保健食品原料龟甲提取物缓解体力疲劳功能研究

疲劳在中医古籍中通常被称作“疲极”“倦怠”等，是因机体过度劳累而损伤精气血津液、阴阳乃至脏腑，皆属于因气血耗伤而导致的虚证，因此疲劳的病机主要是因心肝脾肺肾五脏的功能虚损，机体失于气血的濡养。《素问·六节藏象论》记载：“肝者罢极之本”，肝脏功能失调是疲劳产生的重要原因，肝脏失调，则可使肝失疏泄、脏腑气血功能紊乱，导致疲劳的发生。肾为先天之本，是体力产生的动力和源泉。心主血脉、主神明，推动调控血液运行，营养全身，并调节人的精神活动及与外界环境的适应性。

龟甲为龟科动物乌龟（Chinemys reevesii Gray）的背甲及腹甲，被列为上品，现收载于《中华人民共和国药典》。龟甲味咸、甘，性微寒，归肝、肾、心经，具有滋阴潜阳、益肾强骨、养血补心的功效，被历代名医和中医典籍视为补肾良药。比如，“金元四大医家”之一的朱丹溪称龟甲有“补阴，主阴血不足，去瘀血，止血痢”的作用；《本草蒙筌》记载，龟甲“专补阴衰，善滋肾损”；《本草通玄》言“龟甲咸平，肾经药也”，其“善滋肾损”。现代药理学研究表明，龟甲“滋阴”的功效主要与调节能量代谢、补血、增强免疫力、抗衰老等作用有关。

龟甲作为滋阴补肾佳品，具有很高的营养价值，可养肝、益肾、补心，但其与疲劳的关系却少有报道。为进一步研究龟甲提取物与疲劳的关系，本研究对龟甲提取物缓解体力疲劳功能进行了实验，以期为其作为保健食品原料的开发利用奠定理论基础。

一、材料与方法

1.材料。保健食品原料龟甲提取物，购自浙江方格药业有限公司，每日推荐用量为0.3g，折合原药材龟甲每日用量3g，成人体重按60kg计算，则折合保健食品原料龟甲提取物剂量为5mg/kg·bw。

2.实验动物。SPF级健康ICR种雄性小鼠，体重18-22g，北京维通利华实验动物技术有限公司提供，实验动物在温度21℃-26℃、相对湿度40%-70%的屏障环境中饲养。

3.仪器与器材。游泳箱（大小约50cm× 50cm×40cm），电子天平，铅皮，分光光度计，带塞试管，电炉，灌胃针头，离心机，扭力天平，移液泵，匀浆器，振荡器，玻璃漏斗，手术器械，加样器，吸量管，带塞离心管，微量吸管，电热水箱，恒温水浴锅等。

4.试剂。尿素试剂盒（二乙酰-肟法）：二乙酰-肟应用液、氯化铁-磷酸应用液、尿素标准液（200mg/L）；5%三氯醋酸（用蒸馏水配）（TCA），葡萄糖标准液，浓硫酸（AR），蒽酮试剂，4%硫酸铜、浓硫酸（AR）、1%氟化钠溶液，蛋白沉淀剂，沉淀剂-氟化钠混合液，1.5%对羟基联苯溶液，乳酸标准储备液（1g/L），乳酸标准应用液（0.01g/L）等。

5.实验分组。将SPF级健康ICR种雄性小鼠160只随机分为Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ四大组，每大组40只，分别进行负重游泳实验、血清尿素测定、肝糖原测定、血乳酸测定。每大组随机分为低剂量组（剂量为25mg/kg·bw，相当于人体推荐量的5倍）、中剂量组（剂量为50mg/kg·bw，相当于人体推荐量的10倍）、高剂量组（剂量为150mg/kg·bw，相当于人体推荐量的30倍）三个剂量组及阴性对照组。三个剂量组每天灌胃给予不同浓度受试样品，对照组给予等体积的蒸馏水，灌胃体积为20mL/kg·bw，连续给予30天。

6.实验方法。（1）动物体重：记录实验期间各组小鼠初始体重、中期体重、末期体重，计算体重增重。（2）小鼠负重游泳实验：Ⅰ组末次给予受试样品30min后，将尾根部负荷5%体重铅皮的小鼠置于游泳箱中游泳。水深不少于30cm，水温（25±1.0）℃，记录小鼠自游泳开始至死亡的时间，即小鼠负重游泳时间。（3）血清尿素测定：Ⅱ组末次给样30min后，在温度为30℃的水中不负重游泳90min，休息60min后采血，采用二乙酰-肟法测定小鼠血清尿素。（4）肝糖原测定：Ⅲ组末次给样30min后处死动物，采用蒽酮法测定小鼠肝糖原含量。（5）血乳酸测定：Ⅳ组小鼠末次给样30min后采血，然后不负重在温度为30℃的水中游泳10min后停止，采用自配试剂测定方法测定小鼠血乳酸，计算血乳酸曲线下面积。血乳酸曲线下面积＝5×（游泳前血乳酸值+3×游泳后0min的血乳酸值+2×游泳后休息20min的血乳酸值）。

7.实验数据处理。计量资料采用方差分析，先进行方差齐性检验，方差齐，计算F值，F值≥F0.05，P≤0.05，认为差异有统计学意义；非正态或方差不齐的数据变量转换至满足正态或方差齐要求后再进行统计；未达到正态或方差齐的，改用秩和检验进行统计。

二、结果与分析

1.动物体重。各剂量组小鼠初始体重、中期体重、末期体重及体重增重与对照组比较，均无显著性差异（P＞0.05）。说明龟甲提取物对动物体重无影响，实验结果见表1-4。

2.负重游泳实验。各剂量组小鼠负重游泳时间均长于对照组，保健食品原料龟甲提取物中、高剂量组与对照组比较，差异有显著性（P＜0.05），说明龟甲提取物能够延长小鼠负重游泳时间，实验结果见表5。

3.血清尿素测定。各剂量组小鼠血清尿素均低于对照组，各剂量组与对照组比较，差异无显著性（P＞0.05），实验结果见表6。

4.肝糖原测定。各剂量组小鼠肝糖原含量均高于对照组，保健食品原料龟甲提取物中、高剂量组与对照组比较，差异有显著性（P＜0.05），说明龟甲提取物能够提高小鼠肝糖原含量，实验结果见表7。

5.血乳酸测定。各剂量组小鼠三个时间点血乳酸曲线下面积均小于对照组，且保健食品原料龟甲提取物中、高剂量组与对照组比较，差异有显著性（P＜0.05），说明龟甲提取物能够降低小鼠血乳酸曲线下面积，实验结果见表8。

三、结论

通过进行龟甲提取物缓解体力疲劳功能动物实验，结果表明，保健食品原料龟甲提取物能延长小鼠负重游泳时间，降低小鼠游泳后血清尿素浓度，提高肝糖原含量，降低小鼠血乳酸曲线下面积，说明龟甲提取物具有缓解体力疲劳的作用，可作为缓解体力疲劳功能的保健食品原料使用。

作者简介：李梦军，男，汉族，湖南常德人，高级工程师，研究方向为食品加工。