿地，经组织分离培养得到原始菌株。

1.2培养基质母种采用常规PDA培养基（马铃薯200 g，葡萄糖20 g，琼脂20 g，水1 000 mL）;原种培养料配方：玉米秸丝35.0%，玉米芯35.0%，羊粪28.5%，石膏粉1.5%，含水量50.0%～55.0%;栽培料配方：玉米秸30.0%，玉米芯30.0%，沙蒿粉10.0%，羊粪26.2%，石膏粉2.0%，石灰粉1.8%，含水量65.0%，pH 7.5～8.0。

1.3试验方法

1.3.1野生沙杵菇菌丝体的分离。将野外采集的沙杵菇菌丝团和菌蕾置于0～5 ℃条件下低温处理。待菌丝团紧缩致密，菌蕾变小而圆整、质硬时，取出28个菌丝团，分别编号为SHCHG（S）01～SHCHG（S）28， 43个菌蕾编号为SHCHG（L）01～SHCHG（L）43。迅速清除干净外围的腐草土，分别放入无菌培养皿中。在超净工作台上，先用0.1%的HgCl2溶液消毒10 min，再用无菌水冲洗，然后剥离外围物质，直到露出菌丝团的核心和单一菌蕾，再用无菌水反复冲洗，剥取约1 mm组织分别接入装有PDA培养基的培养皿中。在温度18 ℃、湿度80%～85%的生物培养箱中培养150 h，备用。

1.3.2野生沙杵菇再生菌丝体的提纯。从28个菌丝团培养皿中，通过趋中优选原则，选取3组。为防止菌丝体感染病毒，在培养基中加入0.35‰的5%EDTA抑毒剂脱毒，采用先端菌丝体分离提纯菌丝，变换培养基复壮菌种，利用“适培基”驯化。选取较好的菌丝体转接到试管斜面中。同样，从43个菌蕾培养皿中选取10组较好菌丝体进行转接。

1.3.3原种、栽培种制作和出菇试验。按上述配方配料，将230 g原种发酵料装入250 mL三角瓶，常压灭菌后接入已活化的 PDA菌种。栽培种发酵料采用17 cm×33 cm×0.06 cm聚丙烯袋。常温灭菌后接种，置于25 ℃生物培养箱中培养，观测菌丝形态特征、长势，比较各处理菌丝生长速度。出菇试验采用内径规格为42 cm×42 cm×18 cm 塑料筐，试验以优选的2个菌株进行原种培养及出菇比较试验，每个处理设10个重复。设置3个处理，分别为T1100%未经堆腐发酵的培养料，T2发酵料与未发酵料各占50%，T3 100%经堆腐发酵的培养料。

1.4菌丝长势评分标准菌丝长势评分标准：5分为菌丝长势浓密，均匀;4分为菌丝长势浓密，较均匀;3分为菌丝长势较浓密，较均匀;2分为菌丝长势较稀疏，较均匀;1分为菌丝长势稀疏，不均匀。

2结果与分析

2.1不同菌株菌丝在母种培养基上的生长情况在同种平板PDA培养基上，供试菌株菌丝均能够正常生长，但各菌株菌丝颜色、菌丝浓密度、均匀度、菌丝长势存在一定差异。通过观察比较，采用趋中优选原则，从28个菌丝团中，优选出3个菌株，分别为SHCHG（S）02、SHCHG（S）09、SHCHG（S）23。 同样从43个菌蕾中，优选出10个菌株，分别为SHCHG（L）07、SHCHG（L）09、SHCHG（L）22、SHCHG（L）24、SHCHG（L）25、SHCHG（L）31、SHCHG（L）34、SHCHG（L）36、SHCHG（L）40、SHCHG（L）42。13个菌株的菌丝生长情况见表1，SHCHG（S）02与SHCHG（L）07菌株菌丝浓白粗壮、均匀浓密、长势强，经过反复优选确定SHCHG（S）02和SHCHG（L）07为最佳菌株。

2.2不同栽培料对2个菌株菌丝生长的影响从表2可以看出，在相同处理下SHCHG（J）02菌株菌丝生长速度均优于SHCHG（L）07。2个菌株菌丝生长速度为5.0～7.5 mm/d。在T3处理下SHCHG（J）02和SHCHG（L）07菌株菌丝萌发时间最短，分别为20和21 h;菌丝生长速度最快，为7.5和6.5 mm/d。T2处理下菌丝生长情况次之，T1处理下2个菌株菌丝萌发时间长，生长速度慢，菌丝体长势弱。由此可知，在经过堆腐发酵的栽培料上，2个沙杵菇菌株表现为生长速度快，菌丝体粗壮且浓白、长势强;未经堆腐发酵的培养料，不利于野生沙杵菇菌丝正常生长。

2.32个菌株出菇情况比较由表3可知，2个沙杵菇菌株在栽培料3个处理中均出菇。在T3处理下SHCHG（J）02菌株岀菇所需时间为66 d，平均每筐产量为2 387 g，生物学转化率为39.78%;SHCHG（L）07菌株岀菇所需时间为71 d，平均每筐产量为2 123 g，生物学转化率为35.38%，均优于其他2个处理。在T3、T1处理下，SHCHG（J）02菌株平均每筐产量、生物学转化率均优于SHCHG（L）07;T2处理下SHCHG（L）07菌株平均每筐产量、生物学转化率则优于SHCHG（J）02。由此可知，2个菌株在堆腐发酵的栽培料上栽培均表现为出菇所需时间短、产量高、生物学转化率高;在未经堆腐发酵的栽培料上栽培出菇晚、产量低、生物学转化率低。

3结论与讨论

在食用菌生产中，菌种的作用是首要的，其质量直接影响食用菌产业的发展。而菌丝生长特性是衡量菌种质量的重要指标，菌丝生长迅速、长势强且浓密的食用菌菌种是实际生产中优质菌株的表现之一[11-13]。该试验采用组织分离法得到的71个菌株，通过比较各菌株菌丝体的菌丝颜色、菌丝浓密度、均匀度、菌丝长势，优选出10个菌株，对10个菌株进行反复优选，最终确定SHCHG（S）02和SHCHG（L）07为最佳菌株。SHCHG（S）02和SHCHG（L）07与其他菌株相比菌丝生长最佳，萌发时间短，菌丝生长浓密且均匀，长势评分为5分，是具有开发潜力的沙杵菇优良菌株，可作为遗传改良目标菌株，并进一步观察鉴定，以培育成产量高、质优的沙杵菇菌株。

笔者结合多年试验结果及该地区的原料特点，以玉米芯、玉米秸、沙蒿粉、羊粪为主料，这些原料在当地资源丰富，成本低廉，而且非常适合沙杵菇栽培。该试验以玉米秸30%、玉米芯30%、沙蒿粉10%、羊粪26.2%、石膏粉2.0%、石灰粉1.8%为配方，同种原料设置3个不同的堆腐发酵处理。结果表明，100%熟料栽培2个沙杵菇菌株生长势强，生长速度快，菌丝体粗壮且浓白，产量高，岀菇时间短，生物学转化率高。