2种芽孢杆菌对克氏原螯虾幼虾生长的影响

摘要 采用不同浓度的解淀粉芽孢杆菌（ Bacillus amyloliquefaciens ）SS-42和地衣芽孢杆菌（ Bacillus licheniformis ）10-2发酵液饲喂经驯化的克氏原螯虾（ Procambarus clarkii ），通过观察计算克氏原螯虾幼虾的存活率、残肢率和体重增长率，研究2种芽孢杆菌对克氏原螯虾幼虾生长的影响。结果发现，各饲喂量芽孢杆菌处理组死亡率和残肢率与对照组均无显著差异，SS-42饲喂量为105 CFU/（尾·d）时各项生长指标表现最佳，体重增长率为（29.44±1.26）%;相同饲喂量条件下，饲喂SS-42菌株处理组克氏原螯虾的平均体重增长率显著高于饲喂10-2菌株的处理组（P<0.05）。由此可见，无明显胁迫条件下，连续饲喂芽孢杆菌对克氏原螯虾幼虾生长情况总体上有显著提高作用，解淀粉芽孢杆菌的提高效果明显高于地衣芽孢杆菌。该试验结果可为应用芽孢杆菌生产克氏原螯虾发酵饲料奠定基础。

关键词 克氏原螯虾;解淀粉芽孢杆菌;地衣芽孢杆菌;生长

中图分类号 S 917.4  文献标识码 A  文章编号 0517-6611（2022）17-0079-04

doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2022.17.020

开放科学（资源服务）标识码（OSID）：

Effects of Two Species of  Bacillus  on the Growth of  Procambarus clarkii  Juvenile

CHEN Yu-ling1， LI Zhi-yuan1， LI Xiao-ping2 et al

（1.College of Marine Science and Fisheries， Jiangsu Ocean University， Lianyungang，Jiangsu 222005;2.Agricultural Economic and Technological Service Center， Dalou District， Sihong County， Sihong， Jiangsu  223900）

Abstract  Procambarus clarkii  after domestication were fed with different concentrations of  Bacillus amyloliquefaciens  SS-42 and  Bacillus licheniformis  10-2 solution. The survival rate， stump rate and growth rate of body weight of  P. clarkii  juvenile were observed and calculated to study the effects of two species of  Bacillus  on the growth of  P. clarkii  juvenile were studied. The results showed that the mortality rate and stump rate had no significant difference between different treatment groups of  Bacillus  with different feeding amount and control group. When the daily feeding amount of strain SS-42 was 105 CFU/tail， the growth indices were the best， the growth rate of body weight was （29.44±1.26）%. At the same feeding amount， the average growth rate of body weight in the treatment groups with feeding with SS-42 strain was significantly higher than that in the treatment groups with feeding with 10-2 strain （P < 0.05）.Therefore， under no obvious stress conditions， continuous feeding of  Bacillus  had significant increasing effects on the growth of  P. clarkii  juvenile， the increasing effects of  B. amyloliquefaciens  were significantly higher than that of  B. licheniformis . The test results could lay the foundation for producing the fermented feed of  P. clarkii  with  Bacillus .

Key words  Procambarus clarkii ; Bacillus amyloliquefaciens;Bacillus licheniformis ;Growth

随着国民生活水平的不断提高，对食品安全的要求也愈发严格。在水产品养殖安全的源头——饲料环节，微生物发酵饲料作为一种新型的生态健康型饲料，具有十分广阔的前景。2021年克氏原螯虾（ Procambarus clarkii ）产值超过4 000亿元，其新型健康养殖尚处于初级阶段[1]。利用有益菌发酵饲料，改善饲料品质，提高饲料利用率，是目前研究的重要课题。王天神[2]研究表明饲料中添加25%～35%的益生菌可以提高克氏原螯虾的生长性能;生物发酵饲料中的益生菌能够优化肠道中的微生物菌群，提高消化酶活性，提高饲料利用率，促进营养物质吸收，增强克氏原螯虾的特异性免疫和抗病能力。徐增洪等[3]研究发现生物饲料对克氏原螯虾的生长和性腺成熟发育有显著影响（P<0.05），表明生物饲料对克氏原螯虾等水产动物养殖有较好的饲喂效果，它同时具有加快虾蟹生长速度和改善商品虾蟹品质的作用。地衣芽孢杆菌和解淀粉芽孢杆菌是发酵饲料中常用的微生物，对水产动物生长具有巨大的发展潜力[4]。

笔者用解淀粉芽孢杆菌（ Bacillus amyloliquefaciens ）SS-42和地衣芽孢杆菌（ Bacillus licheniformis ）10-2作为试验菌株，以不同菌浓度混合饲料饲喂克氏原螯虾幼虾，通过测定生长状况比较不同饲喂量不同菌株对克氏原螯虾生长的影响，以期为微生物发酵饲料在克氏原螯虾养殖中的应用奠定理论基础。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试验动物。克氏原螯虾购自赣榆某养殖场;试验所用饲料为某公司生产的膨化颗粒饲料。

