中药枇杷花药用部位表述的合理性研究
作者： 胡孔兴 何鹏
摘要 ［目的］研究中药枇杷花药用部位与非药用部位的差异，以及非药用部位混入的影响。［方法］色谱柱SHIMSEN Anklyo C18（4.6 mm×100 mm，5 μm），流动相为甲醇（A）-0.1%醋酸铵溶液（B），梯度洗脱；流速1.0 mL/min；检测波长210、355 nm；柱温35 ℃；进样量10 μL；测定中药枇杷花药用部位和非药用部位中金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮苷、槲皮素、熊果酸、齐墩果酸、科罗索酸这7种成分的含量，并对数据进行分析。［结果］枇杷花的花和花蕾中各成分的含量和分布规律较为接近；其他部位中各成分的含量和分布规律与枇杷花的花或花蕾比较具有一定差异。［结论］枇杷花的药用部位表述为“干燥带花蕾的花序”要更为清晰合理。
关键词 枇杷花；活性成分；药用部位；非药用部位
中图分类号 R 284 文献标识码 A
文章编号 0517-6611（2024）22-0167-04
doi：10.3969/j.issn.0517-6611.2024.22.035
开放科学（资源服务）标识码（OSID）：
Research on the Rationality of Describing the Medicinal Parts of Loquat Flower
HU Kong-xing，HE Peng
（Wuhu Testing Center for Food and Drug Control，Wuhu，Anhui 241000）
Abstract ［Objective］To study the differences between medicinal and non medicinal parts of loquat flowers，as well as the effects of mixing non medicinal parts.［Method］HPLC was performed on a column of SHIMSEN Anklyo C18（4.6 mm×100 mm，5 μm） using methanol（ A） and 0.1% ammonium acetate（ B） as the mobile phase in a gradient elution;the flow rate was 1.0 mL/min;the detection wavelength was 210 and 355 nm;the column temperature was 35 ℃and the injection volume was 10 μL;determined the content of seven chemical components，including hyperoside，isoquercitrin，quercitrin，quercetin，ursolic acid，oleanolic acid and corosolic acid，in the medicinal and non medicinal parts of loquat flowers;and analyzed the data.［Result］The content and distribution patterns of various chemical components in the flowers and buds of loquat flowers were relatively similar;there were certain differences in the content and distribution patterns of various chemical components in other parts compared to the flowers or buds of loquat flowers.［Conclusion］The medicinal part of loquat flowers is more clearly and reasonably described as a “dry inflorescence with buds”.
Key words Loquat flowers;Active ingredients;Medicinal parts;Non medicinal parts
枇杷花为蔷薇科植物枇杷 ［Eriobotrya japonica（Thunb.）Lindl.］的干燥花蕾及花序［1］，主产于四川，江苏、浙江等地亦产［2］，其药用历史由来已久，始载于明代《本草纲目》［3］，具有疏风止咳的功效［4］。现代研究表明，枇杷花富含多种活性成分，如绿原酸、类黄酮、槲皮苷、异槲皮苷、山楂酸、熊果酸、齐墩果酸等［5］。我国是世界上最大的枇杷生产国，且枇杷的花期长，花量多［6］，具备巨大的应用及研究潜力。四川、安徽等地也针对枇杷花制定了相关标准，其中对其药用部位的规定为“干燥花”［7］、“干燥花序”［8］、“干燥花蕾”［9］或“干燥带花蕾的花序”［10］等，但笔者在日常研究及工作中发现，市售及日常使用的枇杷花药材或饮片中多为花蕾，并带有少量或大量已开放的花，且发现多数枇杷花药材及饮片中混有部分枇杷叶，或留有较长花梗。关于此种现象是否合理，以及对药用效果是否有影响，尚未得到考证及研究。因此，此次研究选取了枇杷花中研究较多且药效作用比较明确的异槲皮苷、熊果酸、金丝桃苷、槲皮素、齐墩果酸、槲皮苷、科罗索酸这7种有效成分为指标性成分，建立枇杷花多成分同时测定的分析方法，对不同产地的枇杷花药用部位及非药用部位进行有效成分分析，以期为中药枇杷花的资源开发利用与质量控制提供科学依据。
1 试验仪器与试药
1.1 仪器
赛默飞UltiMate 3000液相色谱仪（配备DAD）；梅特勒XP205电子天平；赛多利斯ME36S电子分析天平；elma P120H超声仪。
