食品微生物检验菌落总数测定中纸片法的应用效果评价

作者: 刘迎


摘 要:目的:对食品微生物检验菌落总数测定中纸片法的应用效果进行评价。方法:选取生猪肉、湿豆腐、散装糕点、散装饼干、纯净水、新鲜牛肉、新鲜鸭肉、新鲜鸡肉、新鲜鱼肉、散装调味料、新鲜水果和牛奶制品各5份,分别采用平板计数法、纸片法检测菌落总数。比较两组方法测定菌落总数的变异系数、结果评价。结果:纸片法与平板计数法对各样品的菌落总数检出数差异无统计学意义(P>0.05),纸片法、平板计数法测定菌落总数的变异系数、结果评价基本一致(Z<2,P>0.05)。结论:纸片法应用于食品微生物检验菌落总数测定结果较为满意,值得推广。

关键词:食品;微生物检验;菌落总数;纸片法

To Explore the Application Value of the Paper Method for Determining the Total Number of Colonies in Food Microbiological Examination

LIU Ying

(Yanggu County Center for Disease Control and Prevention Laboratory, Liaocheng 252300, China)

Abstract: Objective: To evaluate the application effect of the paper method for determining the total number of bacterial colonies in food microbial examination. Method: Raw pork, wet tofu, bulk pastry, bulk biscuit, pure water, fresh beef, fresh duck, fresh chicken, fresh fish, bulk seasoning, fresh fruit and milk products were selected, and the total number of colonies was detected by plate counting method and paper method, respectively. The coefficient of variation of the total number of colonies measured by the two methods was compared and the results were evaluated. Result: There was no significant difference in the total number of colonies detected by disk method and plate counting method (P>0.05). The coefficient of variation and result evaluation of the total number of colonies measured by disk method and plate counting method were basically the same (Z<2, P>0.05). Conclusion: The application of disk method in the determination of the total number of bacterial colonies in food microbiological inspection is satisfactory and worthy of popularization.

Keywords: food; microbiological test; total number of colonies; paper disk method

食品中微生物菌落总数是反映食品卫生安全的重要指标,食品在生产、运输、储存等过程中容易受到微生物的污染,对食品微生物进行检验有助于判断食品污染情况,对食品生产、卫生管理等工作具有重要的指导意义。菌落总数是指食品样品经过处理、稀释、培养等后,1 g或1 mL食品样品检测出的细菌菌落总数。菌落总数测定的国家标准方法是平板计数法,但该方法检测过程相对复杂,检测效率较低,难以满足大批量的食品微生物检测需求,需要寻找更加快速、便捷的方法[1]。纸片法是一种新型的菌落总数检测方法,其主要使用测试片对菌落总数进行测定,具有操作简单快速、检测结果观察方便等优势。本研究采用纸片法、平板计数法检测食品微生物菌落总数并对比测定结果,对纸片法的应用效果进行评价。

1 材料与方法

1.1 材料与设备

选取生猪肉、湿豆腐、散装糕点、散装饼干、纯净水、新鲜牛肉、新鲜鸭肉、新鲜鸡肉、新鲜鱼肉、散装调味料、新鲜水果和牛奶制品,所有样品为市售。

3M Petrifilm菌落总数测试片(美国3M公司);平板计数法用平皿、琼脂培养基(上海申启生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 样品前处理

(1)固体食品的处理。将样品放在无菌操作台上进行处理,将肉类、水果进行切末,湿豆腐、糕点、饼干、调味料碾碎。无菌均质袋内装225 mL的稀释液,称取25 g上述样品装入袋内,使稀释液与样品混合。用拍击式均质器拍打无菌均质袋,时间2~3 min,获得食品样品匀液(1∶10)。

(2)纯净水的处理。使用无菌棉球蘸取适量的酒精,打开装纯净水的样品瓶,消毒瓶口。使用无菌吸管吸取纯净水25 mL,装入无菌锥形瓶(内装225 mL磷酸盐缓冲液),混匀,获得纯净水样品匀液(1∶10)。

(3)奶制品的处理。搅拌器搅拌均匀,称取

25 g检样,放入预热至45 ℃的装有225 mL灭菌生理盐水的锥形瓶中,振摇均匀,获得纯净水样品匀液(1∶10)。

(4)样品匀液制备。用无菌吸管吸取上述的样品匀液1 mL,装入无菌试管(内装稀释液9 mL)。另取无菌吸管反复吹打10~15次使样品液和稀释液充分混合,获得样品匀液(1∶100),继续按照上述方法继续制备10倍系列的稀释样品匀液。取样品匀液(1∶10)、样品匀液(1∶100),各吸取1 mL样品匀液加入无菌平皿内,每种做2个无菌平皿。同时,设置2个空白对照,即在无菌平皿内分别加入1 mL空白稀释液。

1.2.2 测定方法

取每种样品各5份作为实验对象,均分别采用纸片法、平板计数法进行检测,每种检测3次,计算平均值。

(1)纸片法。分别吸取实验样品的不同稀释度样品匀液1 mL,装入2个测试纸片中,盖好纸片,

36 ℃培养18~24 h,取出纸片进行菌落总数计数,计算平均值。

(2)平板计数法。将各实验样品的样品匀液均匀涂抹在平板上,加入营养琼脂,放入培养箱中培养48 h,培养温度为36 ℃,使微生物在平板上繁殖成为可见的菌落,将平板取出,根据说明书对平板的菌落进行计数,计算平均值。