1.1.2 试验菌株。解淀粉芽孢杆菌：SS-42菌株，从连云港紫菜养殖场养殖的紫菜中分离，由江苏海洋大学微生物实验室分离、纯化和保存。地衣芽孢杆菌：10-2菌株，从连云港紫菜养殖场养殖的紫菜中分离，由江苏海洋大学微生物实验室分离、纯化和保存。

1.2 方法

1.2.1 菌种活化、摇床培养与稀释。用固体培养基活化SS-42和10-2菌株，在2216E固体培养基平板上三区划线后于28 ℃下培养活化。次日取单菌落转种于50 mL液体培养基中，30 ℃、200 r/min振荡培养18 h，使用血球计数板计数，梯度稀释至浓度103、105、107 CFU/mL，待用。

1.2.2 试验处理设计。试验设置解淀粉芽孢杆菌SS-42和地衣芽孢杆菌10-2的3个浓度梯度[103、105、107 CFU/（尾·d）]的处理组，3个解淀粉芽孢杆菌处理组为A 1、A 2、A 3，3个地衣芽孢杆菌处理组为B 1、B 2、B 3，每个浓度梯度重复3次，另外设置1个空白对照组（CK），共21个处理。将不同浓度的菌液与饲料混合后投喂到相应养殖箱中，饲养期间每天统计死亡和出现残肢的克氏原螯虾数量，饲养结束后计算总死亡率、总残肢率和体重增长率等指标。

1.2.3 养殖管理。试验虾饲养在无毒塑料养殖箱（63 cm×53 cm×30 cm）中。水深5 cm，用增氧泵不间断充气。养殖用水是经过充分曝气的静置自来水，水中加入抗应激剂（0.003 g/mL）帮助适应环境，加入硫代硫酸钠（0.003 g/mL）和除氯、钙剂（0.007 g/mL）促进脱壳。外罩遮光度90%的遮阳网，养殖盆中加入遮蔽物供虾躲避和休憩。

从养殖场上购买的克氏原螯虾幼虾体长为（6.21±1.52）cm，体质量为（8.35±0.15）g，体色正常、反应活跃、体型相近。需先经过驯化处理，待虾适应实验室的养殖环境后挑取其中活力较强、腹肢齐全、体色鲜亮的个体放入编好号的养殖盆中，每个养殖盆中饲养10只虾。

每天投饲2次，分别为08：00和17：00，2次投喂比例为3∶7，按照虾平均体重的5%投喂饲料。饲喂前菌液与饲料充分混合，并使菌液全部吸附在饲料上。投饲3 h后使用虹吸器吸除水体中的杂质，最后向养殖箱中添加新水至水深5 cm。饲喂前，测定水质指标。

连续饲喂7 d，每天观察和记录附肢是否完整，计算死亡率和残肢率;养殖结束后对每个处理的克氏原螯虾称重，计算平均体重、体重增长率和饲料系数。

1.3 指标测定

1.3.1 水质指标测定。水质指标测定使用快速水质分析盒（由湛江市浩洋生物科技有限公司生产），参照试剂盒说明书进行测定。

1.3.2 生长指标测定。每天09：00记录各处理克氏原螯虾幼虾的死亡数量和出现残肢的虾数量，计算每天的死亡率和残肢率。试验结束后，计算体重增长率。死亡率、残肢率和体重增长率的计算公式如下：

体重增长率=[（W 1-W 0）/W 0]×100%（1）

死亡率=D/Z×100%（2）

残肢率=C/Z×100%（3）

饲料系数= W 2 /（W 1-W 0）×100%（4）

式中，W 0为始重，W 1为末重，W 2为饲料消耗量，D 为24 h内每个处理死亡数， C 为24 h内每个处理内出现附肢缺失的虾尾数， Z 为每个处理投放克氏原螯虾的尾数[5]。

1.3.3

数据统计与分析。试验数据使用Origin 2018软件进行单因素方差分析与绘图。

2 结果与分析

所测水质指标都在安全范围内，氯含量为0.010～0.015 mg/L，亚硝酸盐含量为0.005～0.010 mg/L，氨氮含量为0.1～0.2 mg/L，pH为7.9～8.0，溶解氧含量为7 mg/L。

2.1 解淀粉芽孢杆菌SS-42对克氏原螯虾生长的影响

2.1.1 解淀粉芽孢杆菌SS-42对克氏原螯虾死亡率的影响。由表1可知，对照组（CK）克氏原螯虾7 d总死亡率为50.00%，A 1、A 2、A 3组7 d总死亡率均为50.00%。由此可见，SS-42各饲喂量处理组与对照组相比无显著差异（P>0.05）。