1.2 试药
异槲皮苷（ 批号111809-201804，含量97.2%） 、金丝桃苷（ 批号111521-201809，含量94.9%） 、槲皮素（批号100081-201610，含量99.8%）、熊果酸（ 批号110742-201823，含量99.9%）、槲皮苷（ 批号111538-202007，含量 93.5%）、 齐墩果酸（批号110709-201808，含量91.1%） 均购自中国食品药品检定研究院，科罗索酸（ 批号drk-1416-980219，含量98.0%） 购自西安汇林生物科技有限公司；甲醇（色谱纯）；超纯水；其他试剂均为分析纯。
试验用枇杷花分别为四川产枇杷花（采购自安徽亳州药材市场）、福建产枇杷花（采购自安徽亳州药材市场）、广东产枇杷花（采购自广西玉林药材市场），经芜湖市食品药品检验中心中药室鉴定为蔷薇科植物枇杷的花，试验所用枇杷花的花、花蕾、叶、花梗均分离自各相应批次。
2 方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱为SHIMSEN Anklyo C18（4.6 mm×100 mm，5 μm），流动相A为甲醇，B为0.1%醋酸铵溶液，按表1规定进行梯度洗脱；流速1.0 mL/min；柱温35 ℃；检测波长210 nm（齐墩果酸、科罗索酸、熊果酸）、355 nm（槲皮苷、槲皮素、异槲皮苷、金丝桃苷）；进样量10 μL。
2.2 对照品溶液的制备
取对照品异槲皮苷、金丝桃苷、槲皮素、熊果酸、槲皮苷、齐墩果酸、科罗索酸适量，精密称定，加甲醇溶解并稀释，分别制成适宜浓度的对照品贮备液。精密量取各对照品贮备液适量置同一容量瓶中，加甲醇稀释，摇匀，制成每1 mL含异槲皮苷196.0 μg、金丝桃苷469.6 μg、槲皮素224.0 μg、熊果酸481.6 μg、槲皮苷217.6 μg、齐墩果酸388.8 μg、科罗索酸380.0 μg的混标溶液，作为对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备
精密称取枇杷花各部位的样品粉末（过24目筛）1 g，置于100 mL的具塞磨口锥形瓶中，精密加入25 mL甲醇试剂，称重，超声处理（功率600 W，频率37 kHz）30 min，放冷至室温，再次称重，用甲醇补足所减少的重量，摇匀后，滤过，取续滤液。
2.4 方法学考察
2.4.1 线性关系考察。取“2.2”项下混标溶液，并加甲醇逐级稀释，按照“2.1”色谱条件分别进行测定，以进样浓度为横坐标（X，μg/mL）、峰面积为纵坐标（Y）建立标准曲线，结果详见表2。结果显示，相关系数（r）均为0.999 9，表明所建立的试验方法和选用的分析仪器具有良好的适用性。
2.4.2 精密度试验。精密吸取同一混标溶液10 μL，注入液相色谱仪，连续测定6次，记录HPLC色谱图，测定相应成分的峰面积。异槲皮苷、熊果酸、金丝桃苷、槲皮素、齐墩果酸、槲皮苷、科罗索酸的峰面积的 RSD 分别为0.91%、0.84%、0.72%、1.28%、1.31%、1.19%、1.01%，表明该仪器精密度良好。
2.4.3 稳定性试验。精密吸取同一枇杷花供试品溶液10 μL，分别在0、4、8、12、24、48 h进样测定，记录HPLC色谱图，测定相应成分的峰面积。异槲皮苷、熊果酸、金丝桃苷、槲皮素、齐墩果酸、槲皮苷、科罗索酸的峰面积的RSD 分别为 0.95%、0.78%、0.67%、0.93%、0.82%、1.01%、0.95%，表明供试品溶液在48 h内稳定。
2.4.4 重复性试验。分别取同一份枇杷花样品粉末（过24目筛），平行制备供试品溶液6份，记录HPLC色谱图，测定相应成分的峰面积。计算异槲皮苷、熊果酸、金丝桃苷、槲皮素、齐墩果酸、槲皮苷、科罗索酸的峰面积的 RSD分别为0.35%、0.74%、0.52%、0.87%、1.49%、0.91%、1.13%，表明供试品制备方法重复性良好。
2.4.5 回收率试验。精密称取6份已知含量的枇杷花样品粉末（过24目筛）0.5 g，置于100 mL锥形瓶中，分别精密添加相应含量的混标液，测定相应成分的峰面积，计算各成分的回收率以及各回收率的 RSD。结果发现，异槲皮苷、熊果酸、金丝桃苷、槲皮素、齐墩果酸、槲皮苷、科罗索酸的平均回收率分别为 97.53%、98.24%、100.31%、103.15%、96.49%、101.11%、104.05%，RSD 均小于3%，符合定量分析要求。
2.5 样品的含量测定
取各批次枇杷花不同部位的粉末（过24目筛）约1 g，精密称定，按照“2.3”供试品溶液制备方法制备所需溶液，按“2.1”色谱条件进行测定分析，记录熊果酸、金丝桃苷等7种有效成分的峰面积，然后采用外标法计算样品中各成分的含量，所得结果见表3，混合对照品和各样品典型色谱图见图1。
将得到的枇杷花各部位7种有效成分含量测定数据（表3）使用SPSS 19.0软件采用t检验进行分析比较，结果显示各批次枇杷花的花蕾与花的成分含量差异不显著（P>0.05），结合含量测定数据和色谱图来看，发现花和花蕾中这7种有效成分的含量和分布规律较为接近。而枇杷叶中这7种有效成分的含量与枇杷花的花蕾和花进行比较，差异显著（P<0.05），结合含量测定数据来看，枇杷叶中含量较高的有效成分为熊果酸和科罗索酸，均远高于同批次的花和花蕾，此外枇杷叶中的金丝桃苷和异槲皮苷远低于花和花蕾，表明枇杷叶中这7种有效成分的含量及分布的规律与花或花蕾相比具有一定差异。枇杷花的花梗与花蕾和花进行比较，差异不显著（P>0.05），但结合含量测定数据和色谱图来看，花梗与花或花蕾的有效成分含量分布规律并不一致，花梗中槲皮苷、科罗索酸、齐墩果酸、熊果酸含量较高，金丝桃苷、异槲皮苷、槲皮素的含量则极低，且远低于同批次的花和花蕾，但在枇杷花的花和花蕾中金丝桃苷、熊果酸、异槲皮苷、槲皮素的含量相对较高，其中金丝桃苷含量远高于同批次其他部位。