1.2.3 观察指标

(1)观察纸片法、平板计数法对生猪肉、湿豆腐、散装糕点、散装饼干、纯净水、新鲜牛肉、新鲜鸭肉、新鲜鸡肉、新鲜鱼肉、散装调味料、新鲜水果和牛奶制品中菌落总数的测定结果。

(2)纸片法、平板计数法测定各样品菌落总数的变异系数(Coefficient of Variation,CV)、结果评价,其中结果评价采用“Z-比分数”进行评估,Z值<2表示满意。

1.3 统计学分析

用SPSS 25.0统计学软件分析,计量资料用x±s表示,进行t检验,计数资料用%表示,进行χ2检验,P<0.05表示有统计学意义。

2 结果与分析

2.1 纸片法、平板计数法测定菌落总数结果比较

如表1所示,采用纸片法与平板计数法检测生猪肉、湿豆腐、散装糕点、散装饼干、纯净水、新鲜牛肉、新鲜鸭肉、新鲜鸡肉、新鲜鱼肉、散装调味料、新鲜水果和牛奶制品的菌落总数,检出数据差异无统计学意义(P>0.05)。

2.2 纸片法、平板计数法测定菌落总数的变异系数、结果评价比较

如表2所示,纸片法、平板计数法测定菌落总数的变异系数、结果评价基本一致(Z<2,P>0.05)。

3 结论与讨论

微生物污染是食品卫生安全问题的重要原因,全球每年因食用受污染的食品而腹泻的人数达到6亿人,食品卫生安全问题较为突出,成为威胁人们健康的重要因素[2]。在此背景下,食品微生物检验工作显得尤为重要。目前,食品中菌落总数的测定方法较多,常用的有平板计数法、ATP生物荧光法、2,3,5-三苯基氯化四氮唑法、微菌落法等,但都具有操作较复杂、耗时较长、容易出现交叉污染、检测效率较低等情况,在检测任务较重的情况下应用受限。

平板计数法是检测菌落总数的重要方法,主要操作步骤是将待测食品样品涂在平板上,添加营养琼脂进行培养,经培养足够的时间后对生长的菌落进行计数,得到菌落总数。平板计数法需要做的前期准备和后期清洗消毒工作量较大,检测步骤相对烦琐,而食品检测工作中常会遇到大批量检测的情况,采用平板计数法检测时,烦琐的操作易导致交叉污染情况发生,而且检测速度较慢。纸片法是新开发的一种微生物检测方法,该方法可以减少大量的检测前期准备和后期清洗消毒工作,节约大量的时间,显著提高检测的效率,而且观察结果方便[3]。在国际上,一些商品化的细菌菌落总数测试片已得到了法国标准化协会、美国食品和药物管理局、美国公职分析化学师协会等权威机构的认可,在食品检测领域中有广泛的研究和应用前景。

在我国的食品检验相关研究中,张建军等[4]随机抽取生肉制品、豆制品、粮食制品、即食果蔬制品共112批进行菌落总数测定,检测方法为测试片法和平板计数法,结果显示两种方法的检测结果对数值差值的平均值|d log|=0.06(<0.5),配对t检验P=0.860(>0.05),两种方法对上述食品检验效能无明显差异。谢展华[5]随机购买饼干、糕点总计55份,分别采用纸片法、平板倾注法检测菌落总数,结果显示,两种方法对饼干、糕点样品菌落总数检测效果无明显差异(P>0.05)。张婧[6]研究显示,在饼干、蛋糕以及两份质控样品菌落总数的检测中,纸片法、平板计数法检测结果基本相符,两者无明显差异

(P>0.05)。本研究结果显示,纸片法与平板计数法对各样品的菌落总数检出数据差异无统计学意义,两种方法测定菌落总数的变异系数、结果评价基本一致(Z<2,P>0.05),与上述研究报道基本相符。这表明,纸片法应用于食品微生物菌落总数检测中的效果与平板计数法相当,具有较高的应用价值。

综上所述,纸片法应用于食品微生物检验菌落总数测定结果较为满意。该检测方法具有检测速度快速、方便的优势,前期的准备工作及检测后的消毒工作较少,适用于大批量食品样品的菌落总数检测工作,值得大力推广应用。

参考文献

[1]张俊.探讨食品微生物检验菌落总数测定纸片法的应用价值[J].世界最新医学信息文摘,2021,21(14):252-253.

[2]陈万胜,亓潇,王督.2016年-2019年河南省预包装食品中菌落总数检出情况分析[J].中国卫生检验杂志,2021,31(17):2126-2128.

[3]徐蕾蕊,付溥博,汪琦,等.测试片法在食品菌落总数检测中的应用研究[J].食品安全质量检测学报,2021,12(2):472-478.

[4]张建军,唐轶君,李晶,等.基于测试片法与平板计数法对不同类型食品中菌落总数结果的比较分析[J].食品安全质量检测学报,2021,12(14):5606-5612.

[5]谢展华.菌落总数测定纸片法用于食品微生物检验中的价值分析[J].中文科技期刊数据库(文摘版)医药卫生,2023(5):30-32.

[6]张婧.平板计数法与纸片法检测食品微生物菌落总数的比较分析[J].中国食品,2021(3):92.

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