GC-MS/MS法测定大米、砀山梨及娃娃菜中胺鲜酯的残留量

摘 要：建立了一种适用于气相色谱-串联质谱联用仪测定蔬菜、水果、粮谷中胺鲜酯残留量的分析方法。试样经过乙腈提取，QuEChERS dSPE EMR-Lipid（大米试样）、PSA、C18及GCB（砀山梨和娃娃菜试样）净化后，以HP-5MS色谱柱进行分离，在电子轰击离子源、多反应监测模式下检测大米、砀山梨和娃娃菜中胺鲜酯的残留量，基质外标法定量。结果表明，胺鲜酯浓度在2～200 ng·mL-1时，线性关系良好，相关系数（r）均在0.999 9以上，在3个不同浓度添加水平下，大米胺鲜酯的回收率为92.4%～105.0%，砀山梨胺鲜酯的回收率为84.0%～90.0%，娃娃菜胺鲜酯的回收率为93.6%～112.0%，大米的方法检出限为0.002 mg·kg-1，定量限为0.004 mg·kg-1；砀山梨和娃娃菜的检出限为0.001 mg·kg-1，定量限为0.002 mg·kg-1。方法精密度试验的相对标准偏差在5%以内。该方法适用于蔬菜、水果、粮谷中胺鲜酯的定性和定量测定。

关键词：气相色谱-串联质谱联用仪；胺鲜酯；残留量

Determination of Residual Diethyl Aminoethyl Hexanoate in Rice， Dangshan Pear and Baby Cabbage by GC-MS/MS Method

ZHU Xiaolei， WANG Mingming， MEI Chan， ZHUANG Jianbing， SU Jingping， DONG Yao

（Productivity Centre of Jiangsu Province， Nanjing 210001， China）

Abstract： A gas chromatography-tandem mass spectrometry method was developed for the determination of residual diethyl aminoethyl hexanoate in vegetables， fruits and grains. The sample is extracted by acetonitrile， purified by QuEChERS dSPE EMR-Lipid （rice sample）， purified by PSA， C18， and GCB （Dangshan pear and baby cabbage sample）， and separated by HP-5MS column. The residues of diethyl aminoethyl hexanoate in rice， Dangshan pear and baby cabbage were detected by electron bombardment ion source and multi-party monitoring mode. Quantification by matrix external standard method. The results show that the concentration of DA-6 is in the range of 2～200 ng·mL-1.The linear relationship was good， and the correlation coefficients （r） were all above 0.999 9. At three different concentration addition levels， the recovery rate of rice DA-6 were 92.4%～105.0%， the recovery rate of Dangshan pear DA-6 were 84.0%～90.0%， the recovery rate of baby cabbage DA-6 is 93.6%～112.0%. The detection limit for rice is 0.002 mg·kg-1， and the quantification limit is 0.004 mg·kg-1; the detection limit for Dangshan pear and baby cabbage is 0.001 mg·kg-1， and the quantitative limit is 0.002 mg·kg-1. The relative standard deviation of the method precision test is within 5%. This method is suitable for the qualitative and quantitative determination of diethyl aminoethyl hexanoate in vegetables， fruits， and grains.

Keywords： gas chromatography-tandem mass spectrometry; diethyl aminoethyl hexanoate; residual amount

胺鲜酯（DA-6）是目前应用较为广泛的植物生长调节剂之一，属于细胞分裂素类植物生长调节剂[1]。DA-6具有促进种子萌发、促进根系形态建成、提高叶绿素含量、改善品质以及提高作物抗逆能力等作用。胺鲜酯本身不含营养成分，只能调配营养，因此在使用时不可随意增加浓度。胺鲜酯还能促进植物产生乙烯，加速植物的衰老；当其在植物体内过量累积时，就会造成植物体内激素紊乱[2]。胺鲜酯还是一种食品添加剂，可以增强食品的鲜味。然而，胺鲜酯可能会引发过敏反应，特别是对于亚硝酸盐过敏的人群，长期食用含有胺鲜酯的食品可能对人体健康产生负面影响，如增加患癌的风险。部分国家胺鲜酯的使用受到法律法规的限制，只能在特定的食品中使用，如即食面、罐头和速冻食品等。由于消费者对于食品安全和健康的关注度逐渐提高，许多消费者开始拒绝购买含有胺鲜酯的食品，为了减少食品安全问题的发生，十分有必要建立果蔬及粮谷中胺鲜酯残留量测定的方法[3]。为解决上述问题，本研究以大米、砀山梨、娃娃菜为研究对象，建立了一套快速、准确、灵敏的GC-MS/MS的分析方法，可用于测定大米、砀山梨、娃娃菜中的胺鲜酯残留量，也可为该药在其他蔬菜、水果、粮谷中的残留检测提供科学依据。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器

1.1.1 实验用材料

大米、砀山梨、娃娃菜均来自市场购买。

1.1.2 试剂

色谱纯乙腈（Honeywell公司）；胺鲜酯（2-二乙胺乙基己酸）（CAS号10369-83-2）标准溶液浓度为1 000 mg·L-1，上海安谱璀世标准技术服务有限公司；无水硫酸镁（CAS号7487-88-9），分析纯，国药集团化学试剂有限公司；氯化钠（CAS号7647-14-5），分析纯，南京化学有限公司；40～60 μm乙二胺-N-丙基硅烷化硅胶（PSA），Agela Technologies；40～60 μm十八烷基硅烷键合硅胶（C18），天津博纳艾杰尔科技有限公司；40～120 μm石墨化碳黑（Graphitized Carbon Black，GCB）；去离子水：分析用水符合GB/T 6682—2008中二级水的规定，电阻率≥18.2 MΩ·cm。

