猪肉中环丙沙星残留检测的不确定度评定
作者: 杜春雷
摘 要:本文对猪肉中环丙沙星残留检测的不确定度进行了评定。结果表明,分析检测过程中的不确定度来源主要包括标准溶液、仪器、回收率和测量重复性等。经评定,该方法测定猪肉中环丙沙星残留量的扩展不确定度为1.75 µg/kg。
关键词:不确定度;喹诺酮;猪肉
Evaluation of Uncertainty in Detection of Ciprofloxacin Residues in Pork
DU Chunlei
(Zhangjiakou Agricultural Product Quality and Safety Supervision and Inspection Center, Zhangjiakou 075000, China)
Abstract: In this paper, the uncertainty of determination of ciprofloxacin residues in pork was evaluated. The results show that the sources of uncertainty in the analysis and detection process mainly include standard solutions, instruments, recovery rates and measurement repeatability. The expanded uncertainty for the determination of ciprofloxacin residues in pork by this method was evaluated to be 1.75 µg/kg.
Keywords: uncertainty; quinolones; pork
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
环丙沙星标准物质[(100±0.10) µg/mL]:农业部环境保护科研监测所;液相色谱-质谱联用仪:G6470,安捷伦;分析天平:LE2002E,梅特勒;移液器:5~50 µL、100~1 000 µL,Thermo。
1.2 试验方法
1.2.1 标准溶液的配制
(1)环丙沙星中间液配制。用移液器移取1 mL环丙沙星至10 mL容量瓶,乙腈定容,浓度为10 µg/mL。
(2)环丙沙星工作液配制。用移液器移取1 mL标准中间液至10 mL容量瓶,乙腈定容,浓度为1 000 ng/mL。
(3)基质标准工作曲线。用移液器分别移取
20 µL、50 µL、100 µL、200 µL、500 µL和1 000 µL工作液至10 mL容量瓶,猪肉空白基质定容,浓度分别为2 ng/mL、5 ng/mL、10 ng/mL、20 ng/mL、50 ng/mL和100 ng/mL。
1.2.2 样品前处理
称取猪肉样品5.0 g,加20 mL 0.1 mol/L EDTA-Mcllvaine缓冲溶液,涡旋1 min,超声10 min,10 000 r/min离心5 min(4 ℃),提取3次,合并上清液。将待净化的上清液全部转移到已活化的HLB柱(200 mg,6 mL),弃去滤液,用2 mL 5%甲醇水淋洗,抽干小柱,用6 mL甲醇洗脱并收集。氮气吹干,用1 mL 0.2%甲酸水复溶,涡旋1 min,过0.22 µm滤膜,上机测定[1]。
1.2.3 色谱条件
C18色谱柱:50 mm×2.1 mm,1.9 µm;柱温:40 ℃,流速:0.2 mL/min;流动相:乙腈-0.2%甲酸水。
1.2.4 质谱条件
电离模式:ESI+;扫描方式:MRM;离子喷雾电压:500 V;离子化温度:300 ℃[2]。
1.3 结果计算
环丙沙星的计算公式如下:
(1)
式中:X为样品中组分含量,µg/kg;c为测定液中组分浓度,ng/mL;V为定容体积,mL;m为样品质量,g。
2 结果与分析
2.1 不确定度来源分析
不确定度的来源分析如图1所示。
2.2 不确定度的评定
2.2.1 样品称量引入的相对标准不确定度ur(W样)
根据天平检定证书,当称量5.00 g时,最大允许误差为0.02 g,假设均匀分布,k=,试验称量样品的平均质量为5.02 g,则样品称量引入的相对标准不确定度为:
2.2.2 样品溶液定容引入的相对标准不确定ur(V样)
样品溶液定容使用1 000 µL移液器,根据《移液器检定规程》,移液器的容量允差为0.000 2 mL,假设均匀分布,则样品溶液定容引入的相对标准不确定度为:
2.3 仪器引入的相对标准不确定度ur(E液质)
根据液质校准证书,峰面积测量重复性为1.2%,假设均匀分布,则仪器引入的相对标准不确定度为:
2.4 测量重复性引入的相对标准不确定度ur(X样)
平行制备10份样品进行测定,结果见表1。由表1可知,测量重复性引入的相对标准不确定度为:
2.5 回收率引入的相对标准不确定度ur(R)
对加标样品进行测定,回收率分别为93.52%、94.22%、95.36%、93.18%和92.40%。根据t检验,则回收率引入的相对标准不确定度为:
当置信度为95%,n-1=4,查t值临界值表:
t(0.05,4)=2.776,与13.69相比,需要回收率校正[3]。
2.6 标准溶液纯度引入的相对标准不确定度ur(P标)
环丙沙星标准溶液不确定度为0.10 µg/mL,按均匀分布,标准溶液纯度引入的相对标准不确定度为:
2.7 标准工作曲线配制引入的相对标准不确定度ur(V标)
配制过程使用容量瓶8次(10 mL)、1 000 µL移液枪(分别移取100 µL、200 µL、500 µL各1次,1 000 µL 3次),50 µL移液枪(分别移取20 µL、50 µL各1次),依据《常用玻璃量器检定规程》和《移液器检定规程》,假设均匀分布[4],结果见表2。
2.8 标准曲线拟合引入的相对标准不确定度ur(C标)
配制6种浓度,每个浓度测定1次,见表3。计算标准溶液峰面积残差的标准差,m为每个浓度检测次数,m=1;n为标准曲线浓度点数[5],n=6。
由于5 621.825,则标准曲线拟合引入的相对标准不确定度为:
式中:a为线性方程斜率;p为样品溶液检测次数,平行样为2;n为标准溶液检测总次数,6×1=6;为样品溶液浓度平均值,51.19 ng/mL;C为标准曲线配制浓度平均值,31.167 ng/mL;C实为标准溶液实测浓度,ng/mL。
2.9 扩展不确定度
环丙沙星的合成相对标准不确定度ucr(X)和合成不确定度uc(X)计算如下:
扩展不确定度U=k·uc(X),取包含因子k=2,扩展不确定度U=1.75 µg/kg。
3 结论
测定猪肉中环丙沙星残留量的不确定度影响因素包括仪器的稳定性、标准溶液纯度和配制以及前处理重复性等。通过评定发现,其中影响最大的为标准曲线拟合,试验中可以通过增加标准曲线检测次数、标准曲线点数等,减小标准曲线拟合引入的不确定度,进而减小最终结果的不确定度,提高实验准确性。
参考文献
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