大肠埃希氏菌用于食品检验培养基质量控制的研究

培养基及试剂质量控制对于保证食品检测效果尤为重要，食品药品监督管理局等机构均构建了较为完善的培养基质控体系。依据《食品安全国家标准 食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》（GB 4789.28-2013）中的相关要求，在培养基微生物性能指标检测中运用菌株进行测试，可以从水中或者食品中分离菌株完成测试工作。大肠埃希氏菌是食源性疾病的主要病原菌之一，为了提升培养基的质量，本文设计了实验进行分析，研究来源于地表水、果仁菠菜的大肠埃希氏菌ATCC 25922，以更好地提升食品检验培养基的质量。

一、材料与方法

1.试验菌株。试验菌株选择菌种保藏中心的E.coli ATCC 25922、微生物菌种保藏管理中心的CICC 24652、E.coli CICC 24176。

2.培养基。本实验过程中选择的培养基有麦康凯琼脂（macconkey agar，MAC）、结晶紫中性红胆盐琼脂（violet red bile agar，VRBA）、营养琼脂（nutrient agar，NA）、HE琼脂（hektoen enteric agar，HE）、胰蛋白胨大豆琼脂（tryptic soy agar，TSA）、木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂（xylose lysine desoxycholate agar，XLD）、平板计数琼脂（plate count agar，PCA）、亚硒酸盐胱氨酸增菌液（selenite cystine broth，SC）、李氏增菌肉汤（Listeria enrichment broth base，LB1，LB2），以及Bolton肉汤、7.5%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、3%氯化钠碱性蛋白胨水、10%氯化钠胰酪胨大豆肉汤、胰酪胨大豆多粘菌素肉汤。

本试验使用的试管为缓冲动力硝酸盐发酵管（青岛海博生物技术有限公司）和黏液酸发酵管（广东环凯微生物科技有限公司）。

3.实验方法。（1）悬浮培养基的定量测试。针对测试菌株制备100CFU/mL-1000CFU/mL的工作菌悬液，制备10mL的磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline，PBS），在20℃-25℃的环境下放置45min，然后对菌落计数，PBS培养基稳定能力的评判标准为±50%的变化幅度。

（2）生长率的定量测试。结合食品安全培养基GB 4789.28-2013中的相关规定，菌株选择性分离培养基的生长率为1.0-0.1，EMB、VRBA、MAC、VRB-MUG琼脂于36℃±1℃环境下培养24h，液体培养基生长率≥0.7，菌株生长能力判断指标为菌落特征、生长率情况。

（3）鉴定培养基测试。针对对照菌株、测试菌株分别接种TSA培养基、BHI肉汤，在36℃环境下培养18h。

二、结果与分析

1.培养基生长率定量测试结果。结合GB 4789.28-2013的相关规定，大肠埃希氏菌培养基类别有TSA、NA、PCA，培养基质量合格的判断标准为菌株生长率≥0.7，菌株生长率与培养基促生长能力之间为正比关系。研究测试菌株的实际生长情况发现，TSA培养基上生长率为1.0、0.9、1.1，NA培养基上生长率为1.1、1.1、0.9，PCA培养基上生长率为1.0、0.9、0.9；测试菌生长能力良好，在培养基定量质控方面具有良好的运用价值。测试结果详见表1。

2.选择性增菌培养基测试结果。选择性增菌培养基只允许特定微生物繁殖，对其他微生物生长几乎都有抑制作用。大肠埃希氏菌对CIN-1培养基的测试结果为浅粉、粉红色，边缘不整齐，出现沉淀环；沙门氏菌显色培养基为黄色；O157显色培养基未生长，阪崎克罗诺杆菌培养基为白色；志贺氏菌显色培养基为黄色。CICC 24176生长未被抑制，菌株不同，导致出现特异性酶反应并出现一定的差异性，出现了菌株显色差异。2株测试菌株的生长特性有所不同，由此进行培基定性质控。详见表2。

3.选择性液体计数培养基测试结果。结合GB 4789.28-2013的相关要求，增菌培养基能够在特定微生物中繁殖，同时对部分微生物的生长培养具有一定的抑制作用。研究显示，菌株CICC 24652、ATCC 25922的生长情况均在一定程度上被抑制，CICC 24176的生长活动未被抑制，显示亚硒酸盐毒性对菌株CICC 24176不发生作用，原因是菌株CICC 24176中含有一定成分的特异性酶。菌株培养后菌落数＜110CFU，详见表3。

4.悬浮培养基测试结果。结合GB 4789.28-2013的相关规定，培养基合格的判断标准为菌落数变化±50%，测试方式为大肠埃希氏菌在大肠菌群、菌落总数、金黄色葡萄球菌PBS样品中放置45min，得出菌株在PBS中的稳定情况。测试结果显示，PBS菌落中E.coli CICC 24176的变动数值为9%、E.coli ATCC 25922的变动数值20%、E.coli CICC 24652的变动数值为2.2%，说明测试菌株具有较强的稳定性。详见表4。

5.鉴定培养基及试剂测试结果。研究大肠埃希氏菌对8种鉴定培养基的测试结果发现，在三糖铁琼脂中生长良好，A/A，产气，不产硫化氢；酪蛋白琼脂的菌落周围无透明圈，培养基由绿变蓝；醋酸盐阳性，培养基变蓝，在培养基鉴定上呈现出典型性特征，培养基实验结果表现为阴性。详见表5。

三、结论与讨论

本实验研究了食品培养基的生长特性，重点研究了菌株CICC 24652、CICC 24176的生长情况，由此来评判菌株测试在食品测控中的运用价值。实验结果显示，测试菌在培养基鉴定方面呈现出了不同的特征，CICC 24176的生长特性较为明显，两者在培养基的微生物指标评价上具有较强的相似性。

通过本文研究可知，大肠埃希氏菌质控菌株在食品质量安全检测方面具有较大的运用价值，大肠埃希氏菌中不同类别间的差异也比较明显。菌株CICC 24176在SC培养基的验证过程中不受限制，对SC培养液进行深度分析，显示亚硒酸盐难以抑制全部的大肠埃希氏菌，部分菌株超氧化物歧化酶的活性较强，能够提高食品的安全性，减少亚硒酸盐对食品的不良侵害。菌株CICC 24652的动力特性不显著，约一半大肠埃希氏菌中含有鞭毛，菌株鞭毛本身长短、个数等特性在一定程度上影响着大肠埃希氏菌的动力特性。

食物培养基质控菌株在选择层面，应当保证菌株生长特性的典型性，使其能够符合相关的测试需求，并且注重不同菌株间的差异性。本次实验选择的菌株符合实验要求，实验具有较强的代表性，对食品安全检测具有较强的参考意义。

作者简介：王绪龙（1978-），男，汉族，山东莒南人，工程师，大学本科，研究方向为食品检测。