气相色谱法测定草鱼中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考与氟苯尼考胺残留量

摘 要：目的：建立气相色谱法测定草鱼中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考与氟苯尼考胺等4种抗生素残留量的方法。方法：在碱性条件下用乙酸乙酯提取抗生素残留物，正己烷去脂，MCX固相萃取小柱净化，再经硅烷化试剂衍生化后供气相色谱检测，峰面积外标法定量。结果：4种抗生素组分在各自浓度范围内线性关系良好，方法检出限为0.1～0.3 μg·kg-1、定量限为1.0～3.0 μg·kg-1，加标回收率为82.8%～107.5%，相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）为1.05%～5.99%。结论：该方法灵敏度高、准确性好，适用于草鱼中4种抗生素残留量的分析检测。

关键词：气相色谱法；草鱼；氯霉素类药物；抗生素

Determination of Chloramphenicol， Thiamphenicol， Florfenicol， and Florfenicol Amine Residues in Grass Carps by Gas Chromatography

ZHENG Weiling

（Shenzhen Academy of Metrology & Quality Inspection， Shenzhen 518000， China）

Abstract： Objective： To establish a gas chromatography method for determining the residues of four antibiotics， including chloramphenicol， thiamphenicol， florfenicol， and florfenicol amine， in grass carp. Method： Antibiotic residues were extracted with ethyl acetate under alkaline conditions， defatted with n-hexane， purified with MCX solid-phase extraction column， derivatized with silanization reagent， and detected by gas chromatography. The peak area was quantified by external standard method. Result： The four antibiotic components showed good linear relationships within their respective concentration ranges. The detection limit of the method was 0.1～0.3 μg·kg-1， the quantification limit was 1.0～3.0 μg·kg-1， the recovery rate was 82.8%～107.5%， and the relative standard deviation （RSD） was 1.05%～5.99%. Conclusion： This method has high sensitivity and good accuracy， and is suitable for the analysis and detection of four antibiotic residues in grass carp.

Keywords： gas chromatography; grass carp; chloramphenicol drugs; antibiotic

氯霉素类药物主要包括氯霉素（Chloramphenicol，CAP）、甲砜霉素（Thiamphenicol，TAP）、氟苯尼考（Florfenicol，FF），属于广谱性抗生素，可用于防治牲畜、家禽及水产动物等细菌性疾病[1]。目前，我国已禁止畜禽水产养殖业将CAP用于可食用动物，TAP、FF则是限量使用。氟苯尼考胺（Florfenicol Amine，FFA）是FF在动物体内的主要代谢物之一，可作为其残留标示物[2]。近年来，在我国部分地区的水产养殖过程中仍存在违规或超限量使用CAP、TAP、FF等现象。因此，加强水产品中氯霉素类药物残留的监控检测显得至关重要[3]。本研究参照《食品安全国家标准 水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的测定 气相色谱法》（GB 31656.16—2022）[4]，建立了气相色谱测定草鱼中CAP、TAP、FF与FFA残留量的分析方法，旨在为水产品中氯霉素类药物残留监测提供技术支持。

1 材料与方法

1.1 材料与试剂

草鱼，购自某水产市场；乙腈中4种抗生素混合标准品（编号82113），包含氯霉素（Chloramphenicol，CAP）、甲砜霉素（Thiamphenicol，TAP）、氟苯尼考（Florfenicol，FF）和氟苯尼考胺（Florfenicol Amine，FFA），坛墨质检科技股份有限公司；乙腈、甲醇、正己烷、乙酸乙酯和甲苯，均为色谱纯，德国默克公司；N，O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）、三甲基氯硅烷（TMCS），均为分析纯，上海麦克林化学试剂有限公司；MCX固相萃取柱（60 mg/3 mL），山东邦凯新材料有限公司。

1.2 仪器与设备

TRACE 1310气相色谱仪（配备ECD检测器），美国赛默飞世尔公司；GL2202-1SCN分析天平（精度0.01 g），德国赛多利斯公司；HSC-B水浴氮吹仪，天津市恒奥科技发展有限公司；ASE-12固相萃取装置，天津奥特赛恩斯仪器有限公司。

