液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品中糖皮质激素类药物的残留

摘 要：目的：利用液相色谱-串联质谱法检测动物源性食品中糖皮质激素类药物的残留。方法：将组织样品进行碱水解后，用乙酸乙酯提取。使用高效液相色谱-串联质谱仪分析，采用电喷雾离子源，正离子扫描。结果：本方法线性关系良好，相关系数均大于0.99，加标回收率为72.95%～99.86%。结论：该方法可用于动物源性食品中糖皮质激素类药物残留的检测，简单灵敏，准确度高。

关键词：液相色谱-串联质谱法；糖皮质激素类；药物残留

Determination of Glucocorticoid Residues in Foods of Animal Origin by Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry

KANG Zonghua1，2， ZHOU Yujie1

（1.Hunan Kouweiwang Group Co.， Ltd.， Yiyang 413000， China;

2.Hunan Tuopu Inspection Institute， Yiyang 413000， China）

Abstract： Objective： To detect the residues of glucocorticoids in animal-derived foods by liquid chromatography-tandem mass spectrometry. Method： After alkaline hydrolysis， the tissue samples were extracted with ethyl acetate. Using high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry analysis， using electrospray ion source， positive ion scanning. Result： The linear relationship of this method was good， the correlation coefficient was greater than 0.99， and the recovery rate was 72.95%～99.86%. Conclusion： This method can be used for the detection of glucocorticoid drug residues in animal-derived foods， which is simple， sensitive and accurate.

Keywords： liquid chromatography-tandem mass spectrometry; glucocorticoid; drug residues

糖皮质激素为类固醇类激素[1]，具有抗炎[2]的作用，常用的糖皮质激素有倍他米松、地塞米松、倍氯米松以及可的松等[3]。随着现代食品工业化的快速发展，糖皮质激素类药物也被广泛应用于动物源性食品里，此类药物会在食品中残留。我国禁限用的兽药中糖皮质激素类药物占比为1.68%。世界各国对动物源性食品中糖皮质激素残留的检测方法也提出了更高的标准要求[4]。目前常用于动物源性食品中糖皮质激素类药物检测的方法包括液相色谱法、液质联用法等。本文采用液相色谱-串联质谱法对动物源性食品中糖皮质激素类药物残留进行检测。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

猪肉，商场购买；甲醇、乙腈，默克；正己烷，天津市科密欧化学试剂有限公司；乙酸乙酯，色谱纯，麦克林；泼尼松、地塞米松、倍氯米松、甲基泼尼松龙、倍他米松、氢化可的松、泼尼松龙标准品，坛墨质检。本方法所用其他试剂均为分析纯。

1.2 仪器与设备

AB3500液质联用仪，AB SCIEX；AR224CN电子天平，奥豪斯；XS205电子天平，梅特勒托利多；Agilent ZORBAX SB-C18色谱柱（150 mm×2.1 mm，3.5 μm），安捷伦。

1.3 标准溶液配制

精密称取适量标准品，用甲醇溶解定容，得到浓度为1 000 μg·mL-1的糖皮质激素类药物标准贮备液，-20 ℃以下储存。

1.4 实验方法

1.4.1 试料的制备

称取猪肉样品200 g，完全切碎后经高速组织均质机捣碎均质。平均分为供试试料和空白试料。

1.4.2 试料的提取

于50 mL离心管中加入组织试料（2±0.02） g，之后加乙酸乙酯20 mL混合，8 000 r·min-1离心20 min，移取乙酸乙酯层。于残渣中加0.1 mol·L-1氢氧化钠溶液15 mL，混匀，再加入乙酸乙酯20 mL混合，200 r·min-1摇床振动20 min，8 000 r·min-1离心20 min，移取乙酸乙酯层。合并两次提取液，42 ℃旋转蒸至近干，加乙酸乙酯1 mL和正己烷5 mL，溶解残渣，待净化[5]。

1.4.3 试料的净化

正己烷6 mL活化固相萃取柱，提取液过柱。正己烷6 mL淋洗萃取柱，抽干，正己烷-丙酮（6/4，V/V）6 mL洗脱。洗脱液50 ℃氮气吹干，加20%乙腈水溶液0.5 mL，溶解残渣，转入1.5 mL离心管中，15 000 r·min-1离心20 min，取上清液，过0.22 μm滤膜，供高效液相色谱-串联质谱法测定。