1.1.3 仪器

Agilent 8890B-7000D气质联用仪（安捷伦）；HP-5MSUI色谱柱（30 m×0.250 mm，0.25 μm），安捷伦；WH-3旋涡混匀仪，上海沪西分析仪器厂有限公司；BSA224S-CW分析天平，赛多利斯科学仪器（北京）有限公司；KQ-400KDE型高功率数控超声波清洗器，昆山市超声仪器有限公司；TGL-15B台式高速离心机，上海安亭科学仪器厂；组织捣碎机；净化管：QuEChERS dSPE EMR-Lipid，安捷伦；移液枪（2～20 μL、20～200 μL、100～1 000 μL），Thermo。

1.2 试验方法

1.2.1 样品前处理

（1）大米试样制备。①提取。精密称取5.0 g（精确至0.000 1 g）大米试样，加入10 mL乙腈溶液及一粒陶瓷均质子，盖上离心管管盖，超声10 min，取出摇匀。剧烈振荡1 min后，于离心机中5 000 r·min-1离心4 min，待净化。②净化。取含1 g QuEChERS dSPE EMR-Lipid萃取粉剂的15 mL离心管，加入5 mL去离子水涡旋振荡，立即加入5 mL大米试样上清液涡旋振荡1 min后，加到去脂质净化管中振荡、于离心机中5 000 r·min-1离心4 min。③除水。称取0.8 g无水硫酸镁和0.4 g氯化钠于另一15 mL离心管中，加入上述净化液涡旋振荡1 min，于离心机中5 000 r·min-1离心4 min，取上层有机相经0.22 μm微孔滤膜过滤后，转移至GC样品瓶中待上机分析。

（2）砀山梨、娃娃菜试样制备。精密称取

10.0 g（精确至0.000 1 g）砀山梨试样、10.0 g（精确至0.000 1 g）娃娃菜试样分别置于50 mL塑料离心管中，加10 mL乙腈溶液，加入2 g无水硫酸镁和6 g氯化钠及一粒陶瓷均质子，盖上离心管管盖，剧烈振荡1 min后，于离心机中5 000 r·min-1离心4 min，吸取6 mL上清液加入装有100 mg PSA、100 mg C18及100 mg GCB的15 mL离心管中，涡旋混匀1 min，于离心机中5 000 r·min-1离心4 min，取上清液经

0.22 μm微孔滤膜过滤后，转移至GC样品瓶中待上机分析。

1.2.2 基质标准曲线绘制

①100 μg·mL-1胺鲜酯标准储备溶液配制。精密移取胺鲜酯标准溶液1.0 mL于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀。②1 μg·mL-1胺鲜酯标准中间液配制。精密移取100 μg·mL-1胺鲜酯标准储备溶液0.1 mL于10 mL容量瓶中，用乙腈定容至刻度，摇匀。③标准曲线的配制。精密移取1 μg·mL-1胺鲜酯标准中间液2 μL、5 μL、10 μL、20 μL、50 μL、100 μL和200 μL于GC样品瓶中，分别用大米、砀山梨、娃娃菜试样净化液逐级稀释定容至1 mL，摇匀。配制成质量浓度为2 ng·mL-1、5 ng·mL-1、10 ng·mL-1、20 ng·mL-1、50 ng·mL-1、100 ng·mL-1和200 ng·mL-1的基质标准曲线溶液。按照优化后仪器工作参数设定仪器条件测定标准溶液中胺鲜酯的色谱峰面积，该峰面积与胺鲜酯的浓度呈线性关系，自动绘制标准曲线，得出线性回归方程及线性相关系数。

1.2.3 检出限溶液及定量限溶液的制备

①检出限溶液（1 ng·mL-1）。取10 μL标准中间液（1 μg·mL-1）于10 mL容量瓶中，加乙腈稀释定容，摇匀。②定量限溶液（2 ng·mL-1）。取20 μL标准中间液（1 μg·mL-1）于10 mL容量瓶中，加乙腈稀释定容，摇匀。

1.2.4 大米、砀山梨和娃娃菜重复性试验样品制备

精密称取6份5.0 g空白大米试样置于50 mL塑料离心管中；分别精密称取6份10.0 g空白砀山梨和空白娃娃菜试样置于50 mL塑料离心管中，分别加入1 mg·mL-1胺鲜酯标准中间液150 μL，大米试样制备方法按1.2.1（1）前处理，砀山梨和娃娃菜试样按1.2.1（2）前处理。

1.2.5 大米、砀山梨和娃娃菜准确度试验样品制备

精密称取大米、砀山梨、娃娃菜空白试样各9份分别置于50 mL塑料离心管中，各自分别加入1 μg·mL-1胺鲜酯标准中间液50 μL、150 μL、250 μL，制成加标浓度分别为5 ng·mL-1、15 ng·mL-1 、25 ng·mL-1的供试品溶液各3份，大米试样按1.2.1（1）制备方法前处理，砀山梨和娃娃菜试样按1.2.1（2）制备方法进行前处理。

1.3 仪器工作条件