22018—2022年淄博市市售双壳贝类中诺如病毒检测分析

摘 要：目的：分析淄博市市售双壳贝类中诺如病毒检测结果，了解其污染情况，为开展食品中诺如病毒风险评估及采取有效防控措施提供数据支持。方法：采集2018—2022年淄博市市售双壳贝类样本155份，提取病毒核酸并采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应分别进行诺如病毒GI型和GII型检测。结果：2018—2022年采集市售双壳贝类155份，检出诺如病毒阳性29份，总阳性检出率为18.71%。GII型阳性检出率（10.97%）高于GI型阳性检出率（4.52%），差异有统计学意义（P＜0.05），不同季度检出率差异有统计学意义（P＜0.05），第一季度检出率最高（50.00%）。结论：淄博市市售双壳贝类中存在诺如病毒污染现象，以GII型为主，第一季度检出率最高，需加强监测，开展相关风险评估，以降低诺如病毒引起的食源性疾病负担。

关键词：双壳贝类；诺如病毒；食源性疾病

Detection and Analysis of Norovirus in Bivalves Sold in Zibo City from 2018 to 2022

ZHU Haining1， ZHANG Qun1， XU Jin1， HAO Junfeng1， ZHAO Zengyang2

（1.Zibo Center for Disease Control and Prevention， Zibo Institute of Preventive Medicine， Zibo 255026， China; 2.Zibo Municipal Health Commission， Zibo 255000， China）

Abstract： Objective： To analyze the detect results of Norovirus in bivalves sold in Zibo city， to understand their pollution situation and provide data support for conducting risk assessment of Norovirus in food and taking effective prevention and control measures. Method： Collect 155 bivalve samples sold in Zibo city from 2018 to 2022， extract viral nucleic acid， and use real-time fluorescence quantitative reverse transcriptase polymerase chain reaction （RT-PCR） for detection of Norovirus GI and GII types， respectively. Result： From 2018 to 2022， 155 commercially available bivalve samples were collected， and 29 samples were positive for Norovirus， with a total positive detection rate of 18.71%. The positive detection rate of type GII （10.97%） was higher than that of type GI （4.52%）， and the difference was statistically significant （P＜0.05）. The detection rate difference between different quarters was statistically significant （P＜0.05）， with the highest detection rate in the first quarter （50.00%）. Conclusion： There is Norovirus contamination in bivalves sold in Zibo city， with the main type being GII. The detection rate was the highest in the first quarter， and it is necessary to strengthen monitoring and carry out relevant risk assessments to reduce the burden of foodborne diseases caused by Norovirus.

Keywords： bivalves; Norovirus; foodborne diseases

海产双壳贝类为滤食性生物，其特殊的滤食系统可以从水体中摄食有机物质，但也会富集环境中的有毒有害物质。人们生食被污染的双壳贝类会感染诺如病毒（Norovirus，NV），并引起急性胃肠炎[1-3]。

本研究采集2018—2022年在淄博市内农贸市场、超市或便利店售卖的双壳贝类样本，进行诺如病毒核酸检测，首次评估淄博市市售双壳贝类中诺如病毒的污染状况，为诺如病毒风险评估提供数据支持。

1 材料与方法

1.1 样品采集

于2018年1月—2022年12月，在淄博市的农贸市场、超市或便利店内购买双壳贝类，共计155份。样品采集后于4 ℃状态下送检并及时进行样本前处理。

1.2 仪器耗材

荧光定量PCR仪（新加坡，赛默飞Q5）、恒温振荡摇床、高速冷冻离心机。病毒核酸提取试剂盒（天隆科技）、MS2过程控制试剂盒（北京卓诚惠生）、诺如病毒GI/GII检测试剂盒（实时荧光PCR法，北京卓诚惠生技术有限公司）。

1.3 样本前处理

取5～10个独立贝类样本消化腺体，将消化腺分离剪碎后放入50 mL离心管，将其研磨充分。称取2 g置于15 mL的离心管中，加入2.0 mL蛋白酶K溶液和10 μL MS2（过程控制对照）混匀，在恒温振荡培养箱内剧烈振荡60 min（37 ℃、280 r·min-1），置于