1.3 实验方法

1.3.1 标准溶液配制

准确吸取1.0 mL乙腈中4种抗生素混标溶液（CAP浓度为15 μg·mL-1，TAP、FF、FFA浓度均为150 μg·mL-1）于5 mL容量瓶中，用乙腈稀释、定容至刻度，配制成CAP浓度为3 μg·mL-1，TAP、FF、FFA浓度均为30 μg·mL-1的4种抗生素混合标准中间溶液。

分别吸取3.5、5.0、16.5、50.0、165.0 μL和500.0 μL 4种抗生素混合标准中间溶液于10 mL容量瓶中，用乙腈稀释、定容至刻度，配制成CAP浓度为1.05、1.50、4.95、15.00、50.00 μg·L-1和150.00 μg·L-1，TAP、FF、FFA浓度为10.5、15.0、49.5、150.0、500.0 μg·L-1和1 500.0 μg·L-1的4种抗生素混合系列标准溶液。

1.3.2 样品前处理

（1）样品提取净化。称取5 g（精确至0.01 g）经均质后的草鱼试样于50 mL玻璃离心管中，加入20 mL乙酸乙酯-氨水（体积比，98+2），置于旋涡混合器上涡旋1 min，再置于超声清洗器中超声提取15 min后，4 000 r·min-1离心5 min，吸取上清液转移入100 mL鸡心瓶中，将离心管中的残渣重复提取1次，合并两次提取离心后的上清液于鸡心瓶中，加入3 mL 5%乙酸溶液，涡旋混匀，置于水温40 ℃的旋转蒸发仪上旋蒸至约1.5 mL，待净化。

将待净化液移至10 mL离心管中，取1.5 mL 5%乙酸溶液洗涤鸡心瓶，洗涤液并入离心管中，加入5 mL正己烷，置于旋涡混合器上涡旋1 min，然后4 000 r·min-1离心5 min，吸取水层，再加入5 mL正己烷重复脱脂1次，吸取水层，备用。

将MCX固相萃取小柱安装在固相萃取装置上，先后用3 mL甲醇、3 mL超纯水活化小柱，将脱脂后的备用液加入小柱中过柱，用2 mL 5%乙酸溶液淋洗，弃去淋洗液，用6 mL甲醇-氨水（体积比，98+2）洗脱，收集洗脱液于10 mL比色管中，置于水温65 ℃的氮吹仪上，缓缓通入氮气，蒸发至近干，再依次用1 mL甲醇、1 mL乙酸乙酯洗涤比色管壁，置于水温65 ℃的氮吹仪上通入氮气吹至近干，备用。

（2）试料与标液衍生化。①试料衍生化。向盛有备用试料的比色管中加入100 μL乙腈复溶，转移至2 mL棕色反应瓶中，再用100 μL乙腈清洗比色管并将清洗液移入棕色反应瓶，加入100 μL衍生化试剂，含BSTFA-TMCS（体积比，99+1），盖紧旋塞使用旋涡混合器涡旋10 s，然后置于40 ℃的烘箱中反应30 min。取出冷却至室温后，置于水温55 ℃的氮吹仪上通入氮气吹干，准确加入1.0 mL甲苯后涡旋混匀，待测。②标液衍生化。分别吸取1.0 mL 4种抗生素混合系列标准溶液至2 mL棕色反应瓶中，置于水温55 ℃的氮吹仪上通入氮气吹干，按照上述试料衍生化过程操作。

1.3.3 气相色谱条件

色谱柱：TG-5MS毛细管色谱柱（30 m×0.25 mm，0.25 μm）；载气：高纯氮，流速1.0 mL·min-1；进样方式：不分流进样；进样口温度：230 ℃；柱温程序：80 ℃保持1 min，以30 ℃·min-1升至280 ℃，保持12 min；ECD检测器温度：300 ℃；尾吹流量：25 mL·min-1。

