冷冻浓缩海链藻在南美白对虾育苗中的应用

摘要 研究冷冻浓缩海链藻培育南美白对虾（Litopenaeus vannamei）幼体效果，为开发南美白对虾开口饵料提供参考。首先探索了冷冻浓缩海链藻单独以及和配合饲料复合在南美白对虾Z1、Z2阶段使用对南美白对虾变态的影响。结果表明，使用冷冻浓缩海链藻，南美白对虾可以完成溞状阶段到糠虾阶段的变态。进一步研究南美白对虾Z1、Z2阶段单独使用冷冻浓缩海链藻、冷藏普通浓缩海链藻，以使用新鲜海链藻和虾片作为对照，每组2个重复，每个重复3万尾南美白对虾幼体，在500 L 育苗桶中饲养7 d。结果表明，在南美白对虾Z1、Z2阶段用藻，3种状态藻使用效果近似，相比只使用虾片的组，均有更高的变态成活率、更短的变态期。冷冻浓缩海链藻可以保证较高的幼体变态存活率，便于长期保存，可以作为南美白对虾开口饵料使用。

关键词 冷冻浓缩海链藻;南美白对虾;沙虫;变态;成活率

中图分类号 S 96  文献标识码 A

文章编号 0517-6611（2022）16-0065-03

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.16.018

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Application of Frozen Concentrated Thalassiosira weissflogii on  Litopenaeus vannamei Seedling

PENG Xiao-wei1，WANG Zhao-wei1，CHEN Wei-yao2

（1.Ningbo Futian Biotechnology Co.，Ltd.，Ningbo，Zhejiang 315700;2.Zhanjiang Fenglian Aquatic Products Co.，Ltd.，Zhanjiang，Guangdong 524200）

Abstract The feeding trial was conducted to study the effects of frozen concentrated Thalassiosira weissflogii on the survival rate of Litopenaeus vannamei larvae and provide the theoretical basis for shrimp’s start-feed.Firstly，the experiment explored the influence of frozen concentrated Thalassiosira weissflogii on metamorphosis of Litopenaeus vannamei in Z1 and Z2 stages with or not compound feed.The results showed that the metamorphosis of Litopenaeus vannamei could be completed from the mire stage to the mysis stage by using the frozen concentrated Thalassiosira weissflogii.The experiment further studied the effect of using frozen，cold-stored common concentrated Thalassiosira weissflogii on the metamorphosis of Litopenaeus vannamei in Z1 and Z2 stages，using fresh non-concentrated Thalassiosira weissflogii  and shrimp feed treatment group as control.Each group had 2 replicates，and each replicate had 30 000 Litopenaeus vannamei larvae，which were raised in a 500 L nursery barrel for seven days.The results showed that using algae in Z1 and Z2 stages of Litopenaeus vannamei had higher metamorphosis survival rate than using shrimp feed only.Frozen concentrated Thalassiosira weissflogii could ensure high larval metamorphosis survival rate，facilitate long-term preservation，and could be used as start-feed for Litopenaeus vannamei.

Key words Frozen concentrated Thalassiosira weissflogii;Litopenaeus vannamei;Sipunculus nudus;Metamorphosis;Survival rate

微藻是一类分布广泛、营养丰富的自养生物，通常含有30%～40%蛋白质、10%～20%脂肪酸、5%～15%碳水化合物，富含EPA、ARA 和DHA等多不饱和脂肪酸，对幼苗发育具有重要作用，在鱼、虾、蟹、贝等水产动物育苗中不可或缺[1]。海链藻属于硅藻门，含有丰富的蛋白质、维生素、脂肪酸和矿物质，在育苗中海链藻能显著促进对虾生长发育和免疫力[2]。

在对虾育苗中，微藻饵料一般以鲜藻投喂。但鲜活海藻往往由于供应不及时，与育苗进度脱节，很难满足育苗中对鲜活饵料的需求。冷藏浓缩藻（0～4 ℃）虽然可以部分缓解供应脱节的问题，但其保存时间有限，也不能彻底解决这个问题。因此，笔者探索冷冻浓缩海链藻对南美白对虾幼体培育中变态存活率的影响，以期为冷冻浓缩海链藻在对虾育苗中的应用提供理论基础。

1 材料与方法

1.1 配合饲料中添加冷冻浓缩海链藻对虾苗幼体变态的影响

将750万虾卵放入20 m3育苗池中孵化，约24 h后用配合饲料结合宁波浮田生物技术有限公司生产的冷冻浓缩海链藻（250 mL/包，108cells/mL， -20 ℃存储）经200～250目筛网搓洗后投喂虾苗;每4 h投喂上述饵料一次，配合饲料的量根据水体中饵料的残留和虾的摄食情况进行调整，冷冻藻每次投1～2包。当虾苗进入Z3阶段后，不再投喂冷冻浓缩藻。在整个培育过程中，2～4 h取样一次，镜检，确定虾苗所处的时期和不同时期虾苗的数量。整个试验阶段水温保持32 ℃左右。试验持续6 d。

1.2 Z1、Z2阶段仅投浓缩海链藻对虾苗幼体变态的影响

将500万虾卵分别放入2个15 m3的育苗池中孵化，约24 h后分别用冷冻和冷藏浓缩海链藻（108 cells/mL，存放约7 d，存储温度0～4 ℃）经200～250目筛网搓洗后投喂虾苗，直至虾苗进入Z3阶段;进入Z3后饵料投喂改为配合饲料。在整个培养过程，2～4 h取样一次，镜检，确定虾苗所处的时期和不同时期虾苗的数量。整个试验阶段水温保持32 ℃左右。试验持续6 d。