1.4.4 标准曲线的绘制

准确量取一定量的标准贮备液，采用20%乙腈水溶液稀释，得到浓度梯度均为0.5 μg·L-1、1.0 μg·L-1、5.0 μg·L-1、10.0 μg·L-1和50.0 μg·L-1的泼尼松、泼尼松龙、倍他米松、甲基泼尼松龙、倍氯米松、氢化可的松、地塞米松混合标准系列工作液。依次测定，以对应的标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。

1.5 仪器条件

1.5.1 液相色谱条件

色谱柱：Agilent ZORBAX SB-C18（150 mm×2.1 mm，3.5 μm）；柱温为40 ℃；流动相：A-0.2%甲酸水溶液，B-乙腈，梯度淋洗。流速：0.40 mL·min-1；进样量：20 μL。

1.5.2 质谱条件

离子源：电喷雾；电喷雾电压：45 000 V；扫描方式：负离子扫描；检测方式：质谱多反应监测；辅助气温度：350 ℃。使用前应保证质谱灵敏度达到标准要求。

2 结果与分析

2.1 标准曲线

进各标准系列工作液20 μL，记录各主峰与内标物的峰面积。不同组分的线性方程及相关系数如表1所示。本试验的线性相关系数均大于0.99，符合相关标准要求。

2.2 加标回收试验

将猪肉样品按照1.4.1和1.4.2处理，进行3水平加标回收试验，结果见表2。《合格评定 化学分析方法确认和验证指南》（GB/T 27417—2017）[6]规定，含量≤1 mg·kg-1时，样品加标回收率应为60%～120%。由表2可知，泼尼松的加标回收率≥93.09%，甲基泼尼松龙的加标回收率≥72.95%，倍他米松的加标回收率≥79.54%，地塞米松的加标回收率≥86.85%，倍氯米松的加标回收率≥86.27%，氢化可的松的加标回收率≥90.02%，泼尼松龙的加标回收率≥97.45%，回收率结果均符合标准规定。

2.3 方法检出限和定量限

采用信噪比法确定样品中组分的检出限，当信噪比为3±1即为检出限。将浓度为0.05 ng·mL-1的标准溶液连续进样3次，计算信噪比，测定结果见表3。

2.4 精密度

两次独立测定结果的绝对差值（重复条件下获得）应≤算术平均值的15%。本实验各成分的最大精密度为泼尼松4.91%，甲基泼尼龙14.48%，倍他米松5.83%，地塞米松7.32%，倍氯米松5.26%，氢化可的松3.85%，泼尼松龙3.62%，精密度结果符合要求。

3 结论

本实验建立了用于检测动物源性食品中糖皮质激素类药物残留的液相色谱-串联质谱法，该方法简单快速、灵敏度高，提高了工作效率，满足标准方法的要求，可为检测糖皮质激素类药物残留（动物源性食品）提供方法支撑。

参考文献

[1]崔晓亮，邵兵，赵榕，等.超高效液相色谱-串联电喷雾四极杆质谱法同时测定牛奶中12种糖皮质激素的残留[J].色谱，2006，24（3）：213-217.

[2]代娟，陆家海.动物源性食品中糖皮质激素残留检测方法的研究进展[J].中国兽医学报，2010，30（3）：428-432.

[3]陈凤燕，盘焯晖，陆曼芝，等.食品中糖皮质激素残留检测方法的研究进展[J].食品安全质量检测学报，2021，12（19）：7541-7548.

[4]黄婷，谭磊，何玉榆，等.液相色谱-串联质谱法测定动物源性食品中糖皮质激素类药物残留[J].国外畜牧学（猪与禽），2022，42（6）：107-110.

[5]中华人民共和国农业部.动物源性食品中11种激素残留检测 液相色谱-串联质谱法：农业部1031号公告—1—2008[S/OL].（2008-05-09）[2023-10-23].http：//www.csres.com/detail/226271.html.

[6]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局，中国国家标准化管理委员会.合格评定 化学分析方法确认和验证指南：GB/T 27417—2017[S].北京：中国标准出版社，2017.