2 结果与分析

2.1 线性关系与相关系数

以经衍生后的4种抗生素混合系列标准溶液的质量浓度（X）为横坐标，以各抗生素组分的峰面积（Y）为纵坐标，拟合标准工作曲线，获得标准曲线方程和相关系数r。由表1可知，4种抗生素组分在各自浓度范围内线性关系良好，相关系数r均大于0.999，符合《食品安全国家标准 化学分析方法验证通则》（GB 5009.295—2023）[5]规定。

2.2 检出限与定量限

称取5 g（精确至0.01 g）阴性草鱼试样，添加4种抗生素组分的混合标准溶液（CAP浓度为1.05 μg·L-1，TAP、FF、FFA浓度为10.5 μg·L-1），按1.3.2方法对试样进行处理，并采用1.3.3仪器条件进行测定。将4种抗生素组分色谱峰信噪比S/N≥3对应浓度作为方法检出限；信噪比S/N≥10对应浓度作为方法定量限，测得CAP方法检出限为0.1 μg·kg-1，TAP、FF、FFA方法检出限为0.3 μg·kg-1；CAP方法定量限为1.0 μg·kg-1，TAP、FF、FFA的方法定量限为3.0 μg·kg-1，均满足GB 31656.16—2022中灵敏度的要求。

2.3 准确度与精密度

称取18份5 g（精确至0.01 g）的阴性草鱼试样，每6份分为1组，分别添加5、165、500 μL的4种抗生素混合标准溶液（CAP浓度0.3 μg·mL-1，TAP、FF、FFA浓度均为3.0 μg·mL-1），制备成低浓度（CAP浓度为0.3 μg·kg-1，TAP、FF、FFA浓度为3.0 μg·kg-1）、中浓度（CAP浓度为9.9 μg·kg-1，TAP、FF、FFA浓度为99.0 μg·kg-1）、高浓度（CAP浓度为30.0 μg·kg-1，TAP、FF、FFA浓度为300.0 μg·kg-1）3个水平加标试样，按照1.3.2和1.3.3方法进行试样处理和测定。每个水平重复6次。由表2可知，4种抗生素组分的加标回收率为82.8%～107.5%，相对标准偏差（Relative Standard Deviation，RSD）为1.05%～5.99%，满足GB 31656.16—2022中准确度与精密度的要求。

3 结论

本研究建立了一种气相色谱法测定草鱼中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考与氟苯尼考胺残留量的方法。结果表明，4种抗生素组分在各自浓度范围内线性关系良好，方法的灵敏度、准确度与精密度均符合GB 31656.16—2022中的相关要求，可以满足检验检测机构对草鱼等水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考与氟苯尼考胺等4种抗生素残留量的检测需求。

参考文献

[1]杨秋红，艾晓辉，李荣，等.固相萃取-气相色谱法同时检测水产品中的氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺[J].分析试验室，2015，34（5）：533-537.

[2]郑陆红，张慧琼，陈茹，等.超高效液相色谱-串联质谱法同时测定动物组织中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和其代谢产物氟苯尼考胺残留量[J].现代食品，2022，28（20）：198-203.

[3]田卫政.液相质谱联用法测定淡水鱼及鸡蛋中氯霉素类化合物残留[J].食品工业，2024，45（9）：316-320.

[4]中华人民共和国农业农村部，中华人民共和国国家卫生健康委员会，国家市场监督管理总局.食品安全国家标准 水产品中氯霉素、甲砜霉素、氟苯尼考和氟苯尼考胺残留量的测定 气相色谱法：GB 31656.16—2022[S].北京：中国标准出版社，2022.

[5]中华人民共和国国家卫生健康委员会，国家市场监督管理总局.食品安全国家标准 化学分析方法验证通则：GB 5009.295—2023[S].北京：中国标准出版社，2023.

作者简介：郑炜玲（1995—），女，广东惠州人，本科，助理工程师。研究方向：食品检测、质量安全相关。