上述2个试验是在广东湛江市东海岛志诚苗厂开展。

1.3 不同状态的海链藻对虾苗变态存活率的影响 试验在广东牧海生物技术有限公司徐闻县下洋基地开展。对照组投喂虾片（简称虾片组），试验组分别投喂鲜活非浓缩海链藻（浓度10万～20万/mL，简称鲜活组）、冷冻浓缩海链藻（108cells/mL，低于-20 ℃存储，简称冷冻组）和冷藏普通浓缩海链藻（2×107cells/mL，0～4 ℃存储，简称冷藏组）。每个处理组2个平行，每个平行南美白对虾幼体3万尾，育苗水体为400 L，试验周期为6 d（144 h）。

虾卵孵化约24 h后开始饵料投喂试验，此时虾幼体基本进入溞状阶段。幼体培育条件及投喂策略见表1。其中，浓缩藻和虾片投喂时要经200～250目筛网搓洗投喂。每天08：00 测量对虾幼体密度， 并根据幼体密度调整投饵量。每天16：00 取一定数量幼体进行镜检，并记录幼体发育变态时间及幼体数量变化。试验过程中维持温度在32 ℃左右。幼体密度采用直接取样计数。

2 结果与分析

2.1 配合饲料中添加冷冻浓缩海链藻对虾苗幼体变态的影响

在配合饲料中加入冷冻浓缩海链藻，虾苗在6 d发育过程中经过无节幼体（N，第一次投喂之前，即0 h之前）、Z1（0～32 h）、Z2（32～60 h）、Z3（60～116 h）和糠虾（M）3个阶段（图1）。

无节幼体阶段（N），头胸腹不分节，3对附肢，靠卵黄生活;溞1阶段（Z1），初步形成消化系统（肠道），还没有形成复眼（有雏形）;溞2阶段（Z2），复眼有眼柄、额剑;溞3阶段（Z3），尾部形成尾扇，但腹部无乳头状凸起;糠1阶段（M1），腹部形成乳头状凸起;糠2阶段（M2），乳头上形成第2节。

虾苗幼体各阶段的存活率为溞状成活率79.7%，糖虾成活率78.8%。无节幼体是第一次投喂2～3 h前的数量;溞状幼体基本上是Z3的数量，而糠虾的数量是糠1的数量，到糠3时可能还会下降。

这表明冷冻藻添加到配合饲料中，不会抑制虾苗的变态发育，虾可以顺利进入Z3和糠虾阶段。

2.2 Z1、Z2阶段仅投喂冷冻海链藻对虾苗幼体变态的影响

虾卵放入育苗池约24 h时开始投喂浓缩海链藻。初始投喂6袋，随后根据虾苗池中藻细胞浓度来添加浓缩藻，使池中藻细胞浓度维持在5×103cells/mL左右。进入Z3阶段才开始投喂配合饲料。

表2反映了冷冻组、冷藏组中虾不同时期所处状态。由于两池外界条件基本一致，所以，两池中虾的状态很大程度上可能是由投喂的饵料藻所影响。同时培养的虾苗，冷冻组比冷藏组中虾苗幼体更早进入Z3和糠虾阶段。冷冻存储的藻比冷藏存储的藻更有利于虾苗变态。

不同处理组虾苗幼体不同阶段存活率见表3。由表3可知，冷藏组溞状幼体成活率和糠虾成活率均比冷冻组低。这进一步说明冷冻浓缩海链藻可能比冷藏海链藻更适合作为对虾的开口料。

2.3 不同状态的海链藻对虾苗变态存活率的影响

随饵料培育南美白对虾时间的增加，各组南美白对虾存活率逐渐降低。6 d后，冷冻组、冷藏组和鲜活组及虾片组南美白对虾幼体存活率分别为（52.00±4.00）%、（54.00±2.00）%、（56.00±2.67）%、（38.00±0.67）%。其中， 虾片组南美白对虾幼体存活率明显低于海链藻组，后三者之间差别不明显（图2）。鸿兴虾苗厂（湛江徐闻前山镇）在南美白对虾幼体养殖阶段（溞状阶段），在配合饲料中添加冷藏普通浓缩海链藻2瓶/（池·d），相比仅使用配合饲料的池子，南美白对虾摄食率高，生长速度快，活力强，成活率提高20%以上。

微藻对南美白对虾幼体各期变态的影响见表4。微藻处理组的变态时间明显比仅投喂虾片的处理组短。到第4天时，微藻处理组虾苗幼体基本处于Z2向Z3的过渡，而虾片组尚处于Z1、Z2阶段;到第6天，微藻组处于向糠虾过渡阶段，此时虾片组仍处于溞状阶段。

在微藻处理组中，虽然各处理组对南美白对虾幼体各期变态和存活率影响差别不大，但各组加入的藻液体积差别较大。尤其是添加鲜活海链藻的处理组，到第3天虾苗计数时，加入的藻液体积几乎是原始苗池水样体积的50%。在实际生产育苗中，过多藻液体积的添加可能对育苗带来风险，如可能引起应急反应等。