液相色谱法测定半成品泡菜中乙二胺四乙酸二钠残留量
作者: 周至均 王丽兰 罗红梅 王莎莎
摘 要:本文建立了一种采用液相色谱法检测半成品泡菜中乙二胺四乙酸二钠残留量的方法。半成品泡菜样品均质后加水超声提取,在提取液中加入氯化铁衍生,经络合反应后混匀、离心,取上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤,滤液立即供液相色谱测定,实验采用XDB-C18柱分离,在260 nm波长处通过保留时间定性和外标法定量的分析方法进行测定,整个分离过程在20 min内完成。结果显示,乙二胺四乙酸二钠在0~80.0 μg·mL-1线性关系良好,相关系数为1,样品加标回收率为85.5%~98.3%,相对标准偏差较小。该方法准确度、精密度均较高,且操作简便、灵敏度高,对半成品泡菜进行测试,均获得了满意的结果,适合用于半成品泡菜中乙二胺四乙酸二钠残留量的测定。
关键词:半成品泡菜;乙二胺四乙酸二钠;液相色谱法;残留量
Determination of Disodium Ethylenediaminetetraacetic Acid Residues in Semi-Finished Kimchi by Liquid Chromatography
ZHOU Zhijun, WANG Lilan*, LUO Hongmei, WANG Shasha
(National Kimchi Quality Inspection Center (Sichuan), Meishan 620010, China)
Abstract: A method for the determination of disodium ethylenediaminetetraacetic acid in semi-finished pickles by liquid chromatography was established.The semi-finished kimchi sample was homogenized and then extracted with water and ultrasonically, and ferric chloride was added to the extract for derivatization. After complexation reaction, it was mixed evenly and centrifuged. The supernatant was filtered through a 0.45 μm microporous membrane, and the filtrate was immediately supplied to liquid chromatography. The experiment adopts XDB-C18 column separation, at the wavelength of 260 nm, it is determined by the analytical method of retention time qualitative and external standard method, and the whole separation process is completed within 20 min.The results show that disodium EDTA was in the concentration range of 0~80.0 μg·mL-1, the linear correlation coefficient was 1, the recovery rate of sample addition was in the range of 85.5%~98.3%, and the relative standard deviation was small. The method has high accuracy and precision, simple operation and high sensitivity. The semi-finished kimchi has been tested and satisfactory results have been obtained, which is suitable for the determination of disodium EDTA residues in semi-finished kimchi.
Keywords: semi-finished kimch; disodium EDTA; liquid chromatography; residue
我国是泡菜生产加工大国,泡菜也是我国传统的消费食品,产品种类多,消费量较大[1]。但由于土壤污染,蔬菜铅含量较高,泡菜企业在生产加工过程中,加人一定量的乙二胺四乙酸二钠,不仅可以降低泡菜中的铅含量,其还具有抗氧化和防腐功能,具有良好的抗菌活性,可以防止食品褐变。《食品安全国家标准 食品添加剂使用标准》(GB 2760—2014)规定在腌渍蔬菜中乙二胺四乙酸二钠的最大使用量为0.25 g·kg-1,但泡菜企业在生产加工过程中,由于EDTA二钠混合不均、加入量不同等因素,在经过脱铅工艺后,可能会造成泡菜中EDTA二钠残留量超标[2]。现有检测标准只适用于成品样品,而半成品泡菜与成品泡菜在很多方面都有所差异[3-4]。因此,本文建立了一种操作简单且成本低的半成品泡菜中EDTA二钠含量的检测方法,可用于企业在生产过程中对半成品泡菜中EDTA二钠含量进行快速检测。
1 材料与方法
1.1 材料与试剂