60 ℃水浴15 min，最后在高速冷冻离心机内离心

5 min（3 000 r·min-1），并取上清于1.5 mL EP管中。

1.4 核酸提取及基因扩增

病毒提取和纯化使用商品化的RNA提取试剂盒（QIAGEN，货号52904），按照试剂盒的说明进行操作。采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应（Real-Time Fluorescence Quantitative Reverse Transcriptase Polymerase Chain Reaction，RT-PCR）进行诺如病毒两种亚型（GI和GII型）检测。按试剂盒的要求进行反应体系配制。样品有典型S型曲线且Ct≤36时，判定为诺如病毒阳性；样品无典型S型曲线或者其Ct≥40时，判定为诺如病毒阴性；36＜Ct＜40时，需再次进行检测，如果重测的Ct值仍在36～40，且有S型曲线，则判定为诺如病毒阳性。

1.5 质量控制

以无RNase超纯水为空白对照，不含诺如病毒的双壳贝类样品为阴性对照，阳性对照使用诺如病毒标准品（北京美正）。过程控制对照为噬菌体MS2，按照试剂盒要求做标准曲线。采用上述试剂盒要求的反应体系和参数进行检测，计算其回收率。如果回收率＜1%，需要重新进行检测。

1.6 统计学分析

采用SPSS 24.0软件进行数据统计分析，检出率的比较均采用χ2检验，检验水准α＝0.05。

2 结果与分析

2.1 淄博市2018—2022年双壳贝类水产品中NV检出情况

如表1所示，2018—2022年内采用RT-PCR法检测样本155份，阳性样本检出29份，阳性率为18.71%。其中，检出GII型17份（10.97%），GI型

7份（4.52%），GI和GII型混合阳性5份（3.23%），GI和GII阳性率差异有统计学意义（χ2=4.516，P＜0.05），以GII型为主。不同年度的阳性率无统计学意义（χ2=3.404，P＞0.05）。

2.2 2018—2022年不同来源双壳贝类水产品中NV检出情况

根据样品采集的来源，将样品分为农贸市场、超市和便利店两种。如表2所示，135份市售双壳贝类来源于农贸市场，检出NV阳性27份（20%）；20份来源于超市和便利店，检出NV阳性2份（10%），不同来源样品的NV阳性率差异无统计学意义（χ2=1.145，P＞0.05）。

2.3 不同季度NV检出情况

按照采集样品的时间，将全年分为4个季度：第一季度（1～3月）、第二季度（4～6月）、第三季度（7～9月）、第四季度（10～12月）。如图1所示，不同季度的检测结果中，第一季度的阳性率最高（50.00%），第四季度的阳性率最低（4.65%），差异有统计学意义（χ2=22.175，P＜0.05）。

3 结论与讨论

近年来，生食或者食用加热不足的双壳贝类而引起的诺如病毒疫情屡见不鲜[4-6]。山东半岛海岸线长，双壳贝类非常丰富，当地居民的饮食中常有双壳贝类，因此经常有感染诺如病毒的报道[7]。淄博市地处山东省中部，与沿海地区交通便利，市售海鲜种类十分丰盛。本研究显示，淄博市市售双壳贝类中存在诺如病毒污染，且第一季度阳性率最高，以GII型为主，此研究结果与苏来金等[8]的一致，也与淄博市人类诺如病毒感染的时间分布、病原学特征一致[9]，提示食用市售的双壳贝类存在一定致病风险。对市售双壳贝类中诺如病毒进行监测，可以对市售双壳贝类诺如病毒污染进行风险评估，预警人群感染诺如病毒的风险[10]。

针对淄博市双壳贝类中诺如病毒检出情况提出以下建议：①加强科普宣传教育，充分利用公众号、网络、报纸等媒体进行宣传，增强公众的食品安全风险意识，在食用双壳贝类时一定要去除消化腺类组织并煮熟；②加强市场销售环境的卫生清理，防止各类食品的交叉污染；③加强双壳贝类流通环节的监管，保证货物有清晰的溯源，在发生诺如病毒导致的胃肠炎疫情时能及时消灭传染源，减少损失，防止疫情进一步扩散。

参考文献

[1]朱晓露，刘彦凯，徐梦，等.连云港市2019年诺如病毒基因阳性双壳贝类中病毒的定量分析[J].江苏预防医学，2023，34（2）：206-208.

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[9]刘顺军，王延东，郝俊峰.2013—2018年淄博市食源性疾病监测结果分析[J].现代预防医学，2020，47（8）：1389-1392.

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