乙二胺四乙酸二钠(EDTA二钠),纯度:99.97%,标准物质GBW(E)060311;甲醇,色谱纯;三氯化铁,四丁基氢氧化铵,实验用水为电阻率18.2 MΩ·cm的超纯水;0.45 μm水系微孔滤膜。
1.2 仪器与设备
液相色谱仪Agilent1260(配DAD检测器),美国安捷伦科技公司;漩涡混合器,上海谷宁仪器有限公司;超声波清洗器,昆山市超声仪器有限公司;万分之一电子天平ML 104T,梅特勒-托利多仪器有限公司。
1.3 溶液配制
三氯化铁溶液:称取0.54 g三氯化铁溶于90 mL水中,用纯水溶解并定容至100 mL容量瓶中混匀。
四丁基氢氧化铵溶液:吸取40%四丁基氢氧化铵水溶液3.25 mL,置于烧杯中,加水130 mL,再用甲酸稀溶液将pH调至3.30,将此溶液转移至1 000 mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度,摇匀,脱气后备用。
1.4 实验方法
1.4.1 样品预处理
从腌制池中取出通过加入EDTA处理过的半成品泡菜样品,按照泡菜加工工艺用自来水冲洗2 min,沥干后将蔬菜放入空烧杯中,作为待测样品。取有代表性样品约500 g用组织捣碎机捣碎,装入一次性密封袋中保存。称取约5.0 g样品于50 mL具塞玻璃管中,加入20 mL蒸馏水、1 mL三氯化铁溶液,混匀后于超声波中超声20 min,使之充分衍生化。冷却至室温后,用蒸馏水定容至刻度混匀。将衍生化样品溶液在旋涡混合器上混合2 min,在离心机中以4 000 r·min-1离心5 min。取上清液过
0.45 μm水系滤膜后供液相色谱仪测定[5]。
1.4.2 标准曲线配制
准确称取0.100 0 g乙二胺四乙酸二钠(EDTA二钠),用纯水溶解并定容至100 mL容量瓶中,得到EDTA二钠标准中间溶液(1 mg·mL-1);分别吸取EDTA二钠标准中间溶液0 mL、0.25 mL、0.50 mL、1.00 mL、2.00 mL和4.00 mL于50 mL容量瓶中,分别加入1 mL三氯化铁溶液,用蒸馏水定容至刻度,摇匀后,即得到EDTA二钠标准系列溶液衍生物,同时做标液空白,分别含EDTA二钠0 μg·mL-1、5.0 μg·mL-1、10.0 μg·mL-1、20.0 μg·mL-1、40.0 μg·mL-1和80.0 μg·mL-1,临用时配制。
1.4.3 色谱条件
色谱柱:迪马C18柱(250 mm×4.6 mm,粒度5.0 μm);泵:四元泵;流动相:四丁基氢氧化铵水溶液∶甲醇=90∶10;流速:1 mL·min-1;柱温:35 ℃;检测器:二极管阵列检测器,检测波长260 nm;进样量:20 μL。
2 结果与分析
2.1 检测波长的选择
在190~400 nm处对EDTA二钠标准系列溶液衍生物进行扫描,结果显示在250~260 nm处有最大吸收,如图1所示。为了减少干扰杂峰,选择波长为260 nm进行检测。
2.2 色谱图
将配制好的EDTA二钠标准系列溶液衍生物和样品预处理后得到的滤液在上述1.4.3条件下测定,得到EDTA二钠标准溶液衍生物色谱图(图2)和样品中EDTA二钠衍生物色谱图(图3),走样时间22 min,标准品保留时间在19 min左右。
2.3 线性范围和检测限
在选定的色谱条件下,进样20 μL,以EDTA二钠质量浓度为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准曲线,计算回归方程。回归方程为y=6.830 2x-0.198 3,相关系数R2=1,说明在0~80.0 μg·mL-1存在良好线性关系,根据信号与噪声比值等于10时作为定量检出限,得出本方法定量检出限为20 mg·kg-1。
2.4 方法学验证实验
选择半成品泡青菜为样品,称取样品后精密添加3种浓度标准品,分别按照1.4.1进行样品预处理后,按1.4.3条件测定。加标回收率和相对标准偏差见表1。
2.5 脱铅后样品EDTA二钠残留量
称取脱铅后的半成品泡菜样品5 g左右,以相同的仪器条件测定脱铅后样品中EDTA二钠残留量。经检测,处理后的青菜半成品EDTA二钠残留量为0.118 g kg-1,豇豆半成品EDTA二钠残留量为0.082 g·kg-1,检测结果较为稳定。
3 结论
加入适量食品级乙二胺四乙酸二钠对半成品泡菜进行铅处理后,采用液相色谱法测定脱铅后样品中EDTA二钠残留量,该法操作简单、快速,具有准确度高和精密度好等优点,可为半成品泡菜中EDTA二钠残留量的检测提供参考。
参考文献
[1]梁勇.推动眉山市泡菜产业高质量发展的建议[J].中国食品工业,2022(6):20-53.
[2]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会.食品安全国家标准 食品添加剂使用标准:GB 2760—2014[S].北京:中国标准出版社,2014.
[3]中华人民共和国国家质量监督检验检疫总局.出口食品中乙二胺四乙酸二钠的测定:SN/T 3855—2014[S].北京:中国标准出版社,2014.
[4]中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会,国家食品药品监督管理总局.食品安全国家标准 食品中乙二胺四乙酸盐的测定:GB 5009.278—2016[S].北京:中国标准出版社,2016.
[5]徐清萍,法子柱,李雯.微生物群落结构对泡菜质量的影响研究进展[J].中国调味品,2022,47(6):200-203.
作者简介:周至均(1979—),男,四川犍为人,本科,高级工程师。研究方向:食品安全、食品工艺。
通信作者:王丽兰(1985—),女,彝族,云南开远人,硕士,高级工程师。研究方向:食品质量分析。E-mail:w131762